VEGF在乳腺癌組織中的表達(dá)及其臨床意義

王 偉 曹蘇生 鹿存濤 瞿國峰

東南大學(xué)附屬徐州市中心醫(yī)院甲乳科，江蘇徐州 221009

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤，部分地區(qū)已經(jīng)位居女性惡性腫瘤發(fā)病的首位[1]。乳腺癌的預(yù)后與其早期出現(xiàn)的轉(zhuǎn)移和侵襲相關(guān)。研究證實(shí)[2]，在腫瘤的生長過程中，需要大量新生血管的生成，為腫瘤的轉(zhuǎn)移提供條件，血管內(nèi)皮生長因子（Vascular Endothelial Growth Factor，VEGF） 是目前發(fā)現(xiàn)的特異性最高的促血管生成因子，VEGF 在腫瘤的生長及轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮了重要作用。為研究乳腺癌中VEGF的表達(dá)與臨床病理指標(biāo)之間的關(guān)系，探討VEGF 在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用，該研究2011年3月—2012年12月采用免疫組化等方法檢測VEGF 在乳腺癌中的表達(dá)，探討與臨床病理的相關(guān)性，期望為乳腺癌的診治和預(yù)后判斷提供理論依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇徐州市中心醫(yī)院甲狀腺乳腺科經(jīng)手術(shù)治療的乳腺癌患者50例，均為女性患者，術(shù)后病理證實(shí)為浸潤性導(dǎo)管癌，其中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性27例，陰性23例，絕經(jīng)前患者29例，絕經(jīng)后21例。術(shù)前均未采用新輔助化療或內(nèi)分泌治療等。標(biāo)本常規(guī)采用4%甲醛溶液固定后石蠟包埋備用。另取50例癌旁組織作為對(duì)照組（取材要求距離腫瘤>5 cm，病理證實(shí)為正常組織）。

1.2 主要試劑

鼠抗人VEGF 單克隆抗體及免疫組化試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，操作步驟按說明書進(jìn)行。

1.3 方法

將所有蠟塊做4 μm 厚度連續(xù)切片，切片梯度酒精脫水后，3%H2O2滅活內(nèi)源性生物酶，高壓鍋高溫抗原修復(fù)，滴加一抗后4 ℃過夜，復(fù)染后，中性樹膠封固，鏡下觀察。以已知陽性切片作陽性對(duì)照，PBS 代替一抗作陰性對(duì)照。

1.4 結(jié)果判斷

VEGF表達(dá)以胞質(zhì)呈棕黃色或棕褐色為陽性，免疫組化結(jié)果采用半定量計(jì)分法判定，光鏡下隨機(jī)選擇10個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，0分為無著色，1 分淺黃色，2 分棕黃色，3分棕褐色。按陽性細(xì)胞百分比計(jì)分，0分為陰性，1 分<10%,2 分11%～50%，3 分51%～75%，4 分>75%，兩者相乘后，4～12分為陽性，＜4分為陰性。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS17.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

VEGF 在乳腺癌組織中的表達(dá)與病理特點(diǎn)的關(guān)系見表1，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，VEGF的陽性表達(dá)率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。VEGF的陽性表達(dá)與乳腺癌組織學(xué)分級(jí)有相關(guān)性，隨著乳腺癌分級(jí)的增高，其陽性表達(dá)率隨之明顯增高，不同分級(jí)間表達(dá)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

表1 VEGF的表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系

3 討論

該次研究結(jié)果顯示，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中，VEGF表達(dá)陽性率（81.48%，22/27），高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性組（60.87%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這表明，在乳腺癌患者組織中VEGF的表達(dá)情況與淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性，表明VEGF 不僅促進(jìn)了乳腺腫瘤血管的形成，同時(shí)也促進(jìn)了腫瘤通過淋巴道的轉(zhuǎn)移，這可能是由于腫瘤細(xì)胞侵入鄰近的與毛細(xì)血管伴行的淋巴管，進(jìn)而促進(jìn)了腫瘤通過淋巴道的轉(zhuǎn)移[3-4]。另有研究表明，VEGF 新的亞型VEGF-C 是具有特異性的促進(jìn)淋巴管生成的因子，其主要由腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生，參與病理性淋巴管的生成，與腫瘤通過淋巴道轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[5]。

該研究的結(jié)果亦表明，VEGF 在乳腺癌組織的陽性表達(dá)達(dá)到72%，明顯高于在對(duì)照組中的表達(dá)（6%），這與Kinoshitar 等[6]的報(bào)道是一致的，在正常的乳腺組織中，VEGF的表達(dá)很低，乳腺良性病變的組織中的VEGF 也處于低表達(dá)水平[7-8]。該研究結(jié)果還顯示，隨著乳腺癌分級(jí)的增高，其表達(dá)水平隨之增高，Ⅲ級(jí)乳腺癌組織中VEGF 陽性表達(dá)率（90%，9/10）高于Ⅰ級(jí)和Ⅱ級(jí)乳腺癌組（68.18%，83.33%）。這提示VEGF的高表達(dá)可能與乳腺癌組織的惡性程度相關(guān)，檢測患者乳腺組織中VEGF的表達(dá)，可能為乳腺癌早期診斷提供參考。

腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多因素、多階段的過程，生物學(xué)因子在乳腺癌中的價(jià)值日益受到重視。VEGF 能夠促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，并進(jìn)而介導(dǎo)腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移[9]。惡性腫瘤的VEGF表達(dá)水平高于正常組織，可以說，VEGF 對(duì)惡性腫瘤組織具有較高的特異性[10-12]。該研究通過分析乳腺癌組織中VEGF的表達(dá)情況，表明VEGF 積極參與了乳腺癌的新生血管的增殖過程，進(jìn)而促進(jìn)乳腺癌的浸潤和轉(zhuǎn)移，檢測乳腺癌組織中VEGF表達(dá)情況，有助于臨床醫(yī)師評(píng)價(jià)乳腺癌的進(jìn)展，為乳腺癌早期診斷，制定個(gè)體化的治療方案提供依據(jù)。

[1]史淑紅，劉麗英.乳腺癌中Livin 的表達(dá)與癌細(xì)胞凋亡相關(guān)性的研究[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2009，17（12）：2320-2323.

[2]Oliveria VM,Aldrighi JM,Bagnoli F.Evidence of the action of bisphosphonates in the prevention of breast cancer[J].Rev Assoc Med Bras,2013，57(1):7-8.

[3]Ran S.Lymphangiogenesis and lymphatic metastasis in breast cancer[J].Pathophysiology，2010，17(4):229-251.

[4]Cohen V,Zetser A.Heparanase induces VEGF-C and facilitates tumor lymphangiogenesis[J].Int J Cancer，2013，123(1):2566-2273.

[5]Schoppmann SF,Tamandl D,Roberts L,et al.HER2/neu expression correlates with vascular endothelial growth factor-c and lymphangiogenesis in lymph node-positive breast cancer[J].Ann Oncol，2010，21(5):955-960.

[6]Kinoshita J.Clinical significance of vascular endothelial growth factor in breast cancer[J].Breast Cancer Res Treat，2013，66(2):159-161.

[7]Derleth C.Aniangiogenic therapies in early-stage breast cancer[J].Clin Breast Cancer，2010，10(1):E23-31.

[8]Das S,Ladell DS.Vascular endothelial growth factor indrces lymphangitic carcinomatosis,an extremely aggressive form of lung metastases[J].Cancer，Res，2013，70(5):1814-1824.

[9]Vesuna F,van Didst P,Chen JH.Twist is a transcriptional repressor of VEGF expression in breast cancer[J].Biochem Biophys Res Commun，2008，367(2):235.

[10]Linderholm BK,Gruvberger Saal S.Vascrlar endothelial growth factor is a strong predictor of early distant recurrences in a prospective study of premenopausal women with lymphnode negative breast cancer[J].Breast,2008，17(5):484-491.

[11]楊陽，丁佩劍，丁雙劍，等.血管內(nèi)皮生長因子在乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義[J].中國綜合臨床，2011，27(10):1069-1071.

[12]Sharma G,Mirza S,Parshad R.Clinical significance of Maspin promoter methylation and loss of its protein expression in invasive ductal breast carcinoma:correlation with VEGF and MTA1 expression[J].Tummour Biol，2013，32(1):23-32.