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    雙氰胺單次配施和連續(xù)配施的土壤氮素形態(tài)和蔬菜硝酸鹽累積變化

    2013-12-08 07:45:37王煌平翁伯琦張潘丹
    生態(tài)學(xué)報 2013年15期
    關(guān)鍵詞:空心菜銨態(tài)氮硝態(tài)

    王煌平, 張 青, 翁伯琦, 張潘丹, 羅 濤,*

    (1. 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院土壤肥料研究所,福州 350013;2. 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所,福州 350013)

    雙氰胺單次配施和連續(xù)配施的土壤氮素形態(tài)和蔬菜硝酸鹽累積變化

    王煌平1, 張 青1, 翁伯琦2, 張潘丹1, 羅 濤1,*

    (1. 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院土壤肥料研究所,福州 350013;2. 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所,福州 350013)

    采用田間試驗研究了雙氰胺(dicyandiamide,縮寫DCD)單次配施和連續(xù)配施的土壤氮素形態(tài)和蔬菜硝酸鹽累積變化。結(jié)果表明,與單施化肥相比,DCD單次配施的長期葉菜甘藍(lán)生長過程中土壤銨態(tài)氮含量增幅為21.3%—339.4%,土壤硝態(tài)氮和菜體硝酸鹽含量降幅分別為5.4%—80.2%和4.4%—58.3%;短期葉菜空心菜收獲時土壤銨態(tài)氮含量增加了299.4%,土壤硝態(tài)氮和菜體硝酸鹽含量分別降低了26.2%和31.7%。DCD連續(xù)配施的“甘藍(lán)-菠菜-空心菜-蘿卜-大白菜”種植體系中,土壤銨態(tài)氮、硝態(tài)氮和菜體硝酸鹽含量均呈累積的趨勢,配施DCD的土壤銨態(tài)氮含量從略高于化肥處理(44.0%)發(fā)展到極顯著高于化肥處理(392.5%,P<0.01),土壤硝態(tài)氮含量從極顯著低于化肥處理(-68.2%,P<0.01)發(fā)展到顯著高于化肥處理(146.6%,P<0.05),菜體硝酸鹽含量從顯著低于化肥處理(-30.2%,P<0.05)發(fā)展到極顯著高于化肥處理(40.4%,P<0.01)。由此可見,DCD單次配施可顯著降低菜體硝酸鹽含量,而連續(xù)配施DCD的土壤能維持一定量的銨態(tài)氮水平,這些盈余的銨態(tài)氮會進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為硝態(tài)氮殘留在土壤中,并可能產(chǎn)生蔬菜硝酸鹽累積的風(fēng)險。

    雙氰胺;單次配施;連續(xù)配施;氮素形態(tài);硝酸鹽累積

    蔬菜是健康飲食的重要組成部分,富含維生素、礦物質(zhì)、粗纖維等營養(yǎng)成分。日常食用定量的蔬菜可以預(yù)防人體多種疾病的發(fā)生,包括心血管疾病、癌癥、肥胖癥和糖尿病[1]。但蔬菜易富集硝酸鹽,是飲食硝酸鹽攝入的主要來源[2],雖然適量的硝酸鹽攝入對人體健康無害,但硝酸鹽攝入量過多,將對人體健康產(chǎn)生不利的影響,如引起胃腸癌和高鐵血紅蛋白血癥等[3]。因此,蔬菜硝酸鹽的累積已備受關(guān)注。我國是蔬菜種植大國,蔬菜播種面積從1978年的3331×103hm2增加到2010年的19000×103hm2[4],居世界第一位,但菜體硝酸鹽污染的普遍現(xiàn)象已嚴(yán)重影響著蔬菜的食用安全和出口[5- 6],如何減少蔬菜硝酸鹽累積是提高蔬菜品質(zhì)最重要且亟待解決的問題之一。近十幾年來,國內(nèi)外科研工作者已提出了不少應(yīng)對措施,如篩選低硝酸鹽吸收蔬菜品種[7]、改進(jìn)氮肥劑型(添加硝化抑制劑、脲酶抑制劑)[8]、改善施肥方法[9]等。其中,氮肥配施雙氰胺(dicyandiamide,縮寫DCD)一直是土壤肥料研究中的熱點。羅濤等研究表明,尿素配施DCD,土壤銨態(tài)氮含量升高,硝態(tài)氮含量降低,空心菜增產(chǎn)7.7%,菜體硝酸鹽含量降低63.6%[10]。Cui等研究表明,黃棕壤施用DCD的土壤硝酸鹽淋失減少58.5%,N2O減排83.8%[11],顯然,農(nóng)田施用DCD是一種增產(chǎn)保質(zhì)、提高氮肥利用率的有效技術(shù)措施。但這些研究多數(shù)為DCD單次施用的報道,缺乏DCD連續(xù)施用的菜地環(huán)境效應(yīng)研究。因此,針對我國蔬菜硝酸鹽污染面廣的生產(chǎn)實際,結(jié)合已有的定位試驗平臺,全面開展DCD單次配施和連續(xù)配施對土壤氮素形態(tài)和蔬菜硝酸鹽累積變化的研究,可為菜地DCD應(yīng)用的蔬菜安全生產(chǎn)和環(huán)境評價提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗地概況

    DCD單次配施包括甘藍(lán)種植試驗和空心菜種植試驗,試驗地均設(shè)在福建省莆田市荔城區(qū)鎮(zhèn)海街道古山村蔬菜基地,位于東經(jīng)119°01′54″,北緯25°25′06″,屬南亞熱帶海洋性季風(fēng)氣候區(qū),年均氣溫16—21 ℃,年均降雨量1500 mm,年均日照時數(shù)1995.9 h,無霜期316—350 d,土壤類型均為灰埭土。甘藍(lán)種植試驗的前茬作物為水稻,土壤基礎(chǔ)肥力為:pH值 5.2,有機質(zhì)13.4 g/kg,全氮0.9 g/kg,有效磷42.2 mg/kg,速效鉀54.0 mg/kg;空心菜種植試驗的前茬作物為蔬菜,土壤基本理化性狀為:pH值 5.5,有機質(zhì)14.1 g/kg,堿解氮75.5 mg/kg,有效磷120.4 mg/kg,速效鉀94.7 mg/kg。

    DCD連續(xù)配施試驗地設(shè)在福州市閩侯縣白沙鎮(zhèn)溪頭村農(nóng)業(yè)部福建耕地保育觀測試驗站,位于東經(jīng)119°04′52″,北緯26°12′33″,屬中亞熱帶和南亞熱帶氣候過渡區(qū),年均氣溫19.5 ℃,年均降雨量1350.9 mm,年均日照時數(shù)1812.5 h,無霜期311 d,土壤類型為黃泥土,前茬作物為水稻。土壤基本理化性狀為:pH值 5.4,有機質(zhì)31.6 g/kg,堿解氮92.6 mg/kg,速效磷11.4 mg/kg,速效鉀39.2 mg/kg。

    1.2 試驗設(shè)計

    DCD單次配施試驗設(shè)化肥(縮寫SF)和化肥配施DCD(縮寫SFD)2個處理,每個處理3個重復(fù),共6個小區(qū),隨機區(qū)組排列。甘藍(lán)種植試驗自2009年11月至2010年3月,供試甘藍(lán)品種為結(jié)球甘藍(lán)(BrassicaoleraceaL. var.capitataL.),小區(qū)面積9.9 m2(1.1 m×9.0 m),于2009年11月28日施基肥,12月21日施追肥,2010年3月27日收獲??招牟朔N植試驗自2011年6月至7月,供試空心菜品種為臺灣竹葉空心菜(IpomoeaaquaticaF.),小區(qū)面積12 m2(2.0 m×6.0 m),所有肥料(包括DCD)于6月21日做基肥一次性施入,7月24日收獲。

    DCD連續(xù)配施試驗也設(shè)化肥(縮寫MF)和化肥配施DCD(縮寫MFD)2個處理,處理重復(fù)數(shù)和小區(qū)數(shù)與DCD單次配施試驗一致。試驗自2008年12月至2011年4月,種植蔬菜依次為“甘藍(lán)—菠菜—空心菜—蘿卜—大白菜”,每年種植兩季蔬菜。供試甘藍(lán)品種為京豐1號結(jié)球甘藍(lán)(B.oleraceavar.capitata),2008年12月4日移栽,2009年4月7日收獲;菠菜品種為全能菠菜(SpinaciaoleraceaL.),2009年9月30日播種,11月30日收獲;空心菜品種為泰國空心菜(I.aquaticaF.),2010年5月2日播種,6月9日收獲;蘿卜品種為漢白玉蘿卜(RaphanussativusL.radish),2010年10月9日播種,2011年1月5日收獲;大白菜品種為強春大白菜(Brassicacampestrispekinensis),2011年2月21日移栽,4月27日收獲。定位試驗點小區(qū)面積30 m2(5.0 m×6.0m),每區(qū)設(shè)3畦,每畦4.0 m×1.3 m,畦間距0.5 m,所有肥料在每季蔬菜種植時均做基肥一次性施入。所有試驗地化肥用量為當(dāng)?shù)爻R?guī)施肥用量,化肥配施DCD處理的DCD用量為化肥純氮量的10%,化肥和DCD的用量及施肥方式見表1,所有試驗處理中小區(qū)蔬菜播種量或移栽數(shù)均一致。

    表1 肥料用量及施肥方式

    - 代表不施該種肥料; 雙氰胺dicyandiamide

    1.3 樣品采集及測定

    DCD單次配施的甘藍(lán)種植試驗從2010年1月6日起每隔20 d取第5片完全展開葉并采集耕層(0—20 cm)土樣,共采樣5次??招牟朔N植試驗于菜體收獲時取菜體可食用部分并采集耕層土樣,甘藍(lán)和空心菜種植試驗每小區(qū)各采集8個菜體樣品和土樣。DCD連續(xù)配施試驗于菜體收獲時取蔬菜可食用部分并采集耕層土樣,每畦各采集4個菜體樣品和土樣,每小區(qū)各采集12個菜體樣品和土樣,并于2011年2月10日和5月30日,分別采集蘿卜和大白菜收獲后30 d各12個土樣混合。所有試驗采集的菜體樣品均保存在4 ℃冰箱于次日切碎混合用于測定菜體硝酸鹽含量,土壤鮮樣混合后均保存在-20 ℃冰箱于第3天測定土壤銨態(tài)氮和硝態(tài)氮含量。蔬菜硝酸鹽含量的測定參照楊錨等[12],土壤銨態(tài)氮和硝態(tài)氮含量的測定分別采用靛酚蘭比色法和雙波長紫外分光光度法[13],試驗數(shù)據(jù)采用Excel 2003辦公軟件結(jié)合DPS7.05軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析,LSD多重比較法檢驗差異顯著性。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 DCD配施對土壤銨態(tài)氮變化的影響

    DCD可抑制土壤中硝化細(xì)菌的活性,從而減緩?fù)寥冷@態(tài)氮向硝態(tài)氮的轉(zhuǎn)化[10]。DCD單次配施的結(jié)果顯示,在長期葉菜甘藍(lán)生長期間,SFD和SF處理的銨態(tài)氮均呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢。所有取樣時間點SFD處理的土壤銨態(tài)氮含量均高于SF處理,增幅為21.3%—339.4%(圖1)。二者銨態(tài)氮含量除第1次取樣差異尚未顯著外,其余取樣時間點差異均極顯著(P<0.01)??招牟朔N植試驗表明,SFD處理空心菜收獲時的土壤銨態(tài)氮含量也高于SF處理,增加了299.4%,差異達(dá)極顯著水平(P<0.01)(圖1)。

    圖1 DCD單次配施甘藍(lán)和空心菜土壤銨態(tài)氮的變化Fig.1 Soil ammonium nitrogen changes in cabbage and water spinach cultivation with single application of DCD (dicyandiamide)SF(single application of fertilizer)和SFD(single application of fertilizer with dicyandiamide)分別表示單次配施的化肥處理和化肥配施處理

    圖2顯示,在“甘藍(lán)-菠菜-空心菜-蘿卜-大白菜”種植體系中,甘藍(lán)、菠菜、空心菜、蘿卜、大白菜收獲時,DCD連續(xù)配施的MFD處理的土壤銨態(tài)氮含量均高于MF處理,分別比MF處理提高了44.0%、8.8%、46.2%、122.1%、392.5%,二者土壤銨態(tài)氮含量從甘藍(lán)季的差異尚不明顯發(fā)展到蘿卜季的差異極顯著(P<0.01)??梢?,DCD不論是單次配施,還是連續(xù)配施,均可提高土壤銨態(tài)氮含量,隨著蔬菜種植季的增加,DCD連續(xù)配施使土壤銨態(tài)氮呈現(xiàn)累積的趨勢。

    圖2 DCD連續(xù)配施“甘藍(lán)-菠菜-空心菜-蘿卜-大白菜”蔬菜季土壤銨態(tài)氮的變化Fig.2 Soil ammonium nitrogen changes in “cabbage-spinach-water spinach-radish-Chinese cabbage” cultivation with multiple application of DCDMF(multiple application of fertilizer)和MFD(multiple application of fertilizer with dicyandiamide)分別表示DCD連續(xù)配施的化肥處理和化肥配施DCD處理

    2.2 DCD配施對土壤硝態(tài)氮變化的影響

    圖3表明,甘藍(lán)生長期間,SFD處理和SF處理土壤硝態(tài)氮變化整體呈下降的趨勢,SFD處理的土壤硝態(tài)氮含量在前期下降較慢,但在第3次與第4次取樣間急劇下降,而SF處理的土壤硝態(tài)氮含量則在第1次與第2次取樣間急劇減少,在后期下降較慢。SFD處理所有取樣時間點的硝態(tài)氮含量均低于SF處理,降幅為5.4%—80.2%。二者硝態(tài)氮含量除第1次取樣差異尚未顯著外,其余取樣時間點差異均極顯著(P<0.01)。圖3表明,與甘藍(lán)種植試驗一致,空心菜收獲時SFD處理的土壤硝態(tài)氮也低于SF處理,降低了26.2%。

    圖3 DCD單次配施甘藍(lán)和空心菜土壤硝態(tài)氮的變化Fig.3 Soil nitrate nitrogen changes in cabbage and water spinach cultivation with single application of DCD

    由圖4可知,甘藍(lán)季、菠菜季、蘿卜季MFD處理的土壤硝態(tài)氮含量均低于MF處理,分別降低了68.2%、40.0%和9.6%;而空心菜季和大白菜季的土壤硝態(tài)氮反而高于MF處理,分別增加了82.3%和146.6%。MFD處理硝態(tài)氮含量從甘藍(lán)季極顯著(P<0.01)低于MF處理,發(fā)展到菠菜季、空心菜季和蘿卜季差異不顯著,再到大白菜季顯著高于MF處理(P<0.05)??梢姡珼CD單次配施可明顯降低土壤硝態(tài)氮含量(圖3),而DCD連續(xù)配施在前兩季可有效降低土壤硝態(tài)氮含量,但隨著蔬菜種植季的增加,土壤硝態(tài)氮反而呈累積的趨勢。

    圖4 DCD連續(xù)配施“甘藍(lán)-菠菜-空心菜-蘿卜-大白菜”蔬菜季土壤硝態(tài)氮的變化Fig.4 Soil nitrate nitrogen changes in “cabbage-spinach-water spinach-radish-Chinese cabbage” cultivation with multiple application of DCD

    2.3 DCD配施對蔬菜季菜體硝酸鹽累積的影響

    蔬菜硝酸鹽限量是無公害蔬菜的重要品質(zhì)指標(biāo)之一[5]。由圖5可知,甘藍(lán)種植時SFD處理和SF處理的菜體硝酸鹽變化趨勢與土壤硝態(tài)氮變化相似。隨著甘藍(lán)種植時間的延長,菜體硝酸鹽含量呈下降趨勢,且SFD處理的菜體硝酸鹽含量均低于SF處理,降幅為4.4%—58.3%。二者除第1次和第5次取樣差異尚不顯著外,其余取樣時間點差異極顯著(P<0.01),表明甘藍(lán)正常收獲時,DCD配施能明顯減少甘藍(lán)的硝酸鹽富集。由圖5可知,SFD處理和SF處理的空心菜菜體硝酸鹽含量分別為2573.2 mg/kg 濕重和3770.2mg/kg 濕重,SFD處理比SF處理降低了31.7%,DCD單次配施后空心菜菜體的硝酸鹽含量從高于無公害蔬菜的硝酸鹽限量(葉菜類≤3000 mg/kg 濕重)[14],降低到符合硝酸鹽限量的要求。

    圖5 DCD單次配施甘藍(lán)和空心菜的硝酸鹽變化Fig.5 Nitrate changes of vegetables in cabbage and water spinach cultivation with single application of DCD

    圖6顯示,MFD處理的甘藍(lán)季、菠菜季和空心菜季蔬菜可食用部分菜體硝酸鹽含量均低于MF處理,分別減少了30.2%、25.9%和3.0%;而蘿卜季和大白菜季的菜體硝酸鹽含量則高于MF處理,分別增加了4.1%和40.4%。在5季蔬菜種植后,MFD處理的菜體硝酸鹽含量從顯著低于MF處理(P<0.05),發(fā)展到極顯著高于MF處理(P<0.01)。對DCD單次配施甘藍(lán)生長期土壤硝態(tài)氮含量與蔬菜硝酸鹽含量相關(guān)性分析表明,土壤硝態(tài)氮含量與蔬菜硝酸鹽含量呈顯著正相關(guān)(P<0.01)。由此可見,隨著蔬菜種植季的增加,DCD連續(xù)配施后蔬菜硝酸鹽富集主要是由土壤硝態(tài)氮累積引起的(圖4)。

    圖6 DCD連續(xù)配施“甘藍(lán)-菠菜-空心菜-蘿卜-大白菜”蔬菜季的菜體硝酸鹽變化Fig.6 Nitrate changes of vegetables in “cabbage-spinach-water spinach-radish-Chinese cabbage” cultivation with multiple application of DCD

    3 討論與結(jié)論

    同大多數(shù)的研究相似[8,10],本研究DCD單次配施可增加土壤銨態(tài)氮含量,減少土壤硝態(tài)氮含量(圖1,圖3)。Schroder和Kelin等報道DCD反復(fù)配施的硝化抑制效果和土壤氮素形態(tài)變化不明顯[15- 16]。本試驗DCD連續(xù)配施的土壤銨態(tài)氮和硝態(tài)氮變化整體均呈累積的趨勢(圖2,圖4),土壤銨態(tài)氮含量從甘藍(lán)季的略高于化肥處理(44.0%),發(fā)展到蘿卜季的極顯著高于化肥處理(392.5%,P<0.01);硝態(tài)氮含量從甘藍(lán)季極顯著低于化肥處理(-68.2%,P<0.01),發(fā)展到大白菜季顯著高于化肥處理(146.6%,P<0.05),這與已有報道的差異可能是由于作物品種,肥料種類及用量不同而引起。

    在本試驗中,DCD單次配施可有效地降低甘藍(lán)生長期菜體硝酸鹽含量(4.4%—58.3%),以及空心菜收獲時菜體硝酸鹽含量(31.7%)(圖5),這與大多數(shù)的研究結(jié)果一致[8,10,17- 18]。然而,DCD連續(xù)配施,隨著蔬菜種植季的增加,菜體硝酸鹽含量從甘藍(lán)季顯著低于化肥處理(-30.2%,P<0.05),發(fā)展到大白菜季極顯著高于化肥處理(40.4%,P<0.01)(圖6)。究其原因,DCD連續(xù)配施的蔬菜硝酸鹽富集與土壤維持較高的硝態(tài)氮含量密切相關(guān)(圖4),但是否與蔬菜品種、水分、地溫等因素相關(guān)需進(jìn)一步研究。

    DCD單次配施和連續(xù)配施均顯示硝化抑制效果,但DCD連續(xù)配施的土壤氮素形態(tài)及菜體硝酸鹽則呈累積的趨勢。對連續(xù)配施DCD蔬菜收獲后30 d的土壤銨態(tài)氮和硝態(tài)氮變化的比較表明,蘿卜和大白菜收獲后AMFD處理的土壤銨態(tài)氮和硝態(tài)氮含量均高于AMF處理,其中土壤銨態(tài)氮含量分別增加了42.6%和57.8%,大白菜季差異極顯著(P<0.01);土壤硝態(tài)氮含量分別增加了43.0%和55.3%,差異分別達(dá)顯著(P<0.05)和極顯著水平(P<0.01)(表2)。此外,對連續(xù)配施DCD蔬菜收獲時和收獲后土壤銨態(tài)氮和硝態(tài)氮變化的比較表明,與收獲時(MFD處理)相比,蘿卜和大白菜收獲后(AMFD處理)的土壤銨態(tài)氮含量分別降低了46.0%和27.0%,其中蘿卜季差異極顯著(P<0.01);二者土壤硝態(tài)氮含量分別增加了3.6%和74.8%,其中大白菜季差異極顯著(P<0.01)。由此可見,連續(xù)配施DCD可使土壤維持一定量的銨態(tài)氮水平(圖2),但DCD抑制硝化作用是有時間性的[19],一旦加入到土壤中,隨著DCD硝化抑制活性的減弱[19- 20],土壤中盈余的銨態(tài)氮將進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為硝態(tài)氮殘留在土壤中(圖4),并可能為下季蔬菜吸收利用,從而產(chǎn)生蔬菜硝酸鹽累積的風(fēng)險(圖6)。

    表2 蔬菜收獲時和收獲后土壤銨態(tài)氮和硝態(tài)氮的變化

    AMF(after vegetables harvest in multiple application of fertilizer treatment)、AMFD(after vegetables harvest inmultople application of fertilizer with dicyandiamide treatment)分別表示MF處理和MFD處理種植蔬菜收獲后30 d的相應(yīng)處理;變化率1和變化率2分別表示(AMFD-AMF)/AMFD和(AMFD-MFD)/AMFD;大寫字母和小寫字母分別代表P<0.01和P<0.05

    綜上所述,DCD單次配施可明顯增加土壤銨態(tài)氮含量,降低土壤硝態(tài)氮含量,減少蔬菜硝酸鹽富集。而DCD連續(xù)配施,隨著蔬菜種植季的增加,土壤銨態(tài)氮和硝態(tài)氮含量呈累積的趨勢,并可能產(chǎn)生蔬菜硝酸鹽富集的現(xiàn)象。因此,在生產(chǎn)實際中應(yīng)用DCD,隨著作物種植季的增加,應(yīng)逐年減少肥料和DCD的用量,以及含有DCD的穩(wěn)定性肥料的用量[21],以防控土壤銨態(tài)氮和硝態(tài)氮累積,以及蔬菜硝酸鹽富集的風(fēng)險。

    致謝: 感謝福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院土壤肥料研究所化驗室顏明娟主任和蔡順香副主任對樣品測試的協(xié)助。

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    Changesofsoilnitrogentypesandnitrateaccumulationinvegetableswithsingleormultipleapplicationofdicyandiamide

    WANG Huangping1, ZHANG Qing1, WENG Boqi2, ZHANG Pandan1, LUO Tao1,*

    1InstituteofSoilandFertilizer,FujianAcademyofAgriculturalSciences,Fuzhou350013,China2AgriculturalEcologyInstitute,FujianAcademyofAgriculturalSciences,Fuzhou350013,China

    dicyandiamide(DCD); single application; multiple application; nitrogen types; nitrate accumulation

    國家科技支撐計劃課題(2012BAD14B15);福建省省屬公益類科研院所基本科研專項(2011R1024-5);福建省財政專項福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新團(tuán)隊建設(shè)基金(STIF-Y01)

    2012- 04- 28;

    2013- 01- 06

    *通訊作者Corresponding author.E-mail: luotaofjfz@188.com

    10.5846/stxb201204280611

    王煌平, 張青, 翁伯琦, 張潘丹, 羅濤.雙氰胺單次配施和連續(xù)配施的土壤氮素形態(tài)和蔬菜硝酸鹽累積變化.生態(tài)學(xué)報,2013,33(15):4608- 4615.

    Wang H P, Zhang Q, Weng B Q, Zhang P D, Luo T.Changes of soil nitrogen types and nitrate accumulation in vegetables with single or multiple application of dicyandiamide.Acta Ecologica Sinica,2013,33(15):4608- 4615.

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