實驗性雞高尿酸血癥模型的建立

任予勇

（杜集區(qū)農(nóng)水局畜牧水產(chǎn)中心，安徽 淮北 235000）

嘌呤代謝紊亂和尿酸排泄減少會引起高尿酸血癥（hypemricemia）和痛風(fēng)（gout）疾病，痛風(fēng)的病理基礎(chǔ)產(chǎn)生于高尿酸血癥，痛風(fēng)都會伴有高尿酸血癥。［1］高尿酸血癥是指細(xì)胞外液的尿酸鹽呈超飽和狀態(tài)，當(dāng)血尿酸鹽大于等于417μmol／L時應(yīng)考慮高尿酸血癥。引起嘌呤代謝紊亂的重要原因認(rèn)為是超高蛋白膳食，過量攝入糖、鹽、脂肪、蛋白質(zhì)及大量飲酒與該病也有重要關(guān)系。雞痛風(fēng)病又稱尿石癥、腎結(jié)合內(nèi)臟或營養(yǎng)性痛風(fēng)等，是家禽的一種常見病，以雞多見，在我區(qū)各雞場時有發(fā)生，造成雞場不小損失。人類痛風(fēng)是由單鈉尿酸鹽（MSU）沉積所致的晶體相關(guān)性關(guān)節(jié)病，與嘌呤代謝紊亂和（或）尿酸排泄減少所致的高尿酸血癥直接相關(guān)。隨著人民飲食結(jié)構(gòu)的改變以及藥物的作用，人類高尿酸血癥及痛風(fēng)的發(fā)病率也明顯升高，對該病的研究也逐漸增多。［2］因此本實驗采取高鈣、高蛋白雙因素相結(jié)合建立實驗性雞高尿酸血癥模型，探討不同含量的鈣和蛋白日糧對雞血尿酸指標(biāo)的影響，從而為今后高鈣和高蛋白飲食致雞高尿酸血癥及痛風(fēng)病人的防治提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物及分組

雄性“羅曼蛋雞”（從淮北市某雞養(yǎng)殖場購買）80只，體重為700±50g，雞齡60天，實驗雞在動物房適應(yīng)性喂養(yǎng)5天后稱重，測量實驗雞的踝關(guān)節(jié)周徑。然后隨機(jī)分成4組，A、B、C為造模組。A組高蛋白組；B組高鈣組；C組高鈣高蛋白組；D組對照組；每組20只實驗用雞。A、B、C三組造模組采用專用的造模飼料來喂養(yǎng)，而D組對照組則采用常規(guī)的蛋雞飼料喂養(yǎng)，籠養(yǎng)，在其他方面四組的條件相同。

1.1.2 常規(guī)飼料與造模飼料制備

蛋雞前期配合飼料喂養(yǎng)的是常規(guī)飼料，從淮北市正大飼料有限公司購入。造模飼料［3］為1號飼料：高鈣飼料；2號飼料：高蛋白飼料；3號飼料：高鈣高蛋白飼料；4號飼料：基礎(chǔ)飼料。飼料組成為：其中1號飼料中85%的基礎(chǔ)飼料，15%的石粉；2號飼料中50%的基礎(chǔ)飼料，50%的豆粕；3號飼料中50%的豆粕，35%的基礎(chǔ)飼料，15%的石粉。

1.1.3 試劑與儀器

測定尿酸試劑盒購于溫州東甌津瑪生物科技有限公司，分光光度計購于上海安亭科學(xué)儀器廠；低速離心機(jī)購于美國Beckman公司。

1.2 方法

1.2.1 動物模型建立

對照組常規(guī)飼料喂養(yǎng)，A、B、C組造模組予以相應(yīng)的造模飼料喂養(yǎng)。約17d后造模組雞開始出現(xiàn)痛風(fēng)表現(xiàn)，會出現(xiàn)精神不振，羽毛松亂，脫落，進(jìn)食減少，排糞白且稀，關(guān)節(jié)腫大，輕輕捏之會躲閃哀鳴，站立不穩(wěn)等現(xiàn)象。以上體征出現(xiàn)表明雞高尿酸血癥模型造模成功，造模成功后按照原方案繼續(xù)喂養(yǎng)。

1.2.2 體重測量

每周用精密電子秤準(zhǔn)確秤量雞的體重，并密切觀察雞造模前后的不同表現(xiàn)。

1.2.3 踝關(guān)節(jié)周徑測量

用軟尺測量兩腿踝關(guān)節(jié)周徑，為雞踝部第一足爪的下方環(huán)繞跗踝部的周徑長度，分別測量2次，求出平均值，計數(shù)精確到0.1cm，每周測量1次。

1.2.4 血清尿酸值測定

將雞翅展開暴露翼根靜脈，垂直刺破血管，取1.5ml血液，3000轉(zhuǎn)×10min離心，分離血清。酶偶聯(lián)比色法測定血清尿酸水平，高尿酸血癥判斷標(biāo)準(zhǔn)是以血尿酸＞476.57μmol／L（8mg／dl）。［4］

1.2.5 統(tǒng)計學(xué)處理

實驗數(shù)據(jù)采用SPSS程序軟件進(jìn)行方差分析，“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P﹤0.05具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組雞的體重變化情況（見表1）。

表1 實驗不同時期雞體重變化（kg）

由此可見，高蛋白質(zhì)高鈣飼料致雛雞高尿酸血癥時伴有體重的快速增長。雞的體重與飼養(yǎng)時間呈正相關(guān)。各組雞隨著飼養(yǎng)時間的延長，體重變化有顯著性差異，但同一階段各組間體重的差異不顯著（p＞0.05）。

2.2 各組雞踝關(guān)節(jié)周徑的變化（見表2、表3）

表2 實驗不同時期雞踝關(guān)節(jié)周徑（左爪）（cm）

表3 實驗不同時期雞踝關(guān)節(jié)周徑（右爪）（cm）

左踝關(guān)節(jié)周徑在實驗的不同時期（見表2），模型組雞與D組相比差異均顯著（p＜0.05），各造模組之間無顯著差異（p＞0.05）；D組各時期踝關(guān)節(jié)周徑變化不大；各組間7d時左踝關(guān)節(jié)周徑變化差異不顯著；第17d各造模組左踝關(guān)節(jié)周徑均明顯增長，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（p＜0.05）。第27d時各組無明顯增長（p＞0.05）。

右踝關(guān)節(jié)周徑在不同的實驗時期（見表3），造模組與D組相比差異均顯著，模型組之間無明顯差異；D組出現(xiàn)踝關(guān)節(jié)增長的原因可能是飼養(yǎng)管理或者測定時讀數(shù)有誤差。隨著飼養(yǎng)時間的延長，第7dA組右踝關(guān)節(jié)周徑明顯增加（p＜0.05），其他模型組增加不明顯（p＞0.05）；喂養(yǎng)17d后，A、B、C組的踝關(guān)節(jié)周徑均明顯增加，差異顯著（p＜0.05），喂養(yǎng)第27d，三組踝關(guān)節(jié)周徑無明顯增長，差異不顯著（p＞0.05）。

2.3 各組試驗雞血尿酸值的變化

各試驗組雞的血尿酸值變化情況見表4。

表4 實驗不同時期雞血尿酸指標(biāo)（μmol／L）

由表4可見，隨著飼養(yǎng)時間的延長，造模組三組雞的血尿酸值均明顯升高。A組血尿酸值升高速度最明顯，喂養(yǎng)第17d最高，已達(dá)到高尿酸血癥的標(biāo)準(zhǔn)，與其他組相比具有顯著差異，而C組血尿酸有一定的升高，但沒達(dá)到診斷高尿酸血癥的水平。與其他組比較，差異不顯著，B組與D組血尿酸值升高不明顯，無統(tǒng)計學(xué)意義（p＞0.05）。喂養(yǎng)第27d時，血尿酸含量，A組、C組均已達(dá)到或者超過高尿酸血癥的標(biāo)準(zhǔn)水平，與D組比較，均增加顯著（p＜0.05），其中C組的血尿酸值顯著高于其他造模組。B組血尿酸值則升高不明顯，未達(dá)到高尿酸血癥的診斷水平。

2.4 飼養(yǎng)過程中雞狀態(tài)的變化

在實驗過程中，各造模組雞出現(xiàn)進(jìn)食減少，精神不振，羽毛松落，排白色稀糞（稀糞中含有大量的白色尿酸鹽），踝關(guān)節(jié)腫大，輕捏即躲閃哀鳴，站立不穩(wěn)，喜伏臥等現(xiàn)象。

3 討論

雞體內(nèi)嘌呤代謝的最終產(chǎn)物是尿酸，可引起高尿酸血癥及痛風(fēng)癥［5］。禽痛風(fēng)的致病因素比較復(fù)雜，有報道［6］認(rèn)為導(dǎo)致禽痛風(fēng)的因素可達(dá)20多種，如飼料中蛋白質(zhì)含量過高、鈣、磷比例失調(diào)、維生素A的含量長期不足及水?dāng)z入不足等，本實驗結(jié)果表明，日食中蛋白質(zhì)的量和性質(zhì)及鈣含量影響較明顯。研究認(rèn)為，關(guān)節(jié)型痛風(fēng)的病因主要有兩種因素：高蛋白飼料和遺傳因素。許多研究者證實高蛋白日食可引起痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎，高核蛋白類飼料可引起雞內(nèi)臟或關(guān)節(jié)出現(xiàn)尿酸鹽沉積，因為大量高核蛋白攝入后，血尿酸含量會增高，達(dá)到一定程度會引起腎小管上皮的損害，腎臟排泄阻礙，造成尿酸代謝紊亂，引起痛風(fēng)病。有研究［7］認(rèn)為當(dāng)飼料中蛋白質(zhì)含量過高，體內(nèi)尿酸生成過多，腎增強(qiáng)排泄功能后仍不能把尿酸全部排出時，會發(fā)生痛風(fēng)。在本次實驗中，高蛋白日糧成功地復(fù)制了典型的高尿酸血癥模型，與以往研究結(jié)果一致。

喂養(yǎng)的飼料中含鈣量過高，鈣、磷比例失調(diào)也與雞痛風(fēng)發(fā)病有關(guān)，如果鈣和磷的比例失調(diào)，高鈣飼料就可能引發(fā)痛風(fēng)病。以往研究發(fā)現(xiàn)［8］青年蛋雞對飼料中的高鈣十分敏感，飼料中的鈣含量如果超過標(biāo)準(zhǔn)的50%可引起不良后果，認(rèn)為飼喂含鈣21.5%、磷0.14%日食的蛋雞有發(fā)生腎病的危險，血鈣持續(xù)升高會導(dǎo)致腎小管上皮細(xì)胞發(fā)生變性、腫脹、壞死和脫落等病變。在本次實驗中，高鈣日糧喂養(yǎng)的雞血尿酸有所升高，但未達(dá)到高尿酸血癥水平。提示高鈣參與了禽痛風(fēng)的發(fā)病過程，但可能不起主要作用。

體內(nèi)組織分解代謝的加強(qiáng)與高尿酸血癥有密切關(guān)系。尿酸是禽類蛋白質(zhì)和核酸代謝的含氮最終產(chǎn)物，如果飼料中蛋白含量過高，就會產(chǎn)生大量的尿酸，在動物腎功能正常情況下，尿酸可正常排泄，但予以高鈣高蛋白復(fù)合日食飼喂時，高鈣引發(fā)腎小管上皮細(xì)胞損害，使腎功能受損，飼料中的高蛋白會產(chǎn)生大量的尿酸，從而促進(jìn)尿酸積聚，導(dǎo)致典型的痛風(fēng)病。實驗結(jié)果顯示：高鈣高蛋白日糧成模率最高，提示高鈣、高蛋白聯(lián)合作用更易引起高尿酸血癥［5］。

易發(fā)生痛風(fēng)的階段是雞25～45日齡，因此養(yǎng)禽戶一般會在雞45日齡左右改用低蛋白的中期配合飼料。建立雞高尿酸血癥模型，為預(yù)防雞高尿酸血癥提供實驗依據(jù)。

由于鳥、禽類、爬行類和靈長類及人類缺乏尿酸分解酶，而其他大多數(shù)動物包括哺乳動物體內(nèi)存在尿酸分解酶能將體內(nèi)尿酸分解為尿囊素，隨尿液排出，所以很少在體內(nèi)形成痛風(fēng)結(jié)石引起損害。因此建立哺乳動物高尿酸血癥模型比較困難，所以至今尚無理想的痛風(fēng)動物模型。有研究證實禽類與人類的嘌呤核苷酸代謝途徑相似，雞體內(nèi)的核蛋白水解后產(chǎn)生核酸，降解成嘌呤類物質(zhì)代謝成尿酸，其過程中與人類一樣，當(dāng)日食中含高量蛋白質(zhì)及核蛋白時，生成尿酸的量大大增加。同時雞體內(nèi)同樣缺乏尿酸酶，其嘌呤代謝的最終產(chǎn)物亦為尿酸，增加嘌呤吸收、合成以及減少尿酸降解和排泄，可使血尿酸含量增加，從而引發(fā)雞高尿酸血癥，該病理過程與人相似。［9］故研究雞高尿酸血癥模型對探討人類高尿酸血癥和痛風(fēng)的防治也有重要意義。

4 小結(jié)

綜上所述，隨著飼養(yǎng)時間的延長，高蛋白、高鈣、高鈣高蛋白日糧均可引起雞體內(nèi)尿酸鹽的明顯升高，其中高蛋白組和高鈣高蛋白組血尿酸值達(dá)到了雞高尿酸血癥標(biāo)準(zhǔn)，成功復(fù)制了雞高尿酸血癥模型。試驗結(jié)果顯示，高蛋白日糧成模最快，而高鈣高蛋白日糧成模率最高。

［1］張超，曹克光，楊崇青，等.高尿酸血癥及尿酸性腎病動物模型的建立及應(yīng)用［J］.實驗動物科學(xué)與管理.1999，16（4）：18－21.

［2］劉小青，張冰.鵪鶉高尿酸血癥模型建立初探［J］.中國病理生理雜志，2001，17（10）：1038－1040.

［3］王圣瑾.雞高尿酸血癥模型的建立和復(fù)方中草藥對模型雞療效觀察［D］.合肥：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)，2010.

［4］蘇友新，陳偉宏，王和鳴，等.痛風(fēng)寧顆粒對實驗性雞痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的影響［J］.中國骨傷，2003，16（5）：275－277.

［5］邱許，黃有才，蔣建兵.對蛋雞痛風(fēng)癥的病因調(diào)查研究［J］.禽業(yè)科技，1997，13（7）：29－30.