注射用間苯三酚與6種常用輸液的配伍穩(wěn)定性考察

劉光斌，趙麗萍，姜芳寧，謝六生，張玉葉，張莉莉（甘肅嘉峪關(guān)市酒鋼醫(yī)院藥學(xué)部，甘肅嘉峪關(guān) 735100）

間苯三酚直接作用于胃腸道和泌尿生殖道的平滑肌，是親肌性非阿托品非罌粟堿類純平滑肌解痙藥[1-2]。注射用間苯三酚說明書中要求使用5%或10%葡萄糖注射液作為靜脈滴注的溶媒，但在臨床有些患者不適合用葡萄糖作輸液。關(guān)于間苯三酚與常用輸液的配伍穩(wěn)定性也尚未見報(bào)道。本研究從臨床實(shí)際需要出發(fā)，采用高效液相色譜法對注射用間苯三酚與5%葡萄糖注射液、10%葡萄糖注射液、0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖氯化鈉注射液、乳酸林格氏注射液和轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液等6種常用輸液配伍后的穩(wěn)定性進(jìn)行考察，以便為臨床用藥提供參考依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

LC-2010 AHT型高效液相色譜儀，島津LC solution工作站（日本島津公司）；AUY220電子分析天平（日本島津公司）；756紫外可見分光光度計(jì)（上海奧譜勒儀器有限公司）；PHS-3 C型實(shí)驗(yàn)室酸度計(jì)（上海偉業(yè)儀器廠）。

1.2 藥品與試劑

間苯三酚對照品（上海紫一試劑廠，純度：99.0%）；注射用間苯三酚（湖北午時(shí)藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：120101、120303、120314，規(guī)格：40 mg）；5%葡萄糖注射液（批號(hào)：1205275 B，規(guī)格：250ml）、10%葡萄糖注射液（批號(hào)：1204124 B，規(guī)格：500 ml）、0.9%氯化鈉注射液（批號(hào)：1205148 B，規(guī)格：250 ml）、5%葡萄糖氯化鈉注射液（批號(hào)：120508 YT，規(guī)格：500 ml）均來自于安徽雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司；乳酸林格氏注射液（山東辰欣藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)：1112295105，規(guī)格：500 ml）；轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液（揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)上海海尼藥業(yè)有限公司，批號(hào)：1207048，規(guī)格：500 ml）；乙腈為色譜純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液：準(zhǔn)確稱取間苯三酚對照品5 mg，置于100 ml量瓶中，加水稀釋制成50 μg/ml間苯三酚對照品貯備溶液。

2.1.2 供試品溶液：取注射用間苯三酚1支（40 mg），置于100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度；精密量取該溶液適量，用水稀釋制成每1 ml約含間苯三酚10 μg的溶液。

2.1.3 配伍溶液：取上述6種輸液200 ml，按照臨床常用量分別加入80 mg注射用間苯三酚，搖勻；精密量取上述配伍液適量，用水稀釋制成每1 ml約含間苯三酚10 μg的溶液。

2.1.4 陰性樣品溶液：參考文獻(xiàn)[3]，按照其處方量除不加間苯三酚外，其他輔料正常加入，按其工藝制備陰性制劑。按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備陰性對照液。

2.2 檢測波長的確定

取間苯三酚對照品，分別制成20 μg/ml和2 μg/ml溶液，置于紫外-可見分光光度計(jì)中，以水為空白對照，在200～400 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，記錄紫外吸收光譜圖（見圖1）。由圖1可見，20 μg/ml的間苯三酚溶液在265 nm波長處有特征吸收峰，約240 nm以下吸收較強(qiáng)，所以在240 nm以下無法甄別特征吸收峰；2 μg/ml的間苯三酚溶液在205 nm波長有特征吸收峰，而在240 nm以上吸收較弱，無特征吸收峰出現(xiàn)。考慮到在低波長處，有機(jī)溶劑有紫外吸收，會(huì)對間苯三酚的檢測產(chǎn)生干擾，故確定中間苯三酚的測定波長為210 nm。

圖1 間苯三酚紫外吸收光譜圖Ⅰ.20 μg/mL 間苯三酚溶液；Ⅱ.2 μg/ml間苯三酚溶液Fig 1 UV absorption spectrum of phloroglucinolⅠ.20 μg/ml phloroglucinol；Ⅱ.2 μg/ml phloroglucinol

2.3 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（9∶91）；流速：1.0 ml/min ；柱溫：30℃；檢測波長：210 nm；進(jìn)樣量：20 μL。間苯三酚對照品、陰性對照液、6種配伍劑溶液和6種配伍液的色譜圖見圖2。結(jié)果可見，陰性對照液中的輔料和6種配伍劑溶液對配伍液中間苯三酚的測定不產(chǎn)生干擾。

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密量取50μg/ml間苯三酚對照品貯備溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 ml于10 ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，配制成質(zhì)量濃度分別為2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0μg/ml的溶液。按“2.3”項(xiàng)下色譜條件測定峰面積。以峰面積（A）對質(zhì)量濃度（c）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：A＝1501670 c+12573.8（r＝0.9999，n＝6）。結(jié)果表明，間苯三酚檢測濃度在2.5～15.0 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

取“2.4”項(xiàng)下濃度10.0 μg/ml的溶液，按照“2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣6次，記錄峰面積，測得RSD＝0.88%。結(jié)果表明，該方法精密度良好。

2.6 回收率試驗(yàn)

取已知含量的同批樣品（批號(hào)：120314）3份，分別取40 mg，再分別準(zhǔn)確加入間苯三酚對照品32mg（80%）、40mg（100%）、48mg（120%），按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備溶液。按“2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，用回歸方程計(jì)算，然后計(jì)算加樣回收率。結(jié)果表明，該方法回收率良好，詳見表1。

2.7 含量測定

分別取批號(hào)為120101、120303、120314的注射用間苯三酚各5支（40 mg），按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備樣品溶液，按“2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。樣品含量測定結(jié)果詳見表2。

2.8 配伍穩(wěn)定性考察

2.8.1 pH值的變化情況：在室溫[（25±1）℃]條件下，測定6種輸液的pH值后，模擬臨床用藥，將注射用間苯三酚80mg與5%葡萄糖注射液、10%葡萄糖注射液、0.9%氯化鈉注射液，5%葡萄糖氯化鈉注射液、乳酸林格氏注射液和轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液各200 ml配伍后，在0、1、2、3、4、5、6 h時(shí)分別測定配伍液放置不同時(shí)間的pH值。結(jié)果6種配伍液的pH值均未發(fā)生明顯變化，詳見表3。

圖2 高效液相色譜圖A.陰性對照液；B.間苯三酚對照品溶液；C.0.9%氯化鈉注射液；D.0.9%氯化鈉注射液配伍液；E.乳酸林格氏注射液；F.乳酸林格氏注射液配伍液；G.轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液；H.轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液配伍液；I.5%葡萄糖氯化鈉注射液；J.5%葡萄糖氯化鈉注射液配伍液；K.5%葡萄糖注射液；L.5%葡萄糖注射液配伍液；M.10%葡萄糖注射液；N.10%葡萄糖注射液配伍液；1.間苯三酚Fig 2 HPLC chromatogramsA.negative control；B.phloroglucinol control；C.0.9%Sodium chloride injection；D.mixture of 0.9%Sodium chloride injection；E.Lactated Ringer’s injection；F.mixture of Lactated Ringer’s injection；G.Invert sugar and electrolytes injection；H.mixture of Invert sugar and electrolytes injection；I.5%Glucose and sodium chloride injection；J.mixture of 5%Glucose and sodium chloride injection；K.5%Glucose injection；L.mixture of 5%Glucose injection；M.10%Glucose injection；N.mixture of 10%Glucose injection；1.phloroglucinol

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 1Results of recovery tests（n＝9）

表2 樣品含量測定結(jié)果（n＝5）Tab 2 Results of contents determination of samples（n＝5）

表3 6種配伍液的pH值變化結(jié)果Tab 3 pH value of 6 kinds of mixtures at different time points

2.8.2 間苯三酚含量的變化情況：在室溫條件下，模擬臨床用藥，將注射用間苯三酚80 mg與6種輸液各200 ml配伍后，在0、1、2、3、4、5、6 h時(shí)分別按照“2.1.3”項(xiàng)下方法制備配伍溶液，測定配伍液放置不同時(shí)間的主藥含量。結(jié)果6種配伍液的主藥含量均無顯著變化，基本保持穩(wěn)定，詳見表4。

表4 6種配伍液中間苯三酚的相對含量隨時(shí)間變化結(jié)果（%%）Tab 4 Relative contents of phloroglucinol in 6kinds of mixtures at different time points（%%）

2.8.3 5-羥甲基糠醛（5-hydroxymethyl furfural，5-HMF）的變化情況：按照2010年版《中國藥典》方法，在0、1、2、3、4、5、6 h時(shí)分別精密量取注射用間苯三酚與含糖溶液中的配伍液適量，置于100 ml量瓶中，用水稀釋至刻度，在284 nm波長處測定吸光度。結(jié)果4種含糖配伍液的5-HMF吸光度均在限度控制范圍內(nèi)，且在不同時(shí)間無顯著變化，詳見表5。

2.8.4 溶液顏色變化和可見異物觀察：在0、1、2、3、4、5、6 h時(shí)分別用燈檢法檢查6種配伍液的顏色和可見異物。結(jié)果，配伍液在燈檢裝置下無明顯可見異物和微細(xì)可見異物檢出；在6 h內(nèi)配伍液的顏色均無變化，檢查結(jié)果符合規(guī)定；對各時(shí)間點(diǎn)高效液相色譜圖進(jìn)行觀察，未見有新物質(zhì)峰出現(xiàn)。

表5 4種含糖配伍液的5-HMF吸光度隨時(shí)間變化結(jié)果Tab 5 Absovption of 5-HMF in 4 kinds of sugar mixtures at different time points

3 討論[3-4]

文獻(xiàn)報(bào)道間苯三酚的高效液相法測定以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-水（50∶50，V/V）為流動(dòng)相，檢測波長為248nm[4]；或以乙腈-水（9∶91，V/V）為流動(dòng)相，檢測波長為265 nm[3]。本研究選擇210 nm作為檢測波長，信號(hào)相應(yīng)更強(qiáng)、分離度更好，對照溶液所需要的濃度較小，可以節(jié)約對照品。

5-HMF是葡萄糖等單糖化合物在高溫或弱酸等條件下脫水產(chǎn)生的一個(gè)醛類化合物，該化合物對人體橫紋肌和內(nèi)臟有損害[5]。藥品與葡萄糖注射液配伍后在放置過程中可能會(huì)分解產(chǎn)生5-HMF。因此，在藥物與含糖輸液配伍穩(wěn)定性研究中不可忽視，必須檢測5-HMF的含量。5-HMF的最大吸收波長為284nm，該波長處5%葡萄糖注射液、10%葡萄糖注射液、5%葡萄糖氯化鈉注射液及轉(zhuǎn)化糖電解質(zhì)注射液的干擾較少，故可用紫外分光光度法檢測其吸光度。

試驗(yàn)結(jié)果表明，間苯三酚與6種輸液的配伍液的pH值、主藥含量在前6 h變化不顯著；與4種含糖溶液配伍液的5-HMF的吸光度6 h內(nèi)均在限度控制范圍內(nèi)，且顏色無顯著變化，也無明顯可見異物；與2種不含糖輸液配伍液的顏色無顯著變化，也無明顯可見異物。6種配伍液不同時(shí)間點(diǎn)的高效液相色譜圖也未見有新物質(zhì)色譜峰。說明常溫下，間苯三酚與臨床6種常用輸液配伍，在6 h內(nèi)相對穩(wěn)定。藥品使用溶媒應(yīng)遵照藥品說明書，本試驗(yàn)可為臨床特殊情況下使用該藥提供參考。

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[3]李健和，胡弘霞，黎銀波，等.注射用間苯三酚的制備、質(zhì)量控制及穩(wěn)定性考察[J].中國藥房，2007，18（4）：286.

[4]陳詠昕，林冬煌.高效液相色譜法測定間苯三酚口服凍干片的溶出度[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，21（6）：679.

[5]何伍，凌霄.含葡萄糖注射液中5-羥甲基糠醛限度的檢測方法[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2008，39（1）：47.