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    大豆低聚肽對試驗(yàn)動物血液指標(biāo)的影響及其在豬體內(nèi)的藥代動力學(xué)研究

    2013-12-03 03:13:54李海燕宋琳琳佟麗鑫
    中國畜牧獸醫(yī)文摘 2013年10期
    關(guān)鍵詞:血粘度灌胃膽固醇

    李海燕 宋琳琳 佟麗鑫

    (吉林省通化市二道江區(qū)畜牧獸醫(yī)總站,吉林通化 134003)

    前言

    低聚肽全營養(yǎng)蛋白質(zhì)粉是以大豆低聚肽為主要功能性原料,結(jié)合人體營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn),針對我國人體營養(yǎng)需求特點(diǎn)研制開發(fā)生產(chǎn)的新一代高科技功能性蛋白質(zhì)食品,蛋白吸收率遠(yuǎn)高于常規(guī)蛋白質(zhì)(是大豆分離蛋白的 1.5 倍),可不經(jīng)腸胃消化,直接被人體100%吸收,同時(shí)具有多種生理活性功能,在快速補(bǔ)充蛋白質(zhì)的同時(shí)具有促進(jìn)脂肪代謝、增強(qiáng)免疫力、抗疲勞、增加肌肉力量、補(bǔ)充體力、調(diào)節(jié)血壓、血脂的作用。由于大豆低聚肽的分子量較小,水溶性很高,即使在50%的高濃度下仍具有流動性,易于生產(chǎn)速溶飲品和高蛋白飲品。正由于大豆低聚肽比傳統(tǒng)大豆蛋白更易消化吸收,能夠迅速給肌體提供能量,無蛋白變性、無豆腥味,易溶于水,酸性條件下不產(chǎn)生沉淀,溶液粘度低,受熱凝固,同時(shí)具有獨(dú)特的生理功能等特性,因此具有十分廣闊的開發(fā)應(yīng)用前景。

    本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用的大豆低聚肽是一種由2~6個(gè)氨基酸組成的、分子量在200~800 Dalton 的混合肽產(chǎn)品。與原蛋白相比,大豆低聚肽具有水溶性、持水性、起泡性,能在pH2~10的任何酸堿條件下完全溶解。大豆低聚肽能與其它食品配料完全溶合,并保持各自原有的物化及營養(yǎng)特性。本次實(shí)驗(yàn)通過對小鼠、大鼠及豬進(jìn)行灌胃,研究大豆低聚肽對2型糖尿病小鼠的降血糖作用;對實(shí)驗(yàn)性高膽固醇血癥小鼠的降膽固醇作用;對大鼠的全血粘性影響及在豬體內(nèi)的藥代動力學(xué),為大豆低聚肽的應(yīng)用提供借鑒。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 試驗(yàn)藥品

    大豆低聚肽:由國家大豆深加工技術(shù)研究推廣中心提供。

    膽固醇:上海惠世生化試劑有限公司,分析純。

    葡萄糖:北京北化精細(xì)化學(xué)品有限責(zé)任公司,分析純。

    鄰苯二甲醛:上海試劑一廠,化學(xué)純。

    鄰甲苯胺:沈陽試劑一廠,分析純。

    肝素鈉注射液上海生物化學(xué)制藥廠生產(chǎn),批號:011102。

    丙基硫氧嘧啶:上海復(fù)星朝暉制藥廠,批號:000503。

    1.1.2 試驗(yàn)動物

    小鼠:取體重18~22 g、25~30 g的小鼠各40只,前者雌性,后者雌雄各半。分別隨機(jī)分成低、中、高、對照組和模型組五組,每組8只。

    大鼠:取體重為200~250 g健康大鼠25只,雌雄各半。隨機(jī)分為高、中、低和對照組和模型組五組,每組5只。

    豬:取體重為60 kg健康豬4頭,公母各半。

    1.1.3 儀器

    離心機(jī)、震蕩器、吸量管、水浴鍋、751分光光度計(jì)、離心管、棉球、剪刀、手術(shù)刀、鑷子、抗凝血玻璃管、全自動血液粘度儀、容量瓶、燒杯、量筒、試管架、BASC半自動生化儀(法國)、膽固醇試劑盒(北京中生公司)、JKDL%4自清洗旋轉(zhuǎn)式粘度計(jì)(北京普利生)。

    1.2 方法

    1.2.1 血糖的測定(鄰甲苯胺法)

    試驗(yàn)鼠禁食4h后,按低、中、高劑量實(shí)驗(yàn)組分別灌胃給予大豆低聚肽50、100和150 mg/kg·d,灌胃1次/d,30 d后采集數(shù)據(jù),在處死前禁食12 h,頸動脈取血,取出的全血放入37℃烘箱中30 min,隨后置于4℃冰箱中冷卻,離心5 min,取出血清,檢測空腹血糖。

    1.2.2 血脂的測定(鄰苯二甲醛法)

    空白組喂食普通飼料,其它組喂食高脂飼料。試驗(yàn)鼠禁食4h后,按低、中、高劑量實(shí)驗(yàn)組分別灌胃給予大豆低聚肽50、100和150mg/kg·d,灌胃1次/d,給藥及樣本采集按體表面積換算,高劑量為臨床用量的2.5倍,低劑量為臨床等效量,其它各組分別灌胃給予生理鹽水(空白組與模型組),于末次給藥后禁食12 h,眼眶后靜脈叢取血,2 500轉(zhuǎn)15 min離心,取血清測定膽固醇。

    1.2.3 血液粘度的測定

    于末次給藥2 min后,除對照組外,其余各組分別皮下注射1%腎上腺素0.06ml/100g,共2次,每次間隔4h,中間將大鼠置于-10℃環(huán)境中冷刺激30 min(低溫冰箱),處理停食,于18 h后乙醚麻醉,分離雙側(cè)頸動脈取血,血樣用肝素鈉抗凝,充分混勻不得凝血(每1 250u抗凝3~4 ml全血),進(jìn)行全血粘度測定。測定結(jié)果用SPSS.v1.2軟件版統(tǒng)計(jì)軟件統(tǒng)計(jì),進(jìn)行方差分析;多組間兩兩比較用單因素方差分析。

    1.2.4 試驗(yàn)豬

    禁食0.5 h后,灌胃給與100 mg/kg體重的大豆低聚肽,給藥后不同時(shí)間采血,采用三氯醋酸溶液除去血中的蛋白質(zhì),用分光光度計(jì)測定無蛋白血濾液的OD值并計(jì)算血中的藥物濃度。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 結(jié)果

    2.1.1 大豆低聚肽對糖尿病模型小鼠血糖的影響

    大豆低聚肽對糖尿病模型小鼠血糖的影響參見表1。

    表1 大豆低聚肽對糖尿病模型小鼠血糖

    由表1可見:試驗(yàn)組小鼠的血糖含量明顯低于模型組,差異顯著,但與對照組血糖含量差異不顯著。

    2.1.2 大豆低聚肽對小鼠實(shí)驗(yàn)性高膽固醇血癥的影響

    由表2可知,模型組與空白對照組比,血清膽固醇明顯升高,大豆低聚肽高低劑量組與模型組比血清膽固醇含量明顯降低,證明所采用的動物模型是成功的,大豆低聚肽的藥效與預(yù)期相符。

    2.1.3 大豆低聚肽對大鼠全血粘度的影響

    由表3可見:模型組與空白對照組,各項(xiàng)數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理后,其結(jié)果有顯著性差異,說明造模成功;藥物組全血粘度(高切,中切)均低于空白對照組,而且由高劑量到低劑量全血粘度逐漸升高,說明大豆低聚肽對生理狀況下動物的全血液粘度有明顯的降低作用。

    表3 大豆低聚肽對大鼠全血粘度(x±S,n=5)

    2.1.4 大豆低聚肽對豬的藥代動力學(xué)

    給藥前與大豆低聚肽單劑量100 mg/ kg 灌胃給藥后于0.08,0.16,0.25,0.33,0.5,0.75,1.0,1.5,2,2.5,3,3.5,4,4.5,5,5.5,6,7,8,9,10,12,14,16,18,20,22,24h后采血樣,依樣品測定方法操作,大豆低聚肽在豬血漿中的濃度時(shí)間曲線如圖1所示。

    圖1 豬血漿中的濃度時(shí)間曲線

    由圖1可見,大豆低聚肽在豬體內(nèi)吸收極快(5 min),且分布半衰期較小(12 h),說明大豆低聚肽灌胃在豬體內(nèi)分布較快。

    2.2 分析

    通過本次試驗(yàn),大豆低聚肽在一定程度上能降低2型糖尿病小鼠模型的血糖值的作用;不同劑量大豆低聚肽均能使小鼠血清膽固醇降低,可見大豆低聚肽可顯著降低小鼠實(shí)驗(yàn)性高膽固醇血癥的血清膽固醇,預(yù)防高脂血癥;大豆低聚肽對生理狀況下動物的全血液粘度有明顯的降低作用;豬灌胃給予大豆低聚肽后,大豆低聚肽在給藥5 min后入血,給藥10 min左右血中藥物濃度達(dá)到最高值。大豆低聚肽在豬體內(nèi)的半衰期約為12 h。在豬體內(nèi),藥物動力學(xué)數(shù)據(jù)并不能完全解釋臨床條件下的效果,只有將臨床效果結(jié)合起來才能決定藥物的代謝情況。

    3 討論

    由于大豆低聚肽能有效提高機(jī)體免疫力,降低糖尿病患者的血糖,防止糖尿病的合并癥的發(fā)生。加快糖尿病人的機(jī)體恢復(fù)。因此大豆低聚肽對糖尿病具有輔助治療作用。

    給動物喂食大豆低聚肽,血清中的膽固醇顯著下降,糞便中的膽固醇含量增加,證明大豆肽能阻止膽固醇在大腸中的吸收。大腸除排泄功能外還有吸收功能,對人體有害的物質(zhì)(包括膽固醇)如被大腸重新吸收對人體是非常有害的,大豆肽能刺激甲狀腺素分泌,促進(jìn)膽汁酸化,使膽固醇排出體外。

    大豆低聚肽與大豆蛋白雖然氨基酸組成數(shù)量不同,分子結(jié)構(gòu)不同,但氨基酸結(jié)構(gòu)未變,必需氨基酸,含量豐富,保留了原蛋白的營養(yǎng)特性,而且通過蛋白質(zhì)的改性作用消除了原蛋白中的營養(yǎng)抑制因子,使蛋白吸收利用效率提高。在人體內(nèi),肽的運(yùn)行體系與氨基酸相比具有吸收快、能耗低、轉(zhuǎn)化體能周期短的優(yōu)點(diǎn)。

    人類所需的營養(yǎng)素多種多樣,但蛋白質(zhì)是人體所需第一營養(yǎng)素,“沒有蛋白質(zhì)就沒有生命”,人體生長發(fā)育、病后恢復(fù)、器官構(gòu)成、容顏氣色、能量供給、“健康、美容、長壽”無不與蛋白質(zhì)密切相關(guān)。說明大豆低聚肽在人們?nèi)粘I钪械膽?yīng)用具有很好的前景。

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