補(bǔ)氣化痰方對心肌梗死模型大鼠心功能及血管新生的影響

郜俊清,陳 ,于宏梅,孫劍光,趙德強(qiáng)

(上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬普陀醫(yī)院,上海200062)

心肌梗死目前國際公認(rèn)的治療方案是盡早行血管再灌注治療。直接PCI為國際公認(rèn)的最快最直接挽救瀕死心肌的方法之一,但是梗死相關(guān)血管支配心肌的受損甚至死亡對心功能及患者預(yù)后有不可逆的危害,因此對于最大程度挽救梗死相關(guān)血管支配的受損心肌是目前心肌梗死治療的一大課題?！督饏T要略》中闡述瓜蔞薤白半夏湯主治痰盛瘀阻型胸痹,而真心痛的病機(jī)多氣虛,兼有痰濁瘀阻,故課題組在經(jīng)典方的基礎(chǔ)上,增加黃芪,補(bǔ)氣以行氣,使經(jīng)典組方既具備化痰祛邪的作用,又具有補(bǔ)氣扶正的作用。

1 材料與試劑

1.1 動(dòng)物 選擇清潔級SD大鼠 50只,體質(zhì)量(220±20)g,由上海松連實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖場提供(批準(zhǔn)號:SCXK滬2008-0016)。

1.2 藥物 補(bǔ)氣化痰方:黃芪50 g,瓜蔞12 g,薤白12 g,半夏9 g,大火煮沸后小火繼續(xù)燒20min,將藥液濃縮至100 mL,根據(jù)大鼠與人體體表面轉(zhuǎn)換,大鼠需要服藥劑量為0.9mL/100 g。將50 mg氯沙坦鉀溶解于100 mL生理鹽水中,氯沙坦鉀組以0.9 mL/100 g服用。各組每天分2次灌胃,每次用生理鹽水稀釋至2 mL進(jìn)行灌胃,模型組與正常組進(jìn)行同劑量生理鹽水灌胃。造模后連續(xù)灌胃30 d。

1.3 試劑 小動(dòng)物超聲儀(VISUALSONICS上海中山醫(yī)院),熒光倒置相差顯微鏡(Olympus CKX41),低速離心機(jī)(eppendorf centrifu ge5702),CD31一抗(Abcam),CD31二抗(Abcam),免疫組化洗滌液(碧云天),免疫組化封閉液(碧云天)。

2 方法

2.1 大鼠心肌梗死模型 進(jìn)行1 w適應(yīng)性飼養(yǎng)后,進(jìn)行隨機(jī)分組,除正常組以外的SD大鼠在2.5%戊巴比妥腹腔麻醉下,于第四肋骨間切開胸腔,分離出大鼠心臟,結(jié)扎冠脈前降支(LAD)近端,縫合傷口。正常組大鼠僅切開胸腔,暴露心臟后,關(guān)閉胸腔,縫合傷口。所有大鼠術(shù)后15萬u青霉素肌注3 d。

2.2 分組干預(yù) 共分為5組,治療組(黃芪瓜蔞薤白半夏湯組),中藥對照組(瓜蔞薤白半夏湯組),西藥對照組(科素亞組),模型組(僅進(jìn)行心梗造模),正常組(假手術(shù)組),每組12只大鼠,共60只大鼠。干預(yù)組在術(shù)后當(dāng)天灌胃干預(yù),模型組與正常組給予相應(yīng)劑量生理鹽水。

2.3 統(tǒng)計(jì)方法 采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 17.0對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,結(jié)果以( x±s)表示,統(tǒng)計(jì)學(xué)處理用方差檢驗(yàn),以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 心肌梗死造模及模型大鼠存活率結(jié)果 造模24 h內(nèi),治療組2只大鼠死亡,中藥對照組2只大鼠死亡,其他各組各有1只大鼠死亡。48 h內(nèi),治療組累計(jì)3只大鼠死亡,中藥對照組3只大鼠死亡,其他各組各有2只大鼠死亡。48 h后各組未出現(xiàn)死亡大鼠。48 h之內(nèi)大鼠存活率為:治療組75%;中藥對照組75%;西藥對照組83.3%;模型組83.3%;正常組83.3%,總體存活率80%,各組間存活率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3.2 補(bǔ)氣化痰方對心肌梗死大鼠心功能的影響 5組在48 h后進(jìn)行心臟超聲檢測,除正常組外,各組心臟EF,心臟前壁活動(dòng)度明顯下降,與正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。28 d后,復(fù)查心臟超聲,模型組較48 h EF明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。前后比較EF下降值,治療組較其他3組明顯減少,見表1。

表1 各組48 h、28 d心臟超聲情況比較

3.3 補(bǔ)氣化痰方對心肌梗死大鼠心肌CD31表達(dá)的影響 28 d處死大鼠,取出心臟,取梗死區(qū)邊緣存活心肌,切片,采用免疫組化的方法,進(jìn)行CD31染色,在40倍光鏡下觀察計(jì)數(shù)CD31染色數(shù)目即微血管數(shù)目,見圖1。

圖1 補(bǔ)氣化痰方對心肌梗死大鼠心肌CD31表達(dá)的影響

3.4 補(bǔ)氣化痰方對心肌梗死大鼠肝腎功能的影響5組大鼠在28 d時(shí),處死并取血,檢測ALT、AST、BUN、Cr和UA,結(jié)果顯示各組肝腎功能差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,見表2。

表2 補(bǔ)氣化痰方對心肌梗死大鼠肝腎功能的影響

4 討論

20世紀(jì)80年代以來急性心肌梗死治療學(xué)的重大進(jìn)展是再灌注治療。大量研究表明,急性心肌梗死早期使血管再通,可明顯降低病死率并改善幸存者左心室功能[1-2]。直接PCI為國際公認(rèn)的最快最直接挽救瀕死心肌的方法之一,但是梗死相關(guān)血管支配心肌的受損甚至死亡對心功能及患者預(yù)后有不可逆的危害,因此對于最大程度挽救梗死相關(guān)血管支配的受損心肌是目前心肌梗死治療的一大難題。

無論是溶栓治療、直接PCI治療或者是急診冠脈搭橋治療,對于梗死血管支配的受損心肌的挽救具有一定局限性。醫(yī)學(xué)研究者們采用溶栓結(jié)合直接PCI、干細(xì)胞治療等多種方法試圖最大限度挽救受損心肌,但是結(jié)果都不令人樂觀。

心肌梗死中醫(yī)稱之為真心痛,早在《黃帝內(nèi)經(jīng)》中就有記載:“手足青至節(jié),心痛甚……旦發(fā)夕死,夕發(fā)旦死?！睗h代張仲景《金匱要略》中有胸痹心痛專篇,提出瓜蔞薤白半夏湯等作為真心痛、胸痹的治療方法,奠定了真心痛的辨治基礎(chǔ)。瓜蔞薤白半夏湯功效為行氣解郁,通陽散結(jié),祛痰寬胸?，F(xiàn)代研究[3-5]顯示,瓜蔞薤白半夏湯能改善冠脈內(nèi)皮功能,從而防止心肌損傷,并可改善心絞痛癥狀,顯著降低血脂。

本研究在經(jīng)典方基礎(chǔ)上,大劑量使用黃芪,補(bǔ)氣化痰[6-7],旨在補(bǔ)氣以行氣,祛邪兼扶正。在大鼠心肌梗死模型中,補(bǔ)氣化痰方未增加死亡率,且肝腎功能與對照組比較未見明顯差異。在大鼠心肌梗死造模后48 h,各組大鼠心臟超聲EF未見明顯差異,在28 d后,補(bǔ)氣化痰方組心臟EF下降較其他各組明顯減緩,心功能較各組明顯改善,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在28 d大鼠心肌CD31染色中顯示,補(bǔ)氣化痰方組大鼠心肌CD31表達(dá)明顯高于其他各對照組,提示補(bǔ)氣化痰方具備促進(jìn)血管新生的作用,其作用可能是改善大鼠心肌梗死后心功能的機(jī)制。

補(bǔ)氣化痰方能有效提高心肌梗死大鼠心臟EF值,其可能的機(jī)制是促進(jìn)梗死后血管新生從而改善心臟功能。

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