應(yīng)用過氧化氫發(fā)生器對實驗動物屏障環(huán)境及設(shè)施消毒效果的觀察

楊 文，陳健茂，李紅兵，郎多勇，冉林武

(寧夏醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心，銀川 750004)

目前，用于屏障環(huán)境內(nèi)空氣和表面消毒的方法主要有:乙醇擦拭，過氧乙酸擦拭，含氯消毒劑擦拭以及紫外燈照射等方法［1，2］。這些常規(guī)方法副作用和損壞性明顯，而且消毒不徹底。過氧化氫(H2O2)因具有氧化還原作用而具有殺菌效果，可根除細菌、病毒、真菌和芽孢，是一種廣譜微生物消毒和滅菌方式，而且易分解、對環(huán)境無毒［3］。因此，本研究旨在觀察H2O2蒸汽對屏障環(huán)境內(nèi)表面、臺面以及空氣的消毒效果。現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 材料和方法

1.1 儀器設(shè)備與試劑

BIOQUELL Z過氧化氫氣體發(fā)生器(依科曼有限公司);生化培養(yǎng)箱(SPX-158)，超凈工作臺(SWCJ-2F)，直徑9 cm的玻璃培養(yǎng)皿，營養(yǎng)瓊脂粉(上海生化科技有限公司)，30%過氧化氫(上海廣諾化學(xué)科技有限公司)。

1.2 試驗場所

寧夏醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心屏障環(huán)境設(shè)施，面積約600 m2，三走廊結(jié)構(gòu)。動物實驗區(qū)共12間動物實驗室，為全新風模式。輔助功能區(qū)域包括二更、清潔走廊、潔存室、次清潔走廊、緩沖間等。飼養(yǎng)室頂部進風，四角回風，配有30 W石英紫外燈管(254 nm)。環(huán)境條件為:溫度(22±2)℃，濕度(50±20)%，通風換氣次數(shù)為15次/h左右，相鄰房間梯度壓差15～20 Pa。

1.3 屏障環(huán)境和設(shè)施細菌檢測方法

1.3.1 空氣落下菌的檢測

檢測方法按 GB/T14925-2001［4］進行。具體方法如下:將普通營養(yǎng)瓊脂經(jīng)過高壓滅菌器滅菌后倒入直徑9 cm的一次性平皿內(nèi)，4℃保存。采樣時，每室設(shè)4角及中央5點，4角的布點部位距墻壁1 m處，將普通營養(yǎng)瓊脂平板(直徑為9 cm)放置于室內(nèi)各采樣點處，將平板蓋打開，扣放平板旁，暴露30 min，加蓋，立即放于37℃恒溫箱內(nèi)培48 h后，計算菌落數(shù)(CFU/皿)。于環(huán)境消毒處理前、后分別進行采樣。

1.3.2 屏障環(huán)境和設(shè)施表面細菌的檢測

采用拭子法［5］，檢查屏障系統(tǒng)各個功能區(qū)域的墻壁、地面、飼養(yǎng)籠具等表面的細菌情況。主要包括:二更、清潔走廊、潔存間、動物實驗室、次清潔走廊和緩沖間等。于環(huán)境消毒處理前、后分別進行采樣。用5 cm×5 cm的標準滅菌規(guī)格板，放在被檢物體表面，連續(xù)采樣4個。用無菌棉拭子在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返涂擦，并隨之轉(zhuǎn)棉拭，剪去手接觸部位，將棉拭子投入含5 mL生理鹽水的試管內(nèi)。將試管在震蕩器上充分振蕩，取0.5 mL樣品接種于經(jīng)滅菌的營養(yǎng)瓊脂平板(直徑9 cm)上，置37℃培養(yǎng)48 h，計數(shù)菌落數(shù)。表面細菌總數(shù)計算方法:細菌總數(shù)(CFU/cm2)=平板上菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)/采樣面積(cm2)。

1.4 BIOQUELL Z過氧化氫氣體發(fā)生器系統(tǒng)的準備和消毒

BIOQUELL Z過氧化氫氣體發(fā)生器系統(tǒng)主要由主設(shè)備和控制臺組成，將主設(shè)備推進滅菌房間的中間，將控制臺放在待滅菌房間的門外，用電纜將其與主設(shè)備連接，然后給主設(shè)備加注H2O2液體，固定H2O2液體輸送流量，用手持式紅外測距儀測量房間的體積，然后密閉門窗，在主控制臺設(shè)置預(yù)熱時間，汽化時間和密閉保持時間，啟動滅菌周期。

H2O2不同用量對屏障環(huán)境和設(shè)施消毒的效果，對二更、清潔走廊、潔存間、動物實驗室、次清潔走廊和緩沖間，分別以6 mL/m3、9 mL/m3和12 mL/m3H2O2液體用量，將H2O2原液經(jīng)BIOQUELL Z過氧化氫氣體發(fā)生器產(chǎn)生H2O2蒸汽，密閉作用60 min。采樣檢查屏障環(huán)境內(nèi)空氣落下菌和表面的細菌。

2 結(jié)果

2.1 不同用量的H2O2對屏障環(huán)境內(nèi)空氣落下菌數(shù)的影響

由表 1可見，將 H2O2原液以不同用量經(jīng)BIOQUELL Z過氧化氫氣體發(fā)生器產(chǎn)生H2O2蒸汽，H2O2用量為6 mL/m3對空氣落下菌較少的區(qū)域，如二更、清潔走廊、潔存間、次清潔走廊和緩沖間，作用60 min，可以完全殺滅空氣中的落下菌;H2O2用量為9 mL/m3以上，可以完全殺滅細菌數(shù)高的動物飼養(yǎng)室空氣落下菌。

2.2 不同用量H2O2對屏障環(huán)境內(nèi)不同位置表面細菌數(shù)的影響

由表 2可見，將 H2O2原液以不同用量經(jīng)BIOQUELL Z過氧化氫氣體發(fā)生器產(chǎn)生H2O2蒸汽，H2O2用量為6 mL/m3僅能殺滅細菌數(shù)少的環(huán)境內(nèi)表面的細菌;用量為9 mL/m3能殺滅絕大部分屏障環(huán)境內(nèi)不同位置的表面細菌;而H2O2用量為12 mL/m3，能完全殺滅環(huán)境內(nèi)不同位置表面的細菌。

3 討論

實驗動物屏障環(huán)境及設(shè)施在使用過程中，為了解決微生物的污染問題，保證動物質(zhì)量，屏障環(huán)境及設(shè)施的消毒是必不可少的一個重要環(huán)節(jié)。消毒和滅菌方法兼顧到實驗動物和工作人員的安全，用量少效果好，無殘留，對環(huán)境無污染對病原菌不易產(chǎn)生耐藥性，是選擇比較理想的實驗動物屏障環(huán)境及設(shè)施維持性用消毒劑的標準［6］。

表1 不同用量的H2O2對屏障環(huán)境內(nèi)空氣落下菌數(shù)的影響(CFU/皿)Tab．1 Effects of different dosages of H2O2 on the number of air fall bacteria in laboratory animal barrier environment(CFU/plate)

表2 不同用量H2O2對屏障環(huán)境內(nèi)不同位置表面細菌數(shù)的影響(CFU/cm2)Tab．2 Effects of different dosages of H2O2on the number of hard surface bacteria among different areas in laboratory animal barrier environment(CFU/cm2)

實驗動物屏障環(huán)境及設(shè)施消毒，以往采多用紫外燈照射或用消毒液如過氧乙酸、過氧化氫和二氧化氯等進行噴霧消毒，但是存在消毒不徹底、消毒液使用量大和對屏障環(huán)境內(nèi)儀器設(shè)備金屬表面、臺面 和 墻 面 的 腐 蝕 等 缺 點［7，8］。 本 實 驗 使 用BIOQUELL Z過氧化氫氣體發(fā)生器產(chǎn)生H2O2蒸汽，H2O2用量為9 mL/m3以上可對屏障環(huán)境內(nèi)空氣落下菌和不同位置的表面細菌起到較好的殺滅作用。BIOQUELL Z過氧化氫蒸汽發(fā)生器經(jīng)專門設(shè)計，具有較好的物質(zhì)相容性，對金屬表面、臺面、地面和墻面腐蝕性小，適用于屏障環(huán)境、生物安全柜、傳遞窗、動物籠交換站、隔離器和醫(yī)療器械等表面的消毒和滅菌，整個過程實現(xiàn)程序控制，操作簡單。而且，在消毒過程結(jié)束后，汽化H2O2極易被還原成水和氧氣，與其他滅菌方式相比無危害性的殘留物，對操作人員及環(huán)境沒有危害。

［1］ 楊華明，易濱．現(xiàn)代醫(yī)院消毒學(xué)［M］．北京:人民軍醫(yī)出版社，2008:522－531．

［2］ 任珺，譚德講．實驗動物屏障環(huán)境中化學(xué)消毒劑的選用［J］．中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2008，18:67 －73．

［3］ 帖金鳳，王長德，陳金龍，等．過氧化氫蒸汽對生物安全實驗室滅菌效果觀察［J］．中國消毒學(xué)雜志，2012，29:463－465．

［4］ 中華人民共和國國家標準．實驗動物環(huán)境及設(shè)施［S］．中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布，2001:3－10．

［5］ 孫俊，周明浩，徐燕，等．消毒技術(shù)與應(yīng)用［M］．北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2003:346－347．

［6］ 張大維，邴國強，徐彩云，等．實驗動物屏障環(huán)境常用消毒藥品皮膚刺激實驗［J］．中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2007，17:102－104．

［7］ 韓宏云，劉保群．三種消毒方法對無菌間空氣消毒效果觀察［J］．中國消毒學(xué)雜志，2003，20:210 －211．

［8］ 潘瑞輝，陳曉琴，譚建琪．紫外線和百消凈消毒液聯(lián)合消毒動物實驗室的效果觀察［J］．廣西醫(yī)學(xué)，2006，28:898－899．