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    蛋黃卵磷脂提取工藝探索

    2013-11-23 07:22:24何深知邵建群宮寧強(qiáng)
    實(shí)驗(yàn)技術(shù)與管理 2013年11期
    關(guān)鍵詞:卵磷脂蛋黃溶劑

    何深知,邵建群,宮寧強(qiáng),陳 敏,顧 微

    (首都醫(yī)科大學(xué) 化學(xué)生物學(xué)與藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心,北京 100069)

    卵磷脂是一種含磷的極性脂類物質(zhì),由法國(guó)人Gobley于1846—1847年從腦和蛋黃中首先發(fā)現(xiàn)[1],目前,它被譽(yù)為與蛋白質(zhì)、維生素并列的 “第三營(yíng)養(yǎng)素”。卵磷脂有極高的營(yíng)養(yǎng)和醫(yī)學(xué)價(jià)值,具有延緩衰老、提高大腦活力、治療動(dòng)脈硬化、解除心腦血管疾病、預(yù)防脂肪肝、潤(rùn)澤皮膚等多種生理功能,同時(shí)還具有很好的乳化作用和抗氧化性能[2]。因此,卵磷脂在食品、醫(yī)藥、化妝品等行業(yè)應(yīng)用廣泛[3]。

    卵磷脂主要存在于大豆、蛋黃、菜籽、堅(jiān)果、肉類、魚類及動(dòng)物內(nèi)臟中[4]。卵磷脂主要包括蛋黃卵磷脂和大豆卵磷脂。蛋黃卵磷脂純度高,其中含磷脂酰膽堿(PC)達(dá)78%,而大豆卵磷脂中只有16%;另外,蛋黃卵磷脂富含飽和脂肪酸,其氧化穩(wěn)定性也優(yōu)于大豆卵磷脂,對(duì)人而言,蛋黃卵磷脂比大豆卵磷脂更易被人體吸受,因此蛋黃卵磷脂的功能特性及應(yīng)用開發(fā)現(xiàn)在正日益受到人們的關(guān)注[5]。

    提取卵磷脂的方法主要有:有機(jī)溶劑萃取法、柱層析法、乙?;?、高效液相色譜法、半透膜法、復(fù)合鹽沉淀法以及超臨界二氧化碳萃取法等[6]。用上述方法研究大豆卵磷脂的文獻(xiàn)很多,方法成熟,而對(duì)蛋黃卵磷脂的研究起步較晚,其提取方法的研究特別是將其用于教學(xué)研究的文獻(xiàn)相對(duì)較少。目前,蛋黃卵磷脂由于受到提取技術(shù)的限制,成功制取的量非常少,致使其價(jià)格相當(dāng)昂貴,故市場(chǎng)上的卵磷脂多為大豆磷脂。因此,系統(tǒng)研究蛋黃卵磷脂的提取技術(shù)具有重要價(jià)值。

    本文采用不同的有機(jī)溶劑,對(duì)蛋黃中的卵磷脂在不同的工藝條件下進(jìn)行了提取,以期找到較合理的提取工藝條件。此外,本文還對(duì)不同的提取方法進(jìn)行了比較,為最終廉價(jià)高效地提取蛋黃卵磷脂的工業(yè)化奠定基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

    1 實(shí)驗(yàn)

    1.1 試劑與儀器

    試劑:市售鮮雞蛋,體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇,無水乙醇,乙醚,丙酮,氯仿,石油醚(北京現(xiàn)代東方精細(xì)化學(xué)品有限公司,AR)。

    儀器:電子分析天平(TE212-L),賽多利斯科學(xué)儀器有限公司;循環(huán)水式多用真空泵(SHB-ⅢA),鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司;超聲波清洗儀(KQ-500型),昆山市超聲儀器有限公司。

    1.2 卵磷脂的提取步驟

    稱取煮熟的雞蛋黃并研磨,加入體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇研細(xì)抽濾;濾渣再加入95%的乙醇研細(xì)抽濾,合并兩次濾液,并轉(zhuǎn)移至燒瓶中,蒸餾除去乙醇;殘余物加少量無水乙醇,蒸發(fā)皿上蒸干,得到黃色油狀物;冷卻后加入氯仿使其完全溶解,再慢慢加入丙酮,即有卵磷脂析出。重復(fù)加入氯仿和丙酮的操作,最后得到較純凈的卵磷脂,并計(jì)算提取率。

    1.3 探索提取工藝的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

    生物活性物質(zhì)的提取效果受多種因素的影響,比如提取溶劑的種類、提取溫度、溶液的pH値、浸泡時(shí)間,提取方式、提取次數(shù)、溶劑用量等[7]??紤]到卵磷脂不耐高溫,在25℃時(shí)活性最強(qiáng),高于50℃時(shí),其中的不飽和脂肪酸極易氧化而失去生理活性;同時(shí)溶液的pH値也不宜使溶液呈堿性條件,因?yàn)樵趬A性環(huán)境中卵磷脂易發(fā)生分解,喪失生理活性[8]。所以,我們把提取溫度定在25℃,溶液的pH値定在中性環(huán)境,然后在上述提取實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上從溶劑種類、浸泡時(shí)間,提取方式、提取次數(shù)、溶劑用量5個(gè)方面進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn),從而獲得卵磷脂的最優(yōu)提取條件。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 溶劑種類對(duì)卵磷脂提取率的影響

    卵磷脂為兩性分子,既有脂溶性,又具有親水性。卵磷脂易溶于氯仿,可溶于乙醇、乙醚、甲醇、苯、石油醚等,不溶于丙酮。以往文獻(xiàn)常選用95%的乙醇作為提取劑,再用氯仿和丙酮把卵磷脂分離出來[9]。由于乙醇溶解性好、廉價(jià)、無毒且可回收利用[10],本文中也用它作為提取劑。氯仿作為溶劑毒性大,污染環(huán)境并危害操作者的健康,應(yīng)以其他綠色溶劑替代。為此,選用兩種較為安全的溶劑,即乙醚和石油醚,與氯仿進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn),其他條件不變,實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

    表1 3種溶劑提取率的對(duì)比

    比較可知,除氯仿外,用乙醚分離得到的卵磷脂提取率較石油醚高,因此本文用乙醚代替氯仿。

    2.2 浸泡時(shí)間對(duì)提取率的影響

    抽濾前將蛋黃放在95%的乙醇中浸泡一下(下述的浸泡的含義同此),然后按上述的提取步驟提取,對(duì)比不同浸泡時(shí)間的提取率。選取15、30、60、120、240 min進(jìn)行實(shí)驗(yàn),其他條件不變。提取溫度25℃;1次提取。結(jié)果如圖1所示。

    圖1 浸泡時(shí)間對(duì)卵磷脂提取率的影響

    從圖1可以看出,在實(shí)驗(yàn)時(shí)間范圍內(nèi),卵磷脂的提取率隨著浸泡時(shí)間的增加而增加,可見延長(zhǎng)浸泡時(shí)間有利于提高卵磷脂提取率。但考慮到教學(xué)課時(shí)及效率問題,將浸泡時(shí)間控制在40~60min范圍內(nèi)較為合適。

    2.3 超聲對(duì)提取率的影響

    超聲提取技術(shù)被譽(yù)為“中藥和天然產(chǎn)物提取的技術(shù)革命”,利用超聲波產(chǎn)生的強(qiáng)烈震動(dòng)、高的加速度、強(qiáng)烈的空化效應(yīng)、攪拌等特殊作用,破壞細(xì)胞壁,使溶劑易滲透到細(xì)胞中,加速天然活性成分的溶出[11]。實(shí)驗(yàn)中我們?cè)诮莸耐瑫r(shí)加上超聲強(qiáng)化,彌補(bǔ)了傳統(tǒng)有機(jī)溶劑浸泡提取法的不足。

    抽濾前,浸泡時(shí)加超聲進(jìn)行實(shí)驗(yàn),選取15、30、60 min進(jìn)行實(shí)驗(yàn),提取溫度25℃,1次提取,其他條件不變。結(jié)果如圖2。

    圖2 浸泡加超聲時(shí)間對(duì)卵磷脂提取率的影響

    從圖2可看出,超聲強(qiáng)化技術(shù)的采用明顯提高了卵磷脂的提取率。單純浸泡與浸泡加超聲兩種提取方式的提取率的比較見圖3。從圖3可知,加入超聲技術(shù)提取的優(yōu)越性是很明顯的,尤其在30min左右時(shí)間段內(nèi),浸泡加超聲比單純浸泡的提取率提高了3.16個(gè)百分點(diǎn)。因此,只要條件允許,應(yīng)采用浸泡加超聲的提取方式。

    圖3 單純浸泡與浸泡加超聲提取率比較

    2.4 1次浸泡與2次浸泡提取的提取率比較

    在總提取時(shí)間、總?cè)軇┝肯嗤瑮l件下,1次浸泡與2次浸泡的實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較見圖4。

    圖4 1次浸泡與2次浸泡提取率比較

    從圖4可看到,在總時(shí)間和總?cè)軇┝肯嗤那闆r下,不論是單純浸泡還是浸泡加超聲,2次提取的效果均比1次提取的效果好??梢韵胍娞崛〈螖?shù)越多,提取率會(huì)越高。但是文獻(xiàn)[12]中有數(shù)據(jù)指出,提取次數(shù)越多雜質(zhì)也越多,影響產(chǎn)品的純度,還會(huì)給后續(xù)步驟造成麻煩,因此,我們?cè)谖醋龆啻翁崛〉膶?duì)比實(shí)驗(yàn)的情況下采用2次提取。

    2.5 乙醇用量對(duì)提取率的影響

    提取劑用量一定會(huì)對(duì)最終提取率產(chǎn)生影響。本文選取95%的乙醇的用量為60、80、100、120、140mL進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn),結(jié)果如圖5所示。浸泡時(shí)間60min,提取溫度25℃,1次提取。

    圖5 乙醇用量對(duì)卵磷脂提取率的影響

    從圖5可看出,95%的乙醇用量在120mL(相當(dāng)于1g蛋黃的乙醇用量為5mL)之內(nèi)時(shí)提取率隨乙醇用量增加的增勢(shì)很強(qiáng),之后趨平。因此,從提取和乙醇回收兩方面考慮,1g蛋黃的乙醇用量為4~5mL為佳。

    3 結(jié)論

    綜合以上實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),得到提取卵磷脂最佳工藝條件是:提取溫度25℃;溶液的pH値為中性環(huán)境;以95%的乙醇作為提取劑,用乙醚和丙酮把卵磷脂分離出來;提取方式為浸泡加超聲;提取次數(shù)為2次,每次15~20min;1g蛋黃的乙醇用量為4~5mL。上述方法主要考慮了教學(xué)需求,所以可為實(shí)驗(yàn)教學(xué)采用,亦可作為蛋黃卵磷脂工業(yè)化生產(chǎn)的數(shù)據(jù)參考。

    4 結(jié)束語

    傳統(tǒng)的蛋黃卵磷脂的提取工藝的提取效率低,隨著高新技術(shù)的日益成熟,利用高新技術(shù)與傳統(tǒng)工藝結(jié)合將成為提取高純度卵磷脂的新的手段。

    進(jìn)入21世紀(jì)以來,我國(guó)蛋黃卵磷脂的提取和應(yīng)用取得了較大進(jìn)展,但還未能從蛋黃中提取高純度的食用、醫(yī)藥用卵磷脂。我國(guó)的卵磷脂生產(chǎn)就其生產(chǎn)規(guī)模、技術(shù)水平而言與國(guó)外相比還差距較大,仍需大量進(jìn)口。卵磷脂的生產(chǎn)是當(dāng)前國(guó)家重點(diǎn)支持的技術(shù)開發(fā)領(lǐng)域之一。將來還應(yīng)對(duì)蛋黃卵磷脂的基礎(chǔ)性質(zhì)、功能做深入研究,探索其不同及優(yōu)于大豆卵磷脂的特性,從而發(fā)展出適宜蛋黃卵磷脂的生產(chǎn)應(yīng)用技術(shù)。隨著高新技術(shù)的發(fā)展與應(yīng)用,相信不久的將來,優(yōu)質(zhì)蛋黃卵磷脂產(chǎn)品將會(huì)得到更大規(guī)模的開發(fā)與更廣泛的應(yīng)用。

    [1]常皓,王二雷,宮新統(tǒng),等.蛋黃卵磷脂研究概況[J].食品工業(yè)科技,2010(5):414-416.

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