4種檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)C反應(yīng)蛋白結(jié)果的可比性研究

陳小偉，胡利萍，韓麗萍△

江蘇省南京市六合區(qū)人民醫(yī)院：1.檢驗(yàn)科；2.藥劑科，江蘇南京 211500

C反應(yīng)蛋白(CRP)是一種急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，對(duì)鑒別病毒與細(xì)菌感染，炎癥過(guò)程的判斷，感染、膿毒癥的診斷和監(jiān)測(cè)等方面具有重要的臨床價(jià)值[1]。本院檢驗(yàn)科因?qū)嶋H工作需要，先后購(gòu)置了4種類型的CRP檢測(cè)儀器，分別為貝克曼AU5821生化儀、邁瑞B(yǎng)C5390血球儀、國(guó)賽Aristo特定蛋白儀和Orion Diagnostica Quick Read CRP分析儀，其中前3種檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)的是超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)，而Orion Diagnostica Quick Read CRP分析儀檢測(cè)的是CRP。實(shí)際上，hs-CRP與CRP為同一物質(zhì)，所檢測(cè)的均是CRP，二者結(jié)果具有可比性，但hs-CRP的靈敏度更高，能明顯地識(shí)別出CRP水平的輕度升高[2]。貝克曼AU5821生化儀檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確度高，連續(xù)多年在江蘇省臨床檢驗(yàn)中心特定蛋白室間質(zhì)評(píng)中評(píng)為優(yōu)秀，故本研究根據(jù)NCCLS EP9-A2[3]文件，以貝克曼AU5821生化儀為目標(biāo)檢測(cè)系統(tǒng)，分別對(duì)邁瑞B(yǎng)C5390血球儀、國(guó)賽Aristo特定蛋白儀和Orion Diagnostica Quick Read CRP分析儀的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較，以研究不同檢測(cè)系統(tǒng)所檢測(cè)的CRP水平是否具有可比性。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年6月于本院門診就診或住院治療的患者為研究對(duì)象，每天隨機(jī)收集8例患者的EDTA-K2抗凝全血及血清標(biāo)本(無(wú)脂血、黃疸、溶血)，連續(xù)收集6 d，共收集48份全血標(biāo)本和48份血清標(biāo)本。

1.2儀器與試劑 目標(biāo)系統(tǒng)：貝克曼AU5821生化儀，其檢測(cè)CRP的試劑及校準(zhǔn)品由南京澳林生物有限公司提供，質(zhì)控品由伯樂(lè)公司提供；待測(cè)系統(tǒng)1：邁瑞B(yǎng)C5390血球儀采用配套的CRP試劑、校準(zhǔn)品及質(zhì)控品；待測(cè)系統(tǒng)2：國(guó)賽Aristo特定蛋白儀采用配套的CRP試劑、校準(zhǔn)品及質(zhì)控品；待測(cè)系統(tǒng)3：Orion Diagnostica Quick Read CRP分析儀采用配套的CRP試劑、校準(zhǔn)品及質(zhì)控品。

1.3方法

1.3.1檢測(cè)方法 在各檢測(cè)系統(tǒng)在控情況下，每天每種系統(tǒng)連續(xù)檢測(cè)8份標(biāo)本，其中目標(biāo)系統(tǒng)檢測(cè)的是血清標(biāo)本的CRP水平，待測(cè)系統(tǒng)1、2、3檢測(cè)的是全血標(biāo)本的CRP水平。標(biāo)本按1→8和8→1的正反順序各檢測(cè)2次，共檢測(cè)6 d。由于待測(cè)系統(tǒng)3的最低檢測(cè)限為1.0 mg/L，當(dāng)標(biāo)本CRP水平小于1.0 mg/L時(shí)，舍去該結(jié)果。

1.3.2離群值判定 根據(jù)NCCLS EP9-A2文件，對(duì)4種檢測(cè)系統(tǒng)的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行方法內(nèi)和方法間離群值判定。方法內(nèi)離群值判定：當(dāng)各檢測(cè)系統(tǒng)兩次檢測(cè)的CRP水平的差值絕對(duì)值小于4倍差值絕對(duì)值均值時(shí)，認(rèn)為方法內(nèi)無(wú)離群值；方法內(nèi)如果出現(xiàn)1個(gè)離群值，分析其原因，刪除后可繼續(xù)比較；若出現(xiàn)超過(guò)2個(gè)離群值，則應(yīng)立即停止比較，查找誤差原因，解決后重新檢測(cè)。方法間離群值判定：分別計(jì)算待測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)的CRP水平與目標(biāo)系統(tǒng)檢測(cè)的CRP水平的差值絕對(duì)值，當(dāng)差值絕對(duì)值小于4倍差值絕對(duì)值均值時(shí)，則認(rèn)為方法間無(wú)離群值；方法間如果出現(xiàn)1個(gè)離群值，分析其原因，刪除后可以繼續(xù)比較；若出現(xiàn)超過(guò)2個(gè)離群值，應(yīng)立即停止比較，查找誤差原因，解決后重新檢測(cè)。

1.3.3可比性分析 (1)分析各待測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果與目標(biāo)系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果間的相關(guān)性，以目標(biāo)系統(tǒng)所檢測(cè)的CRP水平均值為橫軸，待測(cè)系統(tǒng)所檢測(cè)的CRP水平均值為縱軸，分別計(jì)算出回歸方程：Y=aX+b，當(dāng)R≥0.975或R2≥0．95時(shí)，則認(rèn)為兩種檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果呈線性相關(guān)[4]。(2)以目標(biāo)系統(tǒng)檢測(cè)的CRP水平均值與待測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)的CRP水平均值的和的1/2為橫軸，以待測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)的CRP水平均值與目標(biāo)系統(tǒng)檢測(cè)的CRP水平均值的差值為縱軸，繪制CRP水平均值偏倚散點(diǎn)圖，評(píng)估待測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果的偏倚。(3)根據(jù)回歸方程，將CRP的醫(yī)學(xué)決定水平(X)代入計(jì)算出各檢測(cè)系統(tǒng)的預(yù)測(cè)值(Y)，并計(jì)算相對(duì)偏倚SE%=∣Y-X∣/X×100%。臨床可接受性判定：各檢測(cè)系統(tǒng)在不同醫(yī)學(xué)決定水平的相對(duì)偏倚SE%<1/2允許總誤差(TEa)，CRP的TEa以原衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心推薦的25%為標(biāo)準(zhǔn)，即SE%<12.5%時(shí)結(jié)果為臨床可接受。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。采用線性回歸分析各待測(cè)系統(tǒng)與目標(biāo)系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)性，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1各檢測(cè)系統(tǒng)離群值判定 各檢測(cè)系統(tǒng)方法內(nèi)均有1個(gè)離群值，在文件允許范圍內(nèi)直接刪除，剔除離群值后，各檢測(cè)系統(tǒng)分別有47個(gè)CRP檢測(cè)結(jié)果。待測(cè)系統(tǒng)3檢測(cè)的CRP結(jié)果中有6個(gè)小于1.0 mg/L，舍去后剩余41個(gè)檢測(cè)結(jié)果。各檢測(cè)系統(tǒng)方法間無(wú)離群值。

2.2各檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)性分析 待測(cè)系統(tǒng)1、2、3所檢測(cè)的CRP水平與目標(biāo)系統(tǒng)所檢測(cè)的CRP水平的線性回歸方程分別為：Y=0.996X-0.508、Y=0.970X-0.515、Y=0.971X-0.945，R2分別為0.999、0.998和0.998，均R2≥0.95，P<0.01，相關(guān)性良好。見(jiàn)圖1、2、3。

圖2 待測(cè)系統(tǒng)2與目標(biāo)系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果的線性回歸圖

圖3 待測(cè)系統(tǒng)3與目標(biāo)系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果的線性回歸圖

2.3待測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果的偏倚評(píng)估 待測(cè)系統(tǒng)1、2、3與目標(biāo)系統(tǒng)所檢測(cè)的CRP水平均值部分存在正偏倚，部分存在負(fù)偏倚，以負(fù)偏倚為主。見(jiàn)圖4、5、6。

圖4 待測(cè)系統(tǒng)1檢測(cè)CRP水平均值的偏倚散點(diǎn)圖

圖5 待測(cè)系統(tǒng)2檢測(cè)CRP水平均值的偏倚散點(diǎn)圖

2.4待測(cè)系統(tǒng)的臨床可接受性判定 待測(cè)系統(tǒng)3在CRP醫(yī)學(xué)決定水平為6 mg/L時(shí)，其SE%超出1/2TEa(12.5%)，結(jié)果不可接受，經(jīng)回歸方程計(jì)算，只有當(dāng)CRP≥10 mg/L時(shí)，待測(cè)系統(tǒng)3檢測(cè)CRP水平的SE%在允許范圍內(nèi)。待測(cè)系統(tǒng)1、2在不同醫(yī)學(xué)決定水平時(shí)的檢測(cè)結(jié)果臨床均可接受。見(jiàn)表1。

圖6 待測(cè)系統(tǒng)3檢測(cè)CRP水平均值的偏倚散點(diǎn)圖

表1待測(cè)系統(tǒng)的臨床可接受性判定

檢測(cè)系統(tǒng)回歸方程CRP醫(yī)學(xué)決定水平(mg/L)SE%臨床可接受性待測(cè)系統(tǒng)1Y=0.996X-0.50868.87可接受183.22可接受601.25可接受待測(cè)系統(tǒng)2Y=0.970X-0.515611.58可接受185.86可接受603.86可接受待測(cè)系統(tǒng)3Y=0.971X-0.945618.65不可接受188.15可接受604.48可接受

3 討 論

目前，在不同醫(yī)療機(jī)構(gòu)甚至同一醫(yī)療機(jī)構(gòu)中，普遍存在一個(gè)檢驗(yàn)項(xiàng)目可能用多種檢測(cè)方法和檢測(cè)儀器進(jìn)行檢測(cè)的現(xiàn)象。隨著醫(yī)療行業(yè)的進(jìn)一步規(guī)范，臨床檢測(cè)結(jié)果必須具有溯源性和可比性[5-6]，不同檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)同一檢測(cè)項(xiàng)目的檢測(cè)結(jié)果具有一致性也是目前醫(yī)院檢測(cè)相關(guān)質(zhì)量管理工作的最終目標(biāo)[7]。而檢測(cè)結(jié)果的一致性判斷，最重要并且切實(shí)可行的途徑就是與已知準(zhǔn)確的檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行方法學(xué)比較[8]。

雖然邁瑞B(yǎng)C5390血球儀、國(guó)賽Aristo特定蛋白儀和Orion Diagnostica Quick Read CRP分析儀均使用配套試劑及校準(zhǔn)品，有對(duì)應(yīng)的溯源體系，但由于其均未參與室間質(zhì)評(píng)，所檢測(cè)的CRP水平的準(zhǔn)確性和可比性不得而知。本研究根據(jù)NCCLS EP9-A2文件，將上述3臺(tái)儀器的檢測(cè)結(jié)果與室間質(zhì)評(píng)結(jié)果均為優(yōu)秀的貝克曼AU5821生化儀的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較，結(jié)果顯示，邁瑞B(yǎng)C5390血球儀和國(guó)賽Aristo特定蛋白儀檢測(cè)的CRP水平與貝克曼AU5821生化儀的檢測(cè)結(jié)果具有很好的相關(guān)性，且這2臺(tái)儀器的檢測(cè)結(jié)果均滿足臨床可接受性要求，具有可比性。Orion Diagnostica Quick Read CRP分析儀檢測(cè)的CRP水平雖然與貝克曼AU5821生化儀的檢測(cè)結(jié)果具有很好的相關(guān)性，但當(dāng)CRP醫(yī)學(xué)決定水平為6 mg/L時(shí)，其SE%超出1/2TEa(12.5%)，結(jié)果不可接受，進(jìn)一步經(jīng)回歸方程計(jì)算，只有當(dāng)CRP≥10 mg/L時(shí)，Orion Diagnostica Quick Read CRP分析儀檢測(cè)的CRP水平才在SE%允許范圍內(nèi)。考慮出現(xiàn)上述結(jié)果的原因可能與人為誤差有關(guān)，Orion Diagnostica Quick Read CRP分析儀是半自動(dòng)儀器，需要手工加樣，加樣量的準(zhǔn)確性直接影響結(jié)果，且加樣誤差對(duì)低水平標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果影響更為顯著[9]。本院采購(gòu)Orion Diagnostica Quick Read CRP分析儀主要是考慮兒童采血較為困難，此儀器只需20 μL血液標(biāo)本便可進(jìn)行檢測(cè)，兒童可以通過(guò)采集末梢血來(lái)進(jìn)行檢測(cè)，從而減少患兒痛苦，減輕臨床工作量。邁瑞B(yǎng)C5390血球儀具有微量自動(dòng)檢測(cè)模式，用血量?jī)H35 μL就可完成血細(xì)胞分析和CRP檢測(cè)，無(wú)須手工加樣，且與貝克曼AU5821生化儀的檢測(cè)結(jié)果具有可比性，與Orion Diagnostica Quick Read CRP分析儀相比，更適用于門、急診兒童末梢血標(biāo)本檢測(cè)。

本研究對(duì)邁瑞B(yǎng)C5390血球儀、國(guó)賽Aristo特定蛋白儀和Orion Diagnostica Quick Read CRP分析儀檢測(cè)的CRP水平均值進(jìn)行偏倚評(píng)估發(fā)現(xiàn)，上述3種待測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)的CRP水平大都低于貝克曼AU5821生化儀的檢測(cè)水平，主要表現(xiàn)為負(fù)偏倚。這可能是由于該3種檢測(cè)系統(tǒng)均檢測(cè)的是全血標(biāo)本，而貝克曼AU5821生化儀檢測(cè)的是血清標(biāo)本，在進(jìn)行全血CRP檢測(cè)時(shí)，不同的血細(xì)胞比容可直接導(dǎo)致血漿比例不同，從而影響全血檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性[10]。

綜上所述，邁瑞B(yǎng)C5390血球儀和國(guó)賽Aristo特定蛋白儀檢測(cè)的CRP水平能滿足臨床要求，結(jié)果具有可比性。Orion Diagnostica Quick Read CRP分析儀檢測(cè)結(jié)果在低值部分時(shí)誤差較大，本研究將在后期行驗(yàn)證試驗(yàn)，如結(jié)果仍不滿足臨床可接受性，論證后考慮淘汰該檢測(cè)系統(tǒng)，以進(jìn)一步提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。