洛伐他汀煙酸緩釋片中煙酸釋放度檢測方法研究

蔣艷霞，秦晶晶，焦志斌

(山西康寶生物制品股份有限公司， 長治 046011)

隨著社會的發(fā)展及人們生活水平的提高，我們的飲食結(jié)構(gòu)發(fā)生了巨大的變化。伴隨著肉蛋奶等高營養(yǎng)物質(zhì)攝入量顯著增加，高血脂病癥、冠心病的發(fā)病率顯著提高。臨床研究發(fā)現(xiàn)，煙酸可以有效改善血脂代謝，同時他汀類藥物在防治冠心病方面具有顯著效果［1］。相比他汀類藥物、貝特類藥物單獨(dú)用藥，洛伐他汀與煙酸兩者結(jié)合對血脂進(jìn)行調(diào)節(jié)，在效果上具有很大優(yōu)勢［2］。

煙酸也稱作維生素B3，或維生素PP，在體內(nèi)能迅速轉(zhuǎn)化為煙酰胺做為輔酶Ⅰ與輔酶Ⅱ的組成部分，進(jìn)而參與到生物體內(nèi)包括脂代謝在內(nèi)的各種代謝過程中。煙酸在改善血脂異常，尤其在降低甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)和升高高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)具有顯著的效果［3］。為進(jìn)一步明確洛伐他汀煙酸緩釋片(山西康寶生物制品股份有限公司生產(chǎn))中煙酸的體外釋放特征，本文對緩釋片中煙酸釋放度的檢測方法進(jìn)行了研究。

1 試劑與儀器

1.1 供試品

洛伐他汀煙酸緩釋片，規(guī)格:洛伐他汀20mg，煙酸500mg;批號:111101，111102，111103;生產(chǎn)廠家:山西康寶生物制品股份有限公司。

1.2 對照品

煙酸對照品，規(guī)格:100 mg，批號:100434－201102，購買自中國藥品生物制品檢定所。

1.3 儀器

AE240電子分析天平，梅特勒－托利多儀器(上海)有限公司;TU1901紫外可見分光光度計，北京通用儀器公司;ZRS－8G智能溶出試驗(yàn)儀，天津天大天發(fā)公司。

2 檢驗(yàn)方法

2.1 煙酸釋放條件的篩選及確定

參考FDA(美國食品藥品監(jiān)督管理局)批準(zhǔn)的ADVICOR?(niacin extended-release and lovastatin tablets)中煙酸的釋放條件及檢測方法，本實(shí)驗(yàn)采用USP(United States Pharmacopeia，美國藥典)中溶出度測定法方法的Ⅰ法(籃法)，對煙酸釋放度進(jìn)行測定［4］。選用900 ml純化水(pH 為5.50)為釋放度介質(zhì)，溫度(37±0.5)℃，轉(zhuǎn)速 100 r/min，煙酸溶液檢測波長為262 nm。

2.2 溶出度測定方法

參照USP中煙酸原料含量檢測方法［4］，本實(shí)驗(yàn)對煙酸溶出度的測定方法為:待溶出儀器中釋放介質(zhì)狀態(tài)穩(wěn)定，加入樣品，在規(guī)定時間點(diǎn)取出溶劑適量(并添加同體積同溫度溶劑)，濾過，精密量取續(xù)濾液5 ml，置于25 ml容量品中(30 s內(nèi)完成操作)，加水，定容，混勻，參照紫外－可見分光光度法(《中國藥典》2010版，附錄Ⅳ A)在262 nm處測定溶液吸光度［5］。

2.2.1 煙酸釋放度測定干擾性實(shí)驗(yàn) 按處方精密稱取相應(yīng)輔料和洛伐他汀原料，照上述方法配制成溶液，參考2010《中國藥典》中紫外－可見分光光度法，在190－350 nm范圍進(jìn)行紫外吸光度掃描，見圖1。

圖1 洛伐他汀和輔料干擾實(shí)驗(yàn)Fig 1 UV-Vis spectrophotometry of the solution of lovastatin and excipients

結(jié)果顯示，輔料在262 nm處基本沒有吸光度，表明洛伐他汀和輔料對煙酸的測定無干擾。

2.2.2 回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取干燥至恒重的煙酸對照品適量，同時按處方比例混合相應(yīng)輔料，配置成體積為900 ml樣品溶液，照上述方法測定各樣品紫外吸光度，計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 不同含量的煙酸回收率測定結(jié)果Tab 1 Recovery rates of different contents of niacin

實(shí)驗(yàn)中對照溶液中，煙酸對照品稱樣量為20.18 mg，不添加輔料，對照溶液的吸光度為0.688 7。

試驗(yàn)結(jié)果顯示，煙酸濃度在9.91－24.42μg/ml范圍內(nèi)回收率在99.70%－100.2%，表明輔料對各濃度下煙酸的溶出度沒有影響。

2.2.3 溶液穩(wěn)定性 精密稱取煙酸對照品20 mg，照2.2.2中方法制得樣品溶液，將測定溶液在水浴(37±0.5)℃中放置，0－24 h內(nèi)每間隔3 h取樣，在262 nm處測定吸光度，結(jié)果見表2。

表2 煙酸溶液時間梯度測定結(jié)果Tab 2 Time gradient measurement results of niacin solutions

結(jié)果顯示，煙酸溶液在24 h內(nèi)紫外吸光度變化無明顯差異，表明該溶液穩(wěn)定性良好。

2.2.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 分別精密稱取6份煙酸對照品20 mg，照2.2.2中方法制得樣品溶液，在262 nm處測定吸光度，計算均數(shù)的RSD，結(jié)果見表3。

結(jié)果顯示，用本法檢測煙酸含量重復(fù)性良好。

表3 6份煙酸對照品重復(fù)性測定結(jié)果Tab 3 Repeatability test results of 6 samples of niacin solutions

2.2.5 線性實(shí)驗(yàn) 精密稱取煙酸對照品約20 mg，置100 ml量瓶中，加水溶解并稀釋到刻度，搖勻作為母液。分別精密量取母液 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 ml置50 ml容量瓶中，稀釋至刻度后搖勻，于262 nm處測定吸光度(A)。結(jié)果見表4。

以樣品濃度c為橫坐標(biāo)，A為縱坐標(biāo)，繪制曲線。將A對相應(yīng)的濃度c做回歸處理，回歸方程A=0.0342c+0.0016，相關(guān)系數(shù)r=0.9999，結(jié)果表明，煙酸在3.88－23.28 μg/ml濃度范圍內(nèi)，吸光度與溶液濃度呈良好的線性關(guān)系。

2.3 轉(zhuǎn)速及取樣時間的選擇

選取一批洛伐他汀煙酸緩釋片作為樣品，分別在轉(zhuǎn)速為50 r/min，75 r/min，100 r/min條件下進(jìn)行釋放度試驗(yàn)。檢測樣品溶出度的時間為1 h，3 h，6 h，9 h，12 h，16 h，20 h，24 h 取樣(每次取樣后補(bǔ)充同溫度溶劑5 ml)，依據(jù)檢測結(jié)果計算煙酸的累積釋放量，并繪制釋放度曲線，以進(jìn)行轉(zhuǎn)速和取樣時間的選擇，結(jié)果見圖2，表5。

表4 煙酸濃度梯度測定結(jié)果Tab 4 Concentration gradient results of niacin solutions

圖2 三種轉(zhuǎn)速下煙酸的積累釋放量Fig 2 Accumulated release quantity of niacin at the revolutions of 50，75，100 r/min

結(jié)果表明轉(zhuǎn)速為100 r/min時煙酸24 h后釋放較為完全，在3 h，9 h與20 h積累釋放量分別為22.14%，51.78%與 89.65%，符合《中國藥典》2010年版收載緩釋、控釋制劑指導(dǎo)原則，故選定取樣時間為3 h，9 h 與20 h，且轉(zhuǎn)速為100 r/min。

2.4 煙酸釋放均一性實(shí)驗(yàn)

照上述煙酸釋放度測定方法，分別對上述三批片劑進(jìn)行釋放度測定，每批樣品測定6片，取樣時間分別為3，6，9，12，16，20，24 h。計算每批樣品在相同時間點(diǎn)各平行樣的溶出度偏差，結(jié)果見表6。

表5 各轉(zhuǎn)速下煙酸的釋放量 (%)Tab 5 Accumulated release quantity of niacin at various revolutions (%)

表6 三批樣品中煙酸釋放度均一性試驗(yàn)結(jié)果 (%)Tab 6 Release homogeneity measurement results of niacin in three batches of products (%)

2.5 煙酸釋放度測定方法

我們選用900 ml水作為釋放介質(zhì)，溫度(37±0.5)℃，轉(zhuǎn)速100 r/min作為煙酸的釋放條件，參照上述溶出度測定方法，測定了三批樣品在3 h，9 h和20 h的紫外吸光度，并通過吸光度計算了相應(yīng)的煙酸溶出度。結(jié)果見表7。

結(jié)果顯示，三批樣品在各時間點(diǎn)的溶出度沒有顯著差異，表明樣品的釋放均一性較好，釋放規(guī)律基本一致。

表7 三批樣品中煙酸溶出度測定結(jié)果 (%)Tab 7 Niacin dissolution measurement results in three batches of samples (%)

3 結(jié)論

洛伐他汀煙酸緩釋片的輔料干擾試驗(yàn)表明釋放介質(zhì)中的煙酸不會受到處方中輔料的影響。試驗(yàn)表面，在我們選定的釋放介質(zhì)中，煙酸的回收率大于99.70%，24 h內(nèi)穩(wěn)定性沒有發(fā)生顯著變化，在3.88－23.28μg/ml濃度范圍內(nèi)線性非常好。不同轉(zhuǎn)速對煙酸體外釋放速率的影響比較大。對各時間煙酸的溶出度進(jìn)行測定后表明，我們選用100 r/min的轉(zhuǎn)速，樣品中煙酸的釋放度在3 h，9 h與20 h分別為10%－30%、40%－60%和75%以上，且釋放的均一性很好，其體外釋放特征完全符合《中國藥典》2010年版收載緩釋、控釋制劑指導(dǎo)原則的要求，而且符合Higuchi緩釋釋放方程的特征［6］。結(jié)果表明該方法適合洛伐他汀煙酸緩釋片煙酸釋放度的測定。

［1］黃艷紅，許丹焰.緩釋煙酸對血脂代謝的影響研究［J］.醫(yī)學(xué)信息，2011，24(12):174－175.

［2］楊春光.復(fù)方煙酸和洛伐他汀緩釋片的研究［D］.天津:天津大學(xué)，2005.

［3］趙進(jìn)，韋建瑞，吳同果.煙酸緩釋片治療混合性高脂血癥的療效［J］.廣東醫(yī)學(xué)，2008，29(8):1402.

［4］美國(FDA)食品和藥物管理局.美國藥典:24版［S］.

［5］國家藥典委員會.中國藥典二部［M］.2010版.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

［6］Higuchi T.Mechanism of sustained-action medication.Theoretical analysis of rate of release of solid drugs dispersed in solid matrices［J］.JPharm Sci，52(12):1145－1149.