復(fù)方醋酸氯己定凝膠的制備和質(zhì)量控制

張玉葉 劉光斌 劉燕珺 劉效栓

（1 嘉峪關(guān)市酒鋼醫(yī)院，甘肅 嘉峪關(guān)735100；2 嘉峪關(guān)市食品藥品檢驗(yàn)所；3 甘肅省中醫(yī)院，甘肅 蘭州730000）

復(fù)方氯己定凝膠是我院自行研制的治療燒傷的外用制劑，主要由醋酸氯己定、鹽酸達(dá)克羅寧、薄荷腦、曲安奈德等用高分子材料甲基纖維素4500制成的凝膠劑。該凝膠劑具有抗感染、止痛、清涼、預(yù)防瘢痕形成的作用。臨床上用于燒傷、燙傷的治療效果滿意。 現(xiàn)將其制備工藝和質(zhì)量控制方法報(bào)道如下。

1 材料

1.1 儀器

LC-2010AHT 型高效液相色譜儀（日本島津）、島津LC solution 工作站；AUY220 電子分析天平（日本島津）；756 紫外可見分光光度計(jì)（上海奧譜勒儀器有限公司）；PHS-3C 型酸度計(jì)（上海雷磁儀器廠）；GQ-105 型管式高速離心機(jī)（上海市離心機(jī)廠研究所）。

1.2 藥品與試劑

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品 醋酸氯己定（原中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)100183-201003，含量為96.2%）；鹽酸達(dá)克羅寧對照品（原中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)100423-201102，含量為99.8%）。

1.2.2 藥品 醋酸氯己定（錦州制藥一廠，批號(hào)111005），鹽酸達(dá)克羅寧（上海輕工實(shí)驗(yàn)廠，批號(hào)20110306），曲安奈德（上海第十二制藥廠，批號(hào)090618），薄荷腦（黃山天目薄荷藥業(yè)有限公司，批號(hào)111104）。

1.2.3 化學(xué)試劑 甲醇、乙腈為色譜純，甘油、甲基纖維素4500、乙醇、聚山梨酯80 均為藥用規(guī)格，其他試劑為分析純。

2 處方與制備

2.1 處方

鹽酸達(dá)克羅寧10 g，醋酸氯己定5 g，薄荷腦6 g，曲安奈德0.5 g，甲基纖維素4500 20 g，甘油100 g，聚山梨酯80 30 g，乙醇適量，水適量。

2.2 制備

取鹽酸達(dá)克羅寧和聚山梨酯80，加入適量水?dāng)嚢璨⑽?，使鹽酸達(dá)克羅寧溶解，將甲基纖維素4500 撒于上述溶液表面，靜置24 h，使完全溶脹為均勻凝膠劑。 將醋酸氯己定溶于適量水和甘油的混合溶液中加入上述凝膠中，薄荷腦溶于乙醇中，少量緩慢加入上述凝膠中，邊加邊攪拌使混合均勻，最后加入曲安奈德，攪拌使混合均勻，加水至足量即得。

3 質(zhì)量控制

3.1 性狀

本品為微黃色半透明、質(zhì)地均勻細(xì)膩的半固體凝膠制劑，稠度適宜，有薄荷香氣，涂展性好。

3.2 鑒別

3.2.1 醋酸氯己定 取本品5 g，加水5 mL 攪拌均勻，加硫酸銅試液2 滴，加熱，即產(chǎn)生淡紫色糊狀物。

3.2.2 鹽酸達(dá)克羅寧 取本品適量（約含鹽酸達(dá)克羅寧50 mg），加95%乙醇，超聲溶解，加2，4-二硝基苯肼試液5 mL，振搖，顯橙色。

3.2.3 薄荷腦 取本品5 g，加冰醋酸1 mL 使溶解，加硫酸6 滴和硝酸1 滴的冷混合液，僅顯淡黃色。

3.3 檢查

3.3.1 酸堿度 取本品5 g 置燒杯中， 加水25 mL，超聲溶解，測得pH 值為5.0 ～7.0 之間[1]。

3.3.2 衛(wèi)生學(xué)檢查 按文獻(xiàn)[2]方法檢驗(yàn),霉菌、綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌、雜菌等均符合藥品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。

3.3.3 其他 應(yīng)符合《中國藥典》（2010 年版）二部“凝膠劑”附錄項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定[1]。

3.4 含量測定

3.4.1 色譜條件 色譜柱Inertsil ODS-SP（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相0.5%三乙胺（用冰醋酸調(diào)pH 至3.8）-乙腈（68∶32）；流速1.0 mL/min；檢測波長270 nm；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量10 μL。

3.4.2 溶液的制備

3.4.2.1 對照品溶液的制備 取醋酸氯己定、鹽酸達(dá)克羅寧對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL 含醋酸氯己定、鹽酸達(dá)克羅寧25.5，51.0 μg的溶液，即得。

3.4.2.2 供試品溶液的制備 取供試品2.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加適量甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至容量瓶中，加甲醇至100 mL。 搖勻，濾過。 取續(xù)濾液2 mL，精密加流動(dòng)相至10 mL，高速離心（13 000 r/min）5 min，即得。

3.4.2.3 陰性對照溶液的制備 取空白2 g （與供試品同一批次：20120330），精密稱定，同3.4.2.2方法制得。

3.4.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 分別取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液注入液相色譜儀，在上述色譜條件下，醋酸氯己定、鹽酸達(dá)克羅寧的保留時(shí)間分別為4.3，10.2 min， 吸收峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度均大于1.5，陰性對照對供試品測定無干擾。 理論板數(shù)按醋酸氯己定和鹽酸達(dá)克羅寧峰計(jì)算均應(yīng)不低于3 000。 對照品、供試品、陰性對照的色譜圖見圖1。

圖1 復(fù)方氯己定凝膠HPLC 圖

3.4.4 線性關(guān)系考察 精密稱取醋酸氯己定對照品10.19 mg 和鹽酸達(dá)克羅寧對照品20.45 mg，置50 mL 量瓶中，加甲醇適量溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。 精密量取對照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL，分別置25 mL 量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。 按上述色譜條件測定峰面積，以進(jìn)樣濃度C（mg/mL）對峰面積A作線性回歸，得到2 種成分的線性關(guān)系如表1。結(jié)果表明， 醋酸氯己定在0.081 52 ～0.407 60 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系；鹽酸達(dá)克羅寧在0.163 6 ～0.818 0 μg 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

3.4.5 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的供試品（批號(hào)20120330）9 份，精密加入低、中、高質(zhì)量的醋酸氯己定、鹽酸達(dá)克羅寧對照品，按3.4.2.2 項(xiàng)下操作，制備供試品溶液并按其測定方法測定，結(jié)果見表2。

表1 復(fù)方醋酸氯已定凝膠中2 種成分的線性關(guān)系（n = 5）

3.4.6 精密度試驗(yàn) 取每mL 含醋酸氯己定、鹽酸達(dá)克羅寧25.5，51.0 μg 的對照品溶液，按上述方法連續(xù)進(jìn)樣5 次，結(jié)果顯示：醋酸氯己定峰面積平均值為444 388，RSD 為0.82 %；鹽酸達(dá)克羅寧峰面積平均值為1 126 053，RSD 為0.98 %。 結(jié)果表明該方法精密度良好。

3.4.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批次（20120330）的供試品5 份，每份2.0 g，精密稱定，按3.4.2.2 方法制備，按上述色譜條件測定，以外標(biāo)法計(jì)算含量，醋酸氯己定、鹽酸達(dá)克羅寧平均含量分別為4.912 mg/g（RSD=0.88%），9.865 mg/g（RSD = 0.76%）。 結(jié)果表明重復(fù)性良好。

3.4.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批次（20120330）供試品2.0 g，精密稱定，按3.4.2.2 方法制備，按上述色 譜 條 件 測 定, 分 別 在0，2，4，6，8，10 h 進(jìn) 樣 分析，測得醋酸氯己定峰面積的RSD 為1.22%；鹽酸達(dá)克羅寧峰面積的RSD 為1.10%，結(jié)果表明，供試品溶液在10 h 內(nèi)穩(wěn)定。

表2 回收率測定結(jié)果（n = 9）

3.4.9 樣品測定 取3 個(gè)批次（20120229、20120302、20120330）的供試品（每批號(hào)3 份），精密稱定，按3.4.2.2 方法制備，按上述色譜條件測定，用外標(biāo)法分別計(jì)算供試品中鹽酸達(dá)克羅寧和醋酸氯己定的含量，結(jié)果見表3。

表3 復(fù)方氯己定凝膠含量測定結(jié)果（n = 3）

3.5 制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)

3.5.1 離心試驗(yàn) 取3 批供試品各10 g，裝入帶刻度的離心管中，以3 500 r/min 的轉(zhuǎn)速離心30 min，凝膠無分層現(xiàn)象。

3.5.2 方法 另取3 批供試品均勻裝入包裝盒內(nèi)，分別置（48±1）℃恒溫箱恒溫6 h 和置（－15±2）℃冰箱內(nèi)24 h 后取出，放至室溫后觀察，皆未發(fā)生分離、沉淀、變色現(xiàn)象。

3.5.3 常溫貯存試驗(yàn) 取3 批供試品裝入密閉的包裝管內(nèi)留樣逐月觀察12 個(gè)月，因乙醇揮發(fā)稠度略有改變，但無霉變等其他變化。含量測定結(jié)果符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，證明本品在1 年內(nèi)質(zhì)量穩(wěn)定。

4 討論

醋酸氯己定作為消毒防腐劑，對革蘭陽性、陰性細(xì)菌有很強(qiáng)的抑菌殺菌能力，常用于器械、皮膚和黏膜的消毒，在治療燒、燙傷時(shí)常用其水溶液清洗創(chuàng)面，但由于水溶液附著力低，抗菌效果不能保證。 鹽酸達(dá)克羅寧為局部麻醉藥，對皮膚有止痛、止癢及殺菌作用，對皮膚黏膜穿透力強(qiáng)，作用迅速，局部作用較為持久。 薄荷腦芳香、清涼，有良好的止癢消炎和促滲透作用，并可明顯增加外用皮質(zhì)激素類藥物的局部生物利用度。 曲安奈德是人工合成的含氟的長效腎上腺糖皮質(zhì)激素，具有減輕急性炎癥癥狀和抑制炎癥后組織損傷的修復(fù)，預(yù)防瘢痕形成的作用。在藥物組分中由于各成分相輔相成，起到了協(xié)同作用，用高分子材料甲基纖維素4500 做凝膠基質(zhì)，將這幾種藥物制備成親水性凝膠劑，不僅使藥物易于分散，而且增大了黏度，延長了藥物與患部接觸時(shí)間，并對燒傷創(chuàng)面有保濕、保護(hù)作用，能取得較好的療效。 為了提高產(chǎn)品質(zhì)量，確保制劑的有效性，在完善制備工藝的同時(shí)，建立了藥品的質(zhì)量控制方法。

鹽酸達(dá)克羅寧與醋酸氯己定在水中都不易溶解，為了提高藥物在制劑中的分散度，在制備凝膠劑時(shí)加入聚山梨酯80 并加熱使鹽酸達(dá)克羅寧溶解，用水與甘油混合溶劑使醋酸氯己定溶解。薄荷腦不溶于水，用適量乙醇溶解后緩慢加入凝膠劑中。

復(fù)方氯己定凝膠是復(fù)方制劑，輔料較多，試驗(yàn)中分別采用了甲醇-磷酸鹽緩沖液[3-4]、甲醇-水[5]、乙腈-水-冰醋酸-三乙胺[6]等不同種類、比例的流動(dòng)相。 結(jié)果表明：采用0.5%三乙胺（用冰醋酸調(diào)pH 至3.8）-乙腈（68 ∶32）為流動(dòng)相，色譜峰分離度高，兩種成分的保留時(shí)間比較合適。 文獻(xiàn)[3-4]顯示，同時(shí)測定醋酸氯己定與鹽酸達(dá)克羅寧含量的檢測波長分別為259 nm 和270 nm。 經(jīng)過試驗(yàn)結(jié)果比較，在270 nm 和259 nm 處醋酸氯己定吸收峰無差別，而鹽酸達(dá)克羅寧峰在270 nm 處吸收更強(qiáng)、峰形更好。

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