二陳湯對(duì)嗎啡依賴小鼠位置偏愛效應(yīng)的影響*

康潔 張凌媛 丁珊珊 沈建英

中醫(yī)痰病學(xué)術(shù)，是具有重要的探索價(jià)值和廣泛的應(yīng)用前景的學(xué)術(shù)寶庫，是中醫(yī)藥治療多種疑難雜病的優(yōu)勢(shì)、特色所在。目前關(guān)于痰證的研究多扎根于臨床，缺乏必要的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，關(guān)于痰證的本質(zhì)研究還比較少。因此，研制出合理的痰證動(dòng)物模型可以為揭示痰證的本質(zhì)提供一個(gè)基礎(chǔ)平臺(tái)。本課題組從中醫(yī)體質(zhì)角度探討毒品復(fù)吸的發(fā)病機(jī)制，先期調(diào)查發(fā)現(xiàn)（國(guó)家自然基金項(xiàng)目，課題編號(hào)30973718），當(dāng)機(jī)體存在痰病理產(chǎn)物和陽虛、血熱等病理變化時(shí)，易引起“毒癮”復(fù)發(fā)，而其中又以痰最為突出，筆者認(rèn)為，“毒癮”的纏綿難除特性可能與“痰”有關(guān)，而此痰有其特異性，是“ 頑痰”，“頑痰”是吸毒人群“毒癮”纏綿難除的特性[1]。由此，筆者思考：毒品成癮動(dòng)物模型是否也具有痰證纏綿難除病理特點(diǎn)呢？因此，筆者采用國(guó)際公認(rèn)的條件性位置偏愛（CPP）小鼠模型[2-6]，以經(jīng)典燥濕化痰方反證治療，驗(yàn)證我們這一假想，從而進(jìn)一步探索研制痰證動(dòng)物模型。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 昆明種小鼠，雄性，體重18～22 g，由福建中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。所有小鼠飼養(yǎng)條件：清潔級(jí)動(dòng)物房、單籠、照明12 h/d，室溫（22±2）℃，相對(duì)濕度為30%～40%，喂常規(guī)飼料，自由進(jìn)食飲水。

1.1.2 藥品 鹽酸嗎啡粉，購(gòu)自青海制藥廠有限公司，規(guī)格：1 g，批號(hào)：20111101，用生理鹽水配成所需要的濃度。

1.1.3 藥物準(zhǔn)備 二陳湯按重量比加8倍量水浸泡半小時(shí)，文火煎煮2次，第1次30 min，第2次30 min，合并2次水煎液，3000 r/m離心15 min，倒出上清液，70 ℃恒溫水浴，濃縮至每毫升藥液含生藥0.27 g，高壓滅菌后4 ℃冰箱儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.4 設(shè)備 條件性位置偏愛箱根據(jù)文獻(xiàn)制作：箱子由兩個(gè)正方體組成，中間有一可活動(dòng)的隔板，將隔板抽起后，小鼠可在兩個(gè)箱子之間自由活動(dòng)。箱子的一側(cè)用油漆涂成黑色，用柔軟毛毯將底板底面制成粗糙面，另一側(cè)用油漆涂成白色，用玻璃底板制成光滑面，使整個(gè)偏愛箱具有明顯不同的視覺和觸覺[7]。

1.2 方法

1.2.1 建立嗎啡依賴CPP小鼠模型及其消退和誘導(dǎo)復(fù)發(fā) 在安靜環(huán)境的條件下，采用條件位置偏愛箱建立嗎啡依賴 CPP及其消退和誘導(dǎo)復(fù)發(fā)。在實(shí)驗(yàn)開始之前，將小鼠放入條件位置偏愛箱中適應(yīng)環(huán)境，小鼠可在箱內(nèi)自由活動(dòng)，上下午各1 h，共7 d[8]。

1.2.2 預(yù)測(cè)試階段 在條件位置偏愛箱內(nèi)，測(cè)定每只小鼠在白箱的停留時(shí)間，1次/d，連續(xù)3 d，最后取平均值，以小鼠偏愛的白箱作為伴藥箱進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)白箱停留時(shí)間：測(cè)試小鼠60 min內(nèi)在白箱中的停留時(shí)間。

1.2.3 訓(xùn)練階段 建立嗎啡精神依賴模型，每天9AM時(shí)給予嗎啡（9 mg/kg，sc），連續(xù)7 d，注射嗎啡后將小鼠立即放入白箱（伴藥箱），在箱內(nèi)停留60 min，每天5PM皮下注射等容積生理鹽水后放入黑箱（非伴藥箱），亦在箱內(nèi)停留60 min。7 d之后停用嗎啡，測(cè)定停用嗎啡后的第1、2、3天小鼠在白箱停留時(shí)間[9]。

1.2.4 停藥期 從停用嗎啡算起連續(xù)15 d，每天將小鼠放入條件位置偏愛箱中自由活動(dòng)，每天60 min。

1.2.5 動(dòng)物分組及給藥 檢測(cè)二陳湯位置偏愛效應(yīng)時(shí)，將正常小鼠隨機(jī)分成正常對(duì)照組、二陳湯低劑量、中劑量、高劑量共四組，每組10只，正常對(duì)照組皮下注射生理鹽水，二陳湯組按4 mL/kg的劑量分別灌胃給藥，各組用藥5 d，每天2次（9AM，5PM）第6天測(cè)定各組小鼠在白箱中的停留時(shí)間；檢測(cè)二陳湯對(duì)CPP小鼠影響時(shí)，將小鼠隨機(jī)分為嗎啡組、正常對(duì)照組、二陳湯低劑量、中劑量、高劑量共5組，每組10只，嗎啡組皮下注射嗎啡，正常對(duì)照組給予皮下注射氯化鈉注射液，二陳湯組則按4 mL/kg的劑量分別灌胃給藥，各組用藥5 d，每天2次（9AM，5PM），灌胃后30 min注射嗎啡，第6天開始停用嗎啡，將小鼠放入條件位置偏愛箱中自由活動(dòng)，第20天給予嗎啡組及二陳湯組皮下注射氫化可的松5 mg/kg，15 min后將小鼠放入條件位置偏愛箱，測(cè)定其在白箱中停留的時(shí)間。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 15.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 二陳湯位置偏愛效應(yīng)檢測(cè)結(jié)果 各組小鼠分別測(cè)得在白箱中停留時(shí)間，二陳湯各劑量組與對(duì)照組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；與其各自給藥前比較差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），說明二陳湯無獎(jiǎng)賞效應(yīng)或厭惡效應(yīng)，見表1。

表1 二陳湯的自身?xiàng)l件性位置偏愛效應(yīng)（±s） s

表1 二陳湯的自身?xiàng)l件性位置偏愛效應(yīng)（±s） s

組別 小鼠在白箱停留時(shí)間給藥前 給藥后正常對(duì)照組（n=10） 504±27 511±31二陳湯低劑量組（n=10） 515±19 524±46二陳湯中劑量組（n=10） 498±42 526±28二陳湯高劑量組（n=10） 533±14 509±35

2.2 二陳湯對(duì)嗎啡引起的位置偏愛效應(yīng)的影響 正常對(duì)照組小鼠在白箱停留時(shí)間為（522±38）s，嗎啡組為（683±47）s，嗎啡組小鼠在白箱停留時(shí)間明顯長(zhǎng)于正常對(duì)照組，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），說明嗎啡使小鼠產(chǎn)生了明顯的位置偏愛效應(yīng)；二陳湯低劑量組+嗎啡組的小鼠在白箱停留時(shí)間為（642±16）s，二陳湯中劑量組+嗎啡組的小鼠在白箱停留時(shí)間為（577±41）s，二陳湯高劑量組+嗎啡組的小鼠在白箱停留時(shí)間為（554±30）s，二陳湯低劑量組在白箱中停留時(shí)間明顯長(zhǎng)于正常對(duì)照組，而二陳湯中、高劑量組在白箱中停留時(shí)間明顯短于嗎啡組，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表明二陳湯中、高劑量組能夠消除嗎啡所致小鼠的條件性位置偏愛。

2.3 二陳湯對(duì)嗎啡點(diǎn)燃誘導(dǎo)CPP重建的影響 正常對(duì)照組小鼠在白箱停留時(shí)間為（514±24）s，嗎啡組為（675±15）s，嗎啡組小鼠在白箱停留時(shí)間明顯長(zhǎng)于正常對(duì)照組，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示CPP小鼠重建模型建立；二陳湯低劑量組+嗎啡組的小鼠在白箱停留時(shí)間為（649±38）s，二陳湯中劑量組+嗎啡組的小鼠在白箱停留時(shí)間為（584±32）s，二陳湯高劑量組+嗎啡組的小鼠在白箱停留時(shí)間為（545±49）s，二陳湯低劑量組在白箱中停留時(shí)間明顯長(zhǎng)于正常對(duì)照組，而二陳湯中、高劑量組在白箱中停留時(shí)間明顯短于嗎啡組，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表示二陳湯中、高劑量組可以抑制嗎啡點(diǎn)燃誘導(dǎo)的CPP重建。

3 討論

痰證是因體內(nèi)水液代謝失常而產(chǎn)生一些列證候的一類病證。“百病皆有痰作祟”說明痰的致病廣泛。痰飲停留臟腑，影響臟腑功能，流注肢體，變生怪病。如停積于肺、痰鳴如吼、氣息喘促。痰常與濕邪共同致病，因此具有纏綿難愈的病理特點(diǎn)。本課題先期調(diào)查發(fā)現(xiàn)，吸毒人員有纏綿難愈的特點(diǎn)，在發(fā)作期表現(xiàn)多見痰證，如呵欠淚出，痰涌嘔逆等，證明“毒癮”的纏綿難除的痰特性始終存在[10]。

條件位置偏愛實(shí)驗(yàn)（CPP）是目前評(píng)價(jià)藥物精神依賴性的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，也是廣泛應(yīng)用于尋找抗覓藥行為的有效工具。本研究意在探討CPP小鼠模型是否也具有痰證特點(diǎn)，在小鼠連續(xù)使用嗎啡后，能迅速形成對(duì)用藥相關(guān)環(huán)境的CPP，當(dāng)小鼠暴露于以往用藥有關(guān)的環(huán)境或者接觸到其他相關(guān)線索時(shí)，常引發(fā)繼發(fā)性的覓藥行為，即人類中的復(fù)吸現(xiàn)象。二陳湯源于宋代《太平惠民和劑局方》，由法半夏、陳皮、茯苓、甘草組成，是一種能燥濕化痰、理氣和中的中醫(yī)經(jīng)典藥方，臨床上經(jīng)常用于治療濕痰證，如咳嗽痰多、色白易咳、惡心嘔吐、胸膈痞悶、肢體困重或頭眩心悸等。因此，本實(shí)驗(yàn)采用經(jīng)典方二陳湯進(jìn)行反證治療，結(jié)果表明二陳湯中、高劑量組在一定程度上能能夠消除嗎啡所致小鼠的條件性位置偏愛，可以抑制嗎啡點(diǎn)燃誘導(dǎo)的CPP重建。因此，從某種角度看，CPP小鼠動(dòng)物模型可以作為中醫(yī)痰證模型，為進(jìn)一步探索研制痰證動(dòng)物模型提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

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