結(jié)直腸癌早期診斷的研究進(jìn)展＊

劉嫩容，汪 躍，廖發(fā)電，黃少華，陳 榮

(醫(yī)學(xué)光電科學(xué)與技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建師范大學(xué)，福建 福州 350007)

0 引言

癌癥仍是當(dāng)今世界人類健康面臨的最大挑戰(zhàn)，我國(guó)近20年來癌癥呈現(xiàn)年輕化及發(fā)病率和死亡率“三線”走高的趨勢(shì)。全國(guó)腫瘤登記中心發(fā)布《2012中國(guó)腫瘤登記年報(bào)》顯示:我國(guó)每分鐘就有6人確診為癌癥，其中結(jié)直腸癌(colorectal carcinoma，CRC)發(fā)病率居第3位，占癌癥死因第4位。結(jié)直腸癌是一種可以預(yù)防、早診早治的惡性腫瘤，“三早”(早期發(fā)現(xiàn)，早期診斷，早期治療)是提高結(jié)直腸癌治療效果的最有效方法。臨床資料顯示:早期癌癥病人術(shù)后5年存活率高達(dá)90%以上［1］。然而，由于結(jié)直腸癌早期無明顯癥狀且缺乏高靈敏度和強(qiáng)特異性的早期診斷技術(shù)，大部分患者確診時(shí)已是癌癥晚期，失去了最佳治療時(shí)機(jī)，導(dǎo)致術(shù)后5年存活率很低(低于20%)。再者，由于缺乏對(duì)結(jié)直腸癌變產(chǎn)生發(fā)展機(jī)制及治療預(yù)后響應(yīng)機(jī)制的準(zhǔn)確認(rèn)識(shí)，目前結(jié)直腸癌的病因尚不明確。流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示結(jié)直腸癌的發(fā)生可能與遺傳因素、飲食因素、慢性炎癥、病毒感染、環(huán)境以及免疫功能失常等因素密切有關(guān)。因此，探索結(jié)直腸癌的產(chǎn)生發(fā)展機(jī)制以及建立早期結(jié)直腸癌無損快速診斷及治療評(píng)估方法已經(jīng)成為當(dāng)前醫(yī)學(xué)界重點(diǎn)攻關(guān)難題。

本文首先簡(jiǎn)要介紹了結(jié)直腸組織微結(jié)構(gòu)和癌變進(jìn)程，總結(jié)了現(xiàn)有臨床診斷方法及其不足，著重探討了非線性光譜技術(shù)在結(jié)直腸癌早期診斷中的最新進(jìn)展。

1 結(jié)直腸組織微結(jié)構(gòu)

正常結(jié)直腸組織是層狀上皮結(jié)構(gòu)，主要分為四層:粘膜層、粘膜下層、肌層和外膜，粘膜層又分為:1)上皮 (epithelium):單層柱狀上皮，有柱狀細(xì)胞和杯狀細(xì)胞。直腸齒狀線以上與結(jié)腸相似，為單層柱狀上皮，齒狀線與痔環(huán)之間為未角化的復(fù)層扁平上皮，痔環(huán)以下為角化的復(fù)層扁平上皮。2)固有層(lamina propria):為疏松結(jié)締組織，細(xì)胞成分較多，纖維較細(xì)密，有豐富的毛細(xì)血管和毛細(xì)淋巴管，有長(zhǎng)單管狀的大腸腺，無潘氏細(xì)胞，有孤立淋巴小結(jié)。3)粘膜肌層 (muscularis mucosa):為薄層平滑肌，其收縮可促進(jìn)固有層內(nèi)的腺體分泌物排出和血液運(yùn)行，利于物質(zhì)吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)。粘膜下層主要富含疏松結(jié)締組織，有成群脂肪細(xì)胞。肌層結(jié)構(gòu)特征為內(nèi)環(huán)外縱，外縱行肌局部增厚形成三條結(jié)腸帶。結(jié)腸外膜除升、降結(jié)腸后壁為纖維膜，其余均為漿膜。直腸外膜上1/3段和中1/3段的前壁為漿膜，其余為纖維膜［2］。結(jié)直腸組織層狀結(jié)構(gòu)如圖1所示［3］。

圖1 正常結(jié)直腸組織層狀結(jié)構(gòu)示意圖［3］Fig.1 Layered microstructure schematic diagram of normal colorectal tissue

2 結(jié)直腸組織癌變進(jìn)程

任何癌的產(chǎn)生都會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞或組織的異型性，病理學(xué)上用“異型增生”表述腫瘤細(xì)胞或組織形態(tài)變化，將出現(xiàn)異型增生而未出現(xiàn)侵襲行為的統(tǒng)稱為癌前病變。腫瘤細(xì)胞侵襲行為是判斷癌前病變和癌變的關(guān)鍵，因此正確判斷異型細(xì)胞是否發(fā)生浸潤(rùn)在病理診斷上非常重要。由于各種器官組織的特性不同，腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)侵襲行為判斷為癌的標(biāo)準(zhǔn)也不同。結(jié)直腸癌細(xì)胞侵襲的標(biāo)志主要是觀察基底膜和粘膜肌層的突破。粘膜內(nèi)腺體完整性破壞則提示基底膜突破，瘤細(xì)胞侵襲局限在基底膜在粘膜內(nèi)浸潤(rùn)稱為粘膜內(nèi)癌，瘤細(xì)胞浸潤(rùn)到粘膜下層則提示粘膜肌層突破，稱為粘膜下層癌。習(xí)慣上，將粘膜內(nèi)癌和粘膜下層癌統(tǒng)稱為早期癌。瘤細(xì)胞若突破粘膜下層則為進(jìn)展型癌，特別指出，結(jié)直腸癌變中95% 以上是腺癌［4-5］。圖2 所示為腺瘤癌變途徑示意圖［6］。

3 結(jié)直腸癌臨床診斷方法

近20年，結(jié)直腸癌在診斷方面取得了很大進(jìn)展，各種診斷方法不斷改進(jìn)，新診斷方法和技術(shù)不斷涌現(xiàn)，對(duì)結(jié)直腸癌的早期診斷、定位和分期提高到了一個(gè)新的認(rèn)知水平。

圖2 結(jié)直腸組織腺瘤癌變途徑示意圖［6］Fig.2 Canceration process schematic diagram of colorectal adenoma

3.1 腸道排泄物診斷法

大便隱血試驗(yàn)(fcecal occult blood testing，F(xiàn)OBT)［7-8］是CRC常用的初篩方法，以腫瘤的伴隨癥狀--出血為檢測(cè)對(duì)象，具有操作簡(jiǎn)便、無創(chuàng)等優(yōu)點(diǎn)，但FOBT診斷的靈敏度和特異性差異較大，影響因素復(fù)雜。脫落癌細(xì)胞檢測(cè)方法通過檢測(cè)糞便內(nèi)CRC脫落細(xì)胞的微量DNA，具有有較高的靈敏度和特異度，為結(jié)直腸癌的早期診斷開辟了新的途徑。但該方法分離過程繁瑣，易受細(xì)菌、食物及腸道黏液等干擾。糞便基因檢測(cè)(stool DNA testing，sDNA)［9-11］較 FOBT具有更高的靈敏度和特異性，人群依從性較好，但由于檢測(cè)位點(diǎn)多，成本高，限制了臨床應(yīng)用。由于CRC發(fā)病的復(fù)雜性，目前尚未找到理想的診斷標(biāo)志物。

3.2 結(jié)腸鏡診斷法

結(jié)腸鏡檢查是目前CRC最基本的診斷手段。通過放大結(jié)腸鏡能夠在活體情況下看到亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，結(jié)合三維重建技術(shù)，可以判定病變的性質(zhì)，其與活檢病理診斷的符合率高達(dá)95%［12］。聯(lián)合窄帶成像技術(shù)，無需染色即可獲得與內(nèi)鏡下染色相同的視覺效果，可實(shí)現(xiàn)對(duì)早期CRC作出實(shí)時(shí)、準(zhǔn)確的診斷［13］。CT虛擬結(jié)腸鏡利用計(jì)算機(jī)斷層掃描技術(shù)和三維圖像重構(gòu)，可獲得與結(jié)腸鏡相似的進(jìn)展期CRC檢出率，盡管其對(duì)早期結(jié)CRC和結(jié)直腸息肉的診斷不如結(jié)腸鏡檢查，而且影響因素眾多，對(duì)設(shè)備和技術(shù)的要求也很高，誤診率較高，但具有結(jié)腸鏡或鋇灌腸等無法比擬的優(yōu)點(diǎn)，如檢查時(shí)間短、無創(chuàng)、無痛苦等。

3.3 影像學(xué)診斷法

影像學(xué)診斷在明確CRC的診斷、確定系統(tǒng)治療方案、選擇外科手術(shù)術(shù)式及監(jiān)測(cè)預(yù)后等方面中，都發(fā)揮了重要的作用，受到越來越多臨床醫(yī)生的重視［14-16］。CRC的影像學(xué)診斷方法，包括:鋇劑灌腸(barium enemas，BE)、腔內(nèi)超聲 (endoscopic ultrasound，EUS)、計(jì)算機(jī)體層攝影 (computed tomography，C T)、磁共振成像 (magnetic resonance imaging，MRI)和正電子發(fā)射體層攝影(positron emission tomography，PET)等。上述影像學(xué)方法各有優(yōu)點(diǎn)和劣勢(shì)，目前醫(yī)生通過上述的一些技術(shù)手段很容易對(duì)中晚期癌癥做出臨床診斷。但是，鑒于上述方法受空間分辨率的限制(毫米量級(jí))，無法獲得結(jié)直腸組織早期病變的微結(jié)構(gòu)信息，尚無法實(shí)現(xiàn)早期CRC診斷。

4 激光共焦顯微成像技術(shù)

1990年激光共聚焦掃描技術(shù)的出現(xiàn)，共焦顯微鏡成為生物組織非侵入式顯微成像的有力工具，被廣泛用于皮膚、胃腸、角膜等組織微結(jié)構(gòu)形態(tài)病理分析［17，18］，尤其是其與內(nèi)窺鏡技術(shù)相結(jié)合，可實(shí)現(xiàn)活體組織實(shí)時(shí)高分辨顯微成像，引起人們廣泛關(guān)注［19-22］。共聚焦激光顯微內(nèi)窺鏡系統(tǒng)能直接進(jìn)入人體或動(dòng)物模型的內(nèi)部器官，無需取樣和組織病理學(xué)檢查即可實(shí)現(xiàn)高分辨率的實(shí)時(shí)組織學(xué)診斷和一定深度的斷層掃描成像。通過使用熒光對(duì)比劑，特異性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)單，避免了重復(fù)內(nèi)鏡檢查和多次取樣，成為無創(chuàng)性診斷早期腫瘤及其癌前病變的重要方法。文獻(xiàn)［19］獲取了42例大腸病變患者的共聚焦顯微圖像，并據(jù)此做出判定，病理核實(shí)準(zhǔn)確率達(dá)99.2%，診斷靈敏度和特異性分別為97.4%和99.4%?？梢哉f激光共焦掃描內(nèi)窺鏡為內(nèi)部器官腫瘤的早期診斷產(chǎn)生了劃時(shí)代的意義，是當(dāng)前CRC早期診斷的研究熱點(diǎn)之一。但是，激光共焦顯微鏡存在一個(gè)致命弱點(diǎn)，即穿透深度淺，成像深度僅局限于粘膜層，并且對(duì)生物組織具有光毒性和光漂泊作用。為了增加成像對(duì)比度往往使用熒光增強(qiáng)標(biāo)記，增加了病人風(fēng)險(xiǎn)。因此，亟需開發(fā)一種能夠?qū)Y(jié)直腸癌組織微觀形態(tài)學(xué)和內(nèi)在分子組分光譜學(xué)進(jìn)行客觀無損地診斷和監(jiān)測(cè)的高分辨率、高靈敏度的深度分辨光譜成像技術(shù)。

5 TPEF和SHG的非線性光譜成像技術(shù)

以飛秒激光與生物組織相互作用產(chǎn)生的雙光子激發(fā)熒光(two-photon excited fluorescence，TPEF)和二次諧波(second harmonic generation，SHG)等非線性光學(xué)效應(yīng)作為信號(hào)源的多光子顯微成像技術(shù)(multipnoton microscopy，MPM)可以同時(shí)獲得組織內(nèi)在成分的高靈敏度和高空間分辨率微結(jié)構(gòu)成像和光譜特性，并具有“光切”功能、低殺傷性且成像深度深等特點(diǎn)，已被廣泛用于子宮、胃腸、食道、皮膚等生物醫(yī)學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域，成為國(guó)際生物醫(yī)學(xué)光子學(xué)研究領(lǐng)域最前沿的課題［23-26］。胃腸等生物組織的許多內(nèi)在成分無須外加標(biāo)記即能產(chǎn)生較強(qiáng)的自體熒光和二次諧波信號(hào)，比如彈性蛋白、色氨酸、黃素蛋白 FAD、還原性輔酶 NADH、血管、卟啉及其衍生物能產(chǎn)生雙光子激發(fā)熒光;具有非中心對(duì)稱結(jié)構(gòu)的膠原蛋白、肌肉、肌漿球蛋白等能產(chǎn)生二次諧波信號(hào)。因此，多光子顯微光譜成像技術(shù)能夠廣泛用于無損檢測(cè)細(xì)胞、組織乃至器官的生物分子組織形態(tài)學(xué)，被認(rèn)為是可能實(shí)現(xiàn)臨床醫(yī)學(xué)無損層析成像最有前途的光學(xué)手段之一。另一方面，在結(jié)直腸癌變進(jìn)程中，組織體的微觀形態(tài)以及相關(guān)生化成分會(huì)發(fā)生改變并導(dǎo)致發(fā)射光譜發(fā)生相應(yīng)變化，這種變化往往攜帶組織體病變信息，因此有可能作為結(jié)直腸癌早期診斷和治療評(píng)估的參數(shù)指標(biāo)。

國(guó)內(nèi)外許多研究組對(duì)多光子顯微成像技術(shù)開展了研究［23-31］，初步揭示了正常、癌前、癌變層狀上皮組織的內(nèi)源性熒光差異［23］;證實(shí)了多光子顯微成像技術(shù)無需標(biāo)記便可獲得細(xì)胞微結(jié)構(gòu)詳細(xì)信息［24］;提出了一些用于表征和判定組織細(xì)胞生理和病理特性的指標(biāo)參量:如細(xì)胞形態(tài)及其 NADH和FAD的雙光子激發(fā)熒光比值已被用作研究細(xì)胞能量代謝的一種重要指標(biāo)［25，26］;膠原纖維以及彈性纖維含量、形態(tài)和方向及其SHG/TPEF強(qiáng)度比等參數(shù)被認(rèn)為可用作表征癌變信息的評(píng)估指標(biāo)［27-31］，等等。特別值得關(guān)注是，作者所在研究組首次提出采用多通道探測(cè)成像技術(shù)和光譜分辨成像技術(shù)相結(jié)合的多模式方法，對(duì)正常和異常人體皮膚、食道組織、口腔粘膜等上皮組織進(jìn)行了高對(duì)比度和高分辨率的微結(jié)構(gòu)光譜成像，初步提取了一些可用于表征組織病變信息的特征參量［32-36］。文獻(xiàn)［35］首次報(bào)道了結(jié)腸正常肌層內(nèi)斜中橫外縱的肌纖維微結(jié)構(gòu)特征以及癌細(xì)胞侵入肌層后微結(jié)構(gòu)的變化，如圖3所示(紅偽彩色顯示是雙光子激發(fā)熒光信號(hào)(TPEF)，綠偽彩色顯示的是二次諧波信號(hào)(SHG)，圖3中白色環(huán)形曲線顯示腺癌占據(jù)了肌層空間，肌纖維嚴(yán)重缺失特別是產(chǎn)生SHG信號(hào)的網(wǎng)狀肌纖維。

圖3 左邊:正常結(jié)腸肌層內(nèi)斜中橫外縱(imp-mmp-omp)的肌纖維微結(jié)構(gòu)特征;右邊:中間肌層癌細(xì)胞侵入前后的微結(jié)構(gòu)對(duì)比圖［35］Fig.3 left:inner oblique，middle transverse and outer longitudinal muscle fiber microstructure feature of normal colonic muscularis propia(imp-mmp-omp);right:the middle muscle fiber microstructure of normal and cancer cell invading into muscularis propia

盡管已有研究成果預(yù)示著多光子顯微成像技術(shù)在結(jié)直腸癌早期診斷和治療評(píng)估表現(xiàn)出誘人的前景和巨大潛力，但是，多光子顯微成像技術(shù)真正走向臨床應(yīng)用還存在許多基本問題亟待解決。首先，結(jié)直腸癌變進(jìn)程中，其內(nèi)在組分如細(xì)胞、膠原纖維、彈力纖維等的形態(tài)、分布等結(jié)構(gòu)特征存在差異，當(dāng)飛秒激光與之相互作用時(shí)，這種差異性表現(xiàn)為吸收系數(shù)、散射系數(shù)以及衰減系數(shù)的差異，并最終影響成像的質(zhì)量和深度。如何針對(duì)這種差異性選擇合適的激發(fā)波長(zhǎng)和激發(fā)功率等激光輻照參數(shù)，以期獲得高分辨率、高對(duì)比度深度成像和光譜特性就顯的尤為重要。其次，不僅正常以及癌變不同病程結(jié)直腸組織的微觀形態(tài)存在差異，同一類型結(jié)直腸癌組織，其粘膜層上皮、固有腸腺以及粘膜下層膠原蛋白和彈力纖維等存在較大的個(gè)體差異。其微觀形態(tài)通常還隨病人的年齡、性別、癌變時(shí)間、病灶部位等存在差別，即使在同一樣品中，粘膜下層不同位置的膠原蛋白和彈力纖維形態(tài)也存在一定差異。如何從眾多差異中，提取能定量表征不同病程結(jié)直腸癌變信息的特征參量是實(shí)現(xiàn)結(jié)直腸癌早期診斷和治療評(píng)估的關(guān)鍵。此外，目前針對(duì)結(jié)直腸癌非線性光譜成像研究還主要局限于組織形態(tài)學(xué)層面，對(duì)癌癥的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移，特別是術(shù)后的高復(fù)發(fā)還缺乏足夠的認(rèn)識(shí)。因此，有必要研究結(jié)直腸癌細(xì)胞的生物學(xué)特性，建立能定量表征不同病程結(jié)直腸癌的細(xì)胞特征參數(shù)，監(jiān)測(cè)癌變進(jìn)程細(xì)胞代謝等功能特征，探索外界因素對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)代謝等功能的影響。

6 拉曼光譜技術(shù)

蛋白質(zhì)、脂類、碳水化合物和核酸四大類物質(zhì)是構(gòu)成正常細(xì)胞和組織的主要物質(zhì)。細(xì)胞和組織的病變總是從構(gòu)成他們的分子開始的，在細(xì)胞和組織早期病變過程中，這些化學(xué)物質(zhì)、構(gòu)象和數(shù)量都會(huì)發(fā)生明顯變化，這些早期的變化并不引起臨床癥狀和組織內(nèi)在成分的微結(jié)構(gòu)變化，以雙光子激發(fā)熒光(TPEF)和二次諧波(SHG)為信號(hào)源的非線性光譜成像技術(shù)顯然無法檢測(cè)這種變化，而拉曼光譜卻能反映這些變化。拉曼光譜技術(shù)能夠從物質(zhì)的分子振動(dòng)光譜來識(shí)別和區(qū)分不同的物質(zhì)分子結(jié)構(gòu)，從分子水平研究和判定生物組織內(nèi)在成分的詳細(xì)信息，克服了熒光光譜技術(shù)區(qū)分病變組織的缺陷，即由于生物大分子熒光帶較寬，易重疊，影響診斷的準(zhǔn)確性。因此，拉曼光譜有望成為癌癥早期診斷以及癌變機(jī)制研究的重要手段［37-41］。

早期，人們主要利用組織切片的拉曼光譜來分析癌癥腫瘤的類型，尋求不同類型癌癥診斷標(biāo)志物。文獻(xiàn)［37］獲得了乳腺癌的拉曼光譜，結(jié)合數(shù)值擬合，得到了各種不同類型乳腺癌的基本特征物質(zhì)的含量，該方法在從正常和良性組織中區(qū)分癌變組織的靈敏度和特異性分別達(dá)到了94%和96%;文獻(xiàn)［38］通過對(duì)比胃癌和正常胃黏膜的拉曼光譜，確定了胃癌的特征峰，證實(shí)拉曼光譜可用于來診斷胃癌。近年來，利用血清的拉曼光譜進(jìn)行CRC的診斷引起人們的極大興趣。血清是人體血液中的重要組成部分，血清白蛋白富含多種蛋白質(zhì)，可以全面表征個(gè)體信息，血清中的抗體(免疫球蛋白)是體內(nèi)最主要的抗體，對(duì)各種細(xì)菌、病毒都有很強(qiáng)的抵抗力。分析血清的拉曼光譜可以深入了解血清中所包含各種物質(zhì)的性質(zhì)，它對(duì)臨床的研究有著極其重要的意義。特別是近年來表面增強(qiáng)拉曼散射(SERS)技術(shù)的發(fā)展，克服了常規(guī)拉曼的固有缺陷，能夠在幾秒時(shí)間內(nèi)很容易探測(cè)到物質(zhì)內(nèi)部微觀世界的信息，同時(shí)又能夠?qū)晒猱a(chǎn)生很好的抑制、猝滅作用［39-42］。課題組前期工作已經(jīng)利用SERS技術(shù)對(duì)鼻咽癌、胃癌和結(jié)直腸癌進(jìn)行基礎(chǔ)研究，證實(shí)癌變組織與血液樣品生化成分、含量以及生物分子結(jié)構(gòu)上與正常健康人樣品存在很大的差異［43-45］。文獻(xiàn)［45］對(duì)正常血清與結(jié)直腸癌血清的SERS平均光譜進(jìn)行了對(duì)比分析，并且利用主成份統(tǒng)計(jì)分析方法對(duì)SERS光譜的主成份PC1，PC2，PC3進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，靈敏度和特異性分別為84.2%，93.3＆% 和 92.1% ，95.6%，如圖 4 所示。

鑒于人體血液的多樣性和個(gè)體差異性，如何獲取CRC早期快速診斷拉曼特征標(biāo)志譜是本領(lǐng)域研究的重點(diǎn)。在建立正常人血清主要成分的拉曼基本譜基礎(chǔ)上，進(jìn)一步增加“個(gè)體化”擬合因子，同時(shí)構(gòu)建分子拉曼計(jì)算模型，通過理論數(shù)值模擬與實(shí)驗(yàn)分析，開展拉曼分子指紋特征譜的理論和實(shí)驗(yàn)研究，構(gòu)建拉曼早期快速診斷惡性腫瘤研究技術(shù)平臺(tái)，確定惡性腫瘤(乳腺癌和肝癌)快速診斷的拉曼指紋特征標(biāo)志譜。

7 結(jié)論與展望

隨著分子生物、內(nèi)鏡影像技術(shù)以及激光技術(shù)的發(fā)展，CRC診斷方法和方式不斷改進(jìn)，新診斷方法和技術(shù)不斷涌現(xiàn)，為從細(xì)胞和分子水平認(rèn)識(shí)結(jié)直腸癌類型和癌變進(jìn)程以及療效評(píng)估提供研究手段和方法。對(duì)結(jié)直腸癌的早期診斷、定位和分期提高到了一個(gè)新的認(rèn)知水平。尤其是以雙光子激發(fā)熒光和二次諧波為信號(hào)源的多光子顯微成像技術(shù)非常適合用于組織和細(xì)胞的微結(jié)構(gòu)形態(tài)和內(nèi)在成分光譜特性研究，而以拉曼散射效應(yīng)為基礎(chǔ)建立起來的拉曼光譜技術(shù)，則可以從物質(zhì)的分子振動(dòng)光譜來識(shí)別和區(qū)分不同的物質(zhì)結(jié)構(gòu)，能夠提供生物組織內(nèi)在分子組分的詳細(xì)信息。二者各具優(yōu)點(diǎn)又能相互補(bǔ)充。無疑，聯(lián)合多光子顯微成像技術(shù)與拉曼光譜技術(shù)(MPM/RS)并進(jìn)一步結(jié)合內(nèi)窺鏡、微光纖技術(shù)將是未來結(jié)直腸癌早期無損診斷和治療評(píng)估的重要研究重點(diǎn)和方向，也是本論文作者正在開展的研究工作。進(jìn)一步的研究將有望從分子水平和細(xì)胞水平認(rèn)識(shí)結(jié)直腸癌產(chǎn)生、發(fā)展的內(nèi)在機(jī)制，建立能夠定量表征正常以及不同病程結(jié)直腸癌的特征參數(shù)，為結(jié)直腸癌的早期無損診斷和治療評(píng)估提供參考指標(biāo)和基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，對(duì)結(jié)直腸癌早期防治具有重要指導(dǎo)意義和參考價(jià)值。

圖4 (A)正常血清與結(jié)直腸癌血清SERS平均光譜對(duì)比圖;(B，C)正常血清與結(jié)直腸癌血清SERS光譜的主成份PC1，PC2，PC3二維散點(diǎn)圖［45］Fig.4 (A)Comparison of the mean spectrum for the colorectal cancer serum(blue curve)versus that of the normal serum(red curve)samples.Each spectrum was normalized to the integrated area under the curve to correct for variations in absolute spectral intensity.The shaded areas represent the standard deviations of the means.Also shown at the bottom is the difference spectrum.(B)Plots of the first principal component(PC1)versus the second principal component(PC2)for normal group versus colorectal cancer group.(C)Plot of the first principal component(PC1)versus the third principal component(PC3)for normal group versus colorectal cancer group

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