婦科白帶片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

★ 龔雪林 (江西藥都中藥飲片有限公司 樟樹 331200)

婦科白帶片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

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目的：建立婦科白帶片質(zhì)量控制方法。方法：采用顯微鑒別方法鑒別山藥；采用高效液相色譜法檢測(cè)芍藥苷的含量。結(jié)論：采用顯微鑒別方法能有效鑒別山藥的真?zhèn)?；本品中芍藥苷?1.38-113.81μg/mL范圍內(nèi)線性良好(r=0.9999),平均回收率為99.47%(RSD=0.92%，n=6)。結(jié)論： 所建立的方法簡(jiǎn)便、可靠，可用于婦科白帶片的質(zhì)量控制。

婦科白帶片;山藥; 芍藥苷;質(zhì)量控制

婦科白帶片標(biāo)準(zhǔn)源于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第十一冊(cè)，處方由白術(shù)(炒)、蒼術(shù)、陳皮、荊芥、黨參、甘草、柴胡、山藥、車前子(炒)、白芍(炒)十味中藥材組成。白術(shù)、蒼術(shù)合用以健脾益氣，燥濕利水以止帶，為君藥。陳皮理氣燥濕；黨參、山藥補(bǔ)脾益氣，為臣藥。柴胡疏解肝郁；白芍養(yǎng)血柔肝；車前子利水滲濕止帶；荊芥祛風(fēng)解表，共為佐藥。甘草協(xié)調(diào)藥性為使藥。共奏健脾舒肝，除濕止帶之功效；可用于脾虛濕盛，白帶連綿，腰腿酸痛[1]。

原標(biāo)準(zhǔn)中沒有任何鑒別及含量測(cè)定項(xiàng)，不足以控制制劑的質(zhì)量，故實(shí)驗(yàn)中對(duì)每一味藥材都進(jìn)行了鑒別或者是含量測(cè)定研究，對(duì)本品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)作了進(jìn)一步研究和提高，增加了山藥的顯微鑒別及芍藥苷的含量測(cè)定。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀(安捷侖1200)，高效液相色譜儀(島津LC-20AD)，Diamonsil(鉆石1代) C184.6×250mm 5um色譜柱，Diamonsil(2) C184.6×250mm 5um色譜柱，Hypersil GOLD C184.6×250mm 5um色譜柱，Inertsustain C184.6×250mm 5um色譜柱，Sartorius BS電子天平(CP224S CP225D)；XSP-3CA顯微鏡；市售青島硅膠G薄層板；色譜純乙腈，其它試劑均為分析純；芍藥苷對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所提供)。婦科白帶片由江西藥都樟樹制藥有限公司提供(批號(hào)見文內(nèi))。

2 試驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 山藥的顯微鑒別

山藥為常用中藥，全國各地習(xí)用的山藥為薯蕷科植物薯蕷的根莖。市場(chǎng)上出現(xiàn)了偽品山藥，影響了藥材質(zhì)量及臨床治療效果。本品中的山藥以原粉入藥，故采用顯微鑒別方法進(jìn)行檢識(shí)。

取婦科白帶片樣品，除去糖衣，研細(xì)，取細(xì)粉少許，置載玻片上，滴加水合氯醛試液1-2滴，蓋上蓋玻片，置顯微鏡下觀測(cè)：淀粉粒眾多，多為單粒，大多扁卵形，直徑 直徑8-35μm；臍點(diǎn)人字狀或短縫狀,多位于較小端，大粒層紋明顯，復(fù)粒少見； 結(jié)果各批樣品以上山藥的顯微特征明顯，可用于本品的質(zhì)量控制。

2.2 芍藥苷的含量測(cè)定

實(shí)驗(yàn)對(duì)本品中的芍藥苷進(jìn)行了含量測(cè)定研究，結(jié)果表明，在選定的色譜條件下，其它成分不干擾芍藥苷的測(cè)定，系統(tǒng)適用性、方法回收率符合要求，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好。

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈- 1%冰醋酸溶液(16:84)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm；流速：1mL/分；柱溫：25℃。理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備

取芍藥苷對(duì)照品適量，精密稱定，加稀乙醇制成每1mL含50μg的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備

取本品20片，糖衣片除去糖衣，精密稱定，研細(xì)，取約2g，精密稱定，置50mL量瓶中，加稀乙醇35mL，超聲處理(功率350W，頻率53kHz)30分鐘，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 陰性樣品溶液的制備

按處方取不含白芍(炒)的其它藥材，按制法制成陰性樣品，再按正文供試品溶液制備方法制成陰性樣品溶液。

2.2.5 測(cè)定法

分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液陰性樣品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定。

芍藥苷對(duì)照品和制劑中的其它組分均能達(dá)到基線分離(見芍藥苷對(duì)照品溶液HPLC圖譜及婦科白帶片供試品溶液HPLC圖譜)；取芍藥苷對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，結(jié)果峰面積重復(fù)性良好，RSD為0.65%，系統(tǒng)適用性；陰性樣品無干擾(見缺白芍(炒)的陰性樣品溶液HPLC圖譜)；且分離度均大于1.5，理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算均大于2 000。

圖1 芍藥苷對(duì)照品溶液HPLC圖譜

圖2 婦科白帶片供試品溶液HPLC圖譜

圖3 缺白芍(炒)的陰性樣品溶液HPLC圖譜

2.2.6 線性關(guān)系的考察

精密稱取芍藥苷(中檢所，1107363-200934，含量為95.7%)對(duì)照品，用稀乙醇稀釋成不同濃度的對(duì)照品溶液，分別注入液相色譜儀，依法測(cè)定峰面積。以芍藥苷的濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)X，峰面積為縱坐標(biāo)Y，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=13.867X-8.6473,相關(guān)系數(shù)r=0.9999，表明芍藥苷在11.38-113.81μg/mL(進(jìn)樣量為10μL)范圍內(nèi)線性良好，呈一條直線，可以用單點(diǎn)外標(biāo)面積法測(cè)定并計(jì)算含量。

2.2.7 精密度試驗(yàn)

取芍藥苷對(duì)照品溶液(濃度為56.90μg/mL)，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，結(jié)果芍藥苷峰面積積分值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.78%，小于2%，表明此法精密度良好。

2.2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取本品(批號(hào)為110301)，按供試品溶液制備方法制成供試品溶液，分別在放置0、2、4、6、8、10、12、21小時(shí)后，依法測(cè)定峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果芍藥苷含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差1.37%，表明本品的樣品穩(wěn)定性良好。

2.2.9 重復(fù)性試驗(yàn)

取本品(批號(hào)為110301)各6份，依法測(cè)定芍藥苷的含量，結(jié)果樣品中芍藥苷含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.83%，表明此法重復(fù)性良好。

2.2.10 加樣回收試驗(yàn)

采用加樣回收法。取本品(批號(hào)為110301，已知芍藥苷含量為1.380mg/g)1g共 6份;精密稱定，分別定量加入芍藥苷對(duì)照品適量，依法測(cè)定芍藥苷的含量。計(jì)算回收率，結(jié)果芍藥苷平均回收率99.47%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差0.92%;表明此法回收率良好(詳見表1)。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.2.11 耐用性試驗(yàn)

不同時(shí)間，不同人員分別采用不同的高效液相色譜儀及不同的色譜柱，且適當(dāng)調(diào)整流動(dòng)相比例，對(duì)同一批樣品(110301)中芍藥苷的含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果對(duì)同一批樣品(110301)中芍藥苷的含量進(jìn)行測(cè)定，平均含量為0.364mg/片，RSD為0.70%，結(jié)果精密度良好，表明作為測(cè)定本品中的芍藥苷的含量方法，耐用性良好。

2.2.12 樣品含量測(cè)定

取本品，按正文中含量測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定芍藥苷的含量，結(jié)果見表2。

表2 婦科白帶片中芍藥苷含量測(cè)定結(jié)果(平均含量0.284)

由于不同產(chǎn)地及來源的白芍(炒)的含量有高有低，結(jié)合以上樣品中芍藥苷的含量測(cè)定結(jié)果，將本品中芍藥苷(C23H28011)的含量暫定為:不得少于0.20mg/片。

結(jié)論：以上試驗(yàn)結(jié)果表明，所建立芍藥苷含量測(cè)定方法科學(xué)、簡(jiǎn)便，能有效地控制婦科白帶片中芍藥苷的含量。

3 討論

3.1 山藥的顯微鑒別

山藥為常用中藥，正品有毛山藥、光山藥；市場(chǎng)上出現(xiàn)了偽品山藥，有木薯、天花粉、番薯、參薯等，故采用正文方法可以控制本品質(zhì)量及臨床治療效果。

3.2 芍藥苷的含量測(cè)定

在2010年版中國藥典白芍含量測(cè)定下，芍藥苷峰對(duì)稱性差，而且流動(dòng)相中使用0.1%磷酸溶液，易造成色譜柱及管路的腐蝕和堵塞，故經(jīng)過研究對(duì)比，采用1%的冰醋酸溶液，結(jié)果峰形好，保留時(shí)間適當(dāng)，分離度好。

[1]中華人民共和國藥典委員會(huì).中國藥典一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010:27.176.96.

R 927.2

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2013-05-26)