五味子中117種農(nóng)藥多殘留氣相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法研究

徐宜宏，蔣 施，付海濱，趙 穎，金 雁，鐘 鈺，劉 瑜，李曉東，于 麗

（沈陽出入境檢驗(yàn)檢疫局 檢驗(yàn)檢疫綜合技術(shù)中心，沈陽 110016）

0 引 言

五味子，俗稱山花椒、秤砣子、藥五味子等，學(xué)名：Schisandrachinensls（Turcz，）Baill。多年生落葉藤本，屬木蘭科，具有抗衰老、強(qiáng)身等藥理作用，具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值［1］。

在實(shí)際檢測中發(fā)現(xiàn)，五味子作為一種中藥材基質(zhì)，其中許多成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)等與農(nóng)藥極其相似，嚴(yán)重干擾農(nóng)藥殘留量的測定，這對(duì)農(nóng)藥殘留物的提取、凈化提出了更高的要求。其處理方法的好壞直接影響檢測結(jié)果準(zhǔn)確性、實(shí)用性、可行性［2－3］。

本實(shí)驗(yàn)選擇了有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯類、氨基甲酸酯類及其他類共117種農(nóng)藥為研究對(duì)象，建立了五味子中117種農(nóng)藥殘留同時(shí)檢測的GC－MS／MS確證方法，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，此方法對(duì)于五味子這類復(fù)雜基質(zhì)中藥樣品有較好的凈化效果，大大的降低了背景對(duì)檢測的干擾，操作簡單，快捷，高效，并且采用了先進(jìn)的GC－MS／MS技術(shù)，定性定量準(zhǔn)確，完全可以滿足出口五味子中農(nóng)藥殘留檢測限量的要求［4－8］。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，美國Varian公司450GC－320MS；凝膠滲透色譜儀（GPC），美國J2scientific公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)系統(tǒng)，美國LABCONCO公司；氦氣、氬氣（純度99.999%）；臺(tái)式離心機(jī)，德國Sigma公司；農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：購置于農(nóng)業(yè)部天津環(huán)保所，純度均為99%以上。無水硫酸鎂為分析純，640℃下連續(xù)烘干4h；乙酸乙酯，色譜純，美國Dikma公司；其余溶劑均為重蒸分析純。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配置與保存

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱取適量的各農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的溶解性選擇丙酮稀釋成100mg／mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，0～4℃冷藏保存。標(biāo)準(zhǔn)工作液：根據(jù)每種標(biāo)準(zhǔn)的靈敏度和儀器線性范圍，吸取一定量的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，用丙酮稀釋成系列濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.3 樣品前處理

1.3.1 樣品制備與提取

準(zhǔn)確稱取樣品10.0g，置于具塞塑料離心管中，加入40mL乙酸乙酯－乙腈（30∶70）混合溶液［9］，超聲40min。提取液過濾至塑料具塞離心管中，殘?jiān)儆?5mL乙酸乙酯－乙腈（30∶70）重復(fù)提取1次，合并過濾液。于40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干。10mL乙酸乙酯－環(huán)己烷（1＋1）以溶解殘?jiān)?，并?.45μm濾膜過濾，待凈化。

1.3.2 凝膠色譜凈化（GPC）

凈化條件：凈化柱填料為Bio Beads S－X3，規(guī)格250mm×25mm，；流動(dòng)相乙酸乙酯－環(huán)己烷（1＋1）；流速4.7mL／min；收集時(shí)間8.0～23.0min?？焖贊饪s至近干，加入1.0mL色譜純乙酸乙酯溶解殘?jiān)?，離心2min，上清液用0.22μm濾膜過濾，供GC／MS／MS測定。

1.4 儀器測定條件

色譜條件：

色譜柱VF－5ms 30m×0.25mm×0.25mm，程序升溫條件：50℃保持4min，15℃／min升溫至190℃，5℃／min升溫至240℃，10℃／min升溫至290℃保持15min；載氣：氦氣，純度99.999%；恒流模式，流速：1.0mL／min；進(jìn)樣口溫度：230℃，進(jìn)樣量：1μL；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣。

質(zhì)譜條件：

電離電壓：EI 70eV，燈絲電流：100μA，離子源溫度：220℃，腔體溫度：40℃；傳輸線溫度：280℃，碰撞氣：氬氣，1.8mTorr；溶劑延遲時(shí)間5.0min；MRM條件：每個(gè)農(nóng)藥選擇1～2個(gè)母離子，2個(gè)子離子定性，其中1個(gè)母離子，1個(gè)子離子定量，定性及定量離子見表1。

表1 117種農(nóng)藥保留時(shí)間、定性定量離子、線性回歸方程、線性范圍和相關(guān)系數(shù)（r）

續(xù)表1

續(xù)表1

2 結(jié)果與討論

2.1 提取條件的優(yōu)化

該部分實(shí)驗(yàn)比較了乙酸乙酯、乙腈、丙酮3種有機(jī)溶劑的提取效果。結(jié)果表明有些農(nóng)藥在乙酸乙脂提取液中回收率好，有些在乙腈中提取率高，而丙酮的提取效果并不理想。為了兼顧多種農(nóng)藥殘留檢測的需要，采用乙酸乙酯和乙腈的混合溶液進(jìn)行樣品提取，分別考察了不同比率的乙酸乙酯－乙腈對(duì)提取效率的影響，發(fā)現(xiàn)乙酸乙酯－乙腈（30∶70，v／v）不僅能有效提取目標(biāo)農(nóng)藥，同時(shí)也減少了基質(zhì)共提取物對(duì)目標(biāo)農(nóng)藥定性、定量的干擾。這是由于乙腈的極性強(qiáng)，對(duì)絕大部分農(nóng)藥的溶解性更好，而少量乙酸乙酯的引入可以兼顧極性較低農(nóng)藥的提取效率。

2.2 凈化條件的優(yōu)化

通過凝膠色譜柱分別收集5～8min，8～16min，16～20min，20～23min，23～25min，測定回收率。通過測定發(fā)現(xiàn)，收集時(shí)間為8～23min的流出液中各種農(nóng)藥的回收率最高，因此，確定收集時(shí)間為8～23 min的流出液，即37.6～108.1mL。

2.3 方法學(xué)數(shù)據(jù)考察

2.3.1 方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性關(guān)系

參考各國的最高農(nóng)藥限量標(biāo)準(zhǔn)及儀器的靈敏度，在0.01～5.0μg／mL線性范圍內(nèi)配制5個(gè)不同濃度梯度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，以標(biāo)準(zhǔn)溶液中被測組分峰面積和內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液中被測組分濃度與內(nèi)標(biāo)物濃度的比值為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，得到回歸方程、相關(guān)系數(shù)，列于表1。結(jié)果表明，在0.01～5.0μg／mL的濃度范圍內(nèi)，各農(nóng)藥均具有良好線性。

2.3.2 方法的準(zhǔn)確度和精密度

在五味子空白樣品中添加不同含量水平的117種農(nóng)藥，同時(shí)做空白對(duì)照。在0.005～0.2mg／kg范圍中分別添加3種水平，每個(gè)水平5個(gè)平行樣，按1.3中所述步驟操作，所得到的各農(nóng)藥的添加回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，五味子空白樣品及加標(biāo)樣品的總離子流圖分別見圖1和圖2。

圖1 空白五味子樣品的總離子流色譜圖

圖2 空白五味子樣品中117種農(nóng)藥的添加回收總離子流色譜圖

3 結(jié) 論

本文選用乙酸乙酯－乙腈（30∶70，v／v）為提取溶劑，凝膠滲透色譜技術(shù)（GPC）法為凈化方法，建立了五味子中117種農(nóng)藥殘留同時(shí)檢測的（GC－MS／MS）確證方法。為中草藥類基質(zhì)中多種農(nóng)藥殘留檢測方法提供了理論依據(jù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該方法準(zhǔn)確性和重復(fù)性好、檢出限低，適用于中草藥材中多種農(nóng)藥殘留的同時(shí)檢測，具有一定的應(yīng)用價(jià)值。

［1］鄧勛，宋小雙，周琦，等.無公害農(nóng)藥防治北五味子白粉病田間藥效試驗(yàn)［J］.北方園藝，2008（2）：245－247.

［2］張煒，相秉仁，于麗燕.中藥中農(nóng)藥殘留的研究進(jìn)展［J］.南京曉莊學(xué)院學(xué)報(bào)，2008（3）：37－42.

［3］陳躍，杜振霞，王金花，等.藥用植物中殘留有機(jī)磷農(nóng)藥的定性和定量分析［J］.質(zhì)譜學(xué)報(bào)，2009，30（6）：352－358.

［4］蘇建峰，盧聲宇，陳晶，等.溶劑轉(zhuǎn)移－氣相色譜質(zhì)譜法和選擇洗脫－氣相色譜法測定大蒜中289種農(nóng)藥多殘留［J］.色譜，2011，29（7）：643－655.

［5］董豐收，劉新剛，鄭永權(quán)，等.氣相色譜一離子阱串聯(lián)質(zhì)譜法測定人參中五氯硝基苯及其代謝產(chǎn)物殘留［J］.分析化學(xué)研究簡報(bào)，2008，36（12）：1716－1720.

［6］苗水，郟征偉，毛秀紅，等.液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測定穿心蓮中敵克松、甲基托布津甲萘威和敵百蟲的農(nóng)藥殘留量［J］.藥物分析雜志，2011，31（3）：529－533.

［7］吳曉波，薛健，彭崢國.GC－MSMS在中藥農(nóng)藥多殘留檢測中的應(yīng)用［J］.江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39（2）：433－434.

［8］ZHANG Jie，LEE H K.Application of Liquid－phase Microextraction and on－Column Derivatization Combined with Gas Chromatography－Mass Spectrometry to the Determination of Carbamate Pesticides［J］.J Chromatogr A，2006，1117（1）：31－37.

［9］CARRO A M，LORENZO R A，F(xiàn)ENMANDEZ F.Multi－residue screening of chlorinated and brominated compounds from aquaculture samples usjng matrix solid－phase dispersion－gas chromatography－mas sspectrometry［J］.Journal of Chromatography A，2005，1071（1／2）：93－98.