胃得康膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

羅筱葵，胡偉銘，楊志彬

胃得康膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

*羅筱葵1，胡偉銘2，楊志彬1

（1. 吉安市中心人民醫(yī)院，江西，吉安 343000；2. 吉安市醫(yī)藥總公司，江西，吉安 343000）

主要建立胃得康膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中HPLC測(cè)定有效成分延胡索乙素含量的方法和佛手、延胡索乙素、石菖蒲的薄層層析鑒別方法。采用色譜柱為Diamonsil（鉆石）C18柱（5 um，200 × 4．6 mm，）；流動(dòng)相在查閱文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上通過(guò)優(yōu)化后確定為：甲醇一0.1%磷酸（三乙胺調(diào)pH值=6.0）（62:38）；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm。延胡索乙素的線性范圍為12 ~192 μg，相關(guān)系數(shù)R2= 0.9999；加樣回收率為99.3% (RSD 3.2)。佛手、延胡索乙素、石菖蒲薄層層析鑒別采用硅膠254薄層板，展開(kāi)劑通過(guò)實(shí)驗(yàn)篩選分別用正已烷一乙酸乙酯（3:1）、正已烷一甲醇一乙酸乙酯一濃氨水（8:2:2:0.1）、石油醚（60~90℃）一乙酸乙酯（3:1）。含量測(cè)定方法穩(wěn)定，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好；薄層層析鑒別方法的色譜中，樣品均能在對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)?？勺鳛楸局苿┑暮繙y(cè)定方法和薄層層析鑒別方法。

胃得康膠囊；延胡索乙素；高效液相色譜法；薄層層析鑒別法

胃得康膠囊由胃得康片改劑型而來(lái)，由延胡索、佛手、雞骨香、白及、枯礬、石菖蒲六味藥材制成。具有疏肝理氣、和胃止痛的功效。常用于急、慢性胃炎、消化性潰瘍、胃痙攣、胃下垂、胃粘膜脫垂癥、胃神經(jīng)官能癥等上腹胃脘部疼痛者?！吨袊?guó)藥典》2010版對(duì)延胡索建立了延胡索乙素含量的測(cè)定，且延胡索乙素為胃得康膠囊中的一項(xiàng)主要活性成分。因此，本研究重點(diǎn)對(duì)制劑中延胡索乙素的含量測(cè)定方法和佛手、延胡索乙素、石菖蒲薄層層析鑒別方法進(jìn)行了研究。

1 儀器與方法

1.1 佛手的薄層層析鑒別

供試品溶液的制備：取本品5粒，傾出內(nèi)容物，加乙醇10 mL，超聲處理30 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇2 mL使溶解。

對(duì)照藥材溶液的制備：取佛手對(duì)照藥材0.5 g，加乙醇5 mL，同供試品法制成對(duì)照藥材溶液。

陰性對(duì)照溶液的制備：按處方比例取缺佛手藥材樣品，同樣品制備方法制成缺佛手藥材的陰性浸膏，再取陰性浸膏同供試液方法制成陰性對(duì)照溶液。

薄層板：硅膠254薄層板。

展開(kāi)劑：正已烷一乙酸乙酯（3:1）。

點(diǎn)樣量：三種溶液各2 μL。

檢視：紫外光燈（365 nm）下檢視。

1.2 延胡索乙素的薄層層析鑒別

供試品溶液的制備：取延胡索對(duì)照藥材1 g加甲醇20 mL，加熱回流60 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)?0%醋酸20 mL使溶解，加濃氨試液調(diào)節(jié)pH值至10~11，用乙醚振搖提取3次，每次20 mL，合并乙醚提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解。

對(duì)照藥材溶液的制備：取延胡索乙素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液。

陰性對(duì)照溶液的制備：按處方比例取缺延胡索乙素藥材樣品，同樣品制備方法制成缺延胡索乙素藥材的陰性浸膏，再取陰性浸膏同供試品溶液方法制成陰性對(duì)照溶液。

薄層板：硅膠254薄層板。

展開(kāi)劑：正已烷一甲醇一乙酸乙酯一濃氨水（8:2:2:0.1）。

點(diǎn)樣量：三種溶液各2 μL。

檢視：置紫外光燈（365 nm）下檢視。

1.3 石菖蒲的薄層層析鑒別

供試品溶液的制備：取本品內(nèi)容物8粒，傾出內(nèi)容物，加水50 mL，加熱提取30 min，濾過(guò)，濾液用石油醚(30~60 ℃）振搖提取2次，每次15 mL，合并石油醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解。

對(duì)照藥材溶液的制備：取石菖蒲對(duì)照品，同供試品溶液制法制成每1 mL含0.5 mg對(duì)照品藥材溶液。

陰性對(duì)照溶液的制備：按處方比例取缺石菖蒲藥材樣品，同樣品制備方法制成缺石菖蒲藥材的陰性浸膏，再取陰性浸膏同供試品溶液方法制成陰性對(duì)照溶液。

薄層板：硅膠254薄層板。

展開(kāi)劑：石油醚（60~90 ℃）一乙酸乙酯(3:1)。

點(diǎn)樣量：三種溶液各2 μL。

檢視：置紫外光燈（365 nm）下檢視。

1.4 高效液相色譜含量測(cè)定法

1.4.1 儀器、藥品、與試劑

高效液相色譜儀：日本島津LC-10ATvp系列高效液相色譜儀，HW－2000色譜工作站。延胡索乙素對(duì)照品（含量測(cè)定用，購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)分別為：0726-200208）。甲醇為色譜純，水為超純水，其它試劑均為分析純。十批胃得康膠囊樣品批號(hào)為：040701、040702、040703、050401、050402、050403、050404、050901、050902、050903（由江西保利制藥有限公司提供）。

1.4.2 供試品溶液的制備

取延胡索對(duì)照藥材1 g加甲醇20 mL中，加熱回流60 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)?0%醋酸20 mL使溶解，加濃氨試液調(diào)節(jié)pH值至10~11，用乙醚振搖提取3次，每次20 mL，合并乙醚提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解。

1.4.3 測(cè)定方法

1.4.3.1色譜條件

Diamonsil（鉆石）C18柱（5 μm，200 × 4.6 mm）；流動(dòng)相：甲醇一0.1%磷酸（三乙胺調(diào)pH值=6.0）(62:38)。流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；柱溫室溫。按上述色譜條件下延胡索乙素在18 min左右出峰，供試品溶液和對(duì)照品溶液在上述相應(yīng)位置處有相同色譜峰，陰性無(wú)干擾，見(jiàn)（圖1、圖2），結(jié)果延胡索乙素在18 min左右出峰，并有較好的分離，理論板數(shù)在3000以上。

圖1 延胡索乙素對(duì)照品HPLC色譜

圖2 供試品HPLC色譜

1.4.3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定

精密取延胡索乙素對(duì)照品溶液(0.046 mg/mL)，在200~400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果延胡索乙素在282.0 nm處有最大吸收（見(jiàn)圖3）。文獻(xiàn)與中國(guó)藥典多采用280 nm，由于282 nm波長(zhǎng)處，干擾少且穩(wěn)定，所以，選擇282 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

圖3 延胡索乙素對(duì)照品紫外光譜

1.4.3.3空白試驗(yàn)

按本品處方制法制得不含延胡索乙素藥材的空白制劑，用供試品溶液制備方法制得去延胡索乙素的空白溶液，用上述色譜條件測(cè)定，比較供試品溶液色譜和延胡索乙素對(duì)照品溶液色譜，結(jié)果陰性樣品中其他組分對(duì)延胡索乙素色譜峰無(wú)干擾(見(jiàn)圖4)。

圖4 空白制劑HPLC色譜

1.4.3.4 線性關(guān)系考察

精密稱(chēng)取延胡索乙素對(duì)照品6.0 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取上述對(duì)照品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mL分別置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。按上述色譜條件，分別吸取10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積。以進(jìn)樣量（μg/m:）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行線性回歸分析，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 線性關(guān)系考察

回歸方程：y = 37221x

相關(guān)系數(shù)：R2= 0.9999

結(jié)果表明，延胡索乙素在12 ~192 μg范圍內(nèi)，峰面積與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系。

1.4.3.5精密度試驗(yàn)

精密吸取上述線性關(guān)系考察中第3號(hào)對(duì)照品溶液，按上述色譜條件，進(jìn)樣測(cè)定5次，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

1.4.3.6供試品提取方法的考察

延胡索乙素為生物堿類(lèi)化合物，微溶于水，易溶于熱水和冷乙醇，常用5%甲酸的甲醇溶液或堿化后用乙醚、醋酸乙酯等提取。本品堿化后用乙醚提取三次，然后再提取兩次，將后兩次的提取液分別進(jìn)行HPLC測(cè)定，均檢測(cè)不出延胡索乙素。因此，采用乙醚四次提取可完全提出延胡索乙素。

1.4.3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取本品(批號(hào)040701)，按前述含量測(cè)定項(xiàng)下的方法制備和測(cè)定供試品于0、1、2、4、8、24 h內(nèi)峰面積，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 供試品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

結(jié)果表明，本品供試品溶液在0~24 h內(nèi)，供試品溶液基本穩(wěn)定。

1.4.3.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取本品（批號(hào)040701），一式5份，照前述含量測(cè)定項(xiàng)下方法制備與測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表4，延胡索乙素平均含量為0.0987 mg/g，RSD = 1.78%。

表4 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

1.4.3.9 加樣回收率試驗(yàn)

取本品適量（批號(hào)040701），精密加入延胡索乙素對(duì)照品溶液（48 μg/mL），照前述含量測(cè)定項(xiàng)下方法制備與測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

1.4.3.10 樣品測(cè)定

取本品10批，按前述含量測(cè)定項(xiàng)下方法試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 樣品測(cè)定結(jié)果

根據(jù)表6十批試制樣品含量測(cè)定結(jié)果和原劑型的含量限度，擬定本品每粒含延胡索乙素不得少于0.040 mg。

1.4.3.11延胡索藥材的含量測(cè)定

按《中國(guó)藥典》2010年版一部延胡索乙素含量測(cè)定方法，測(cè)定三批延胡索中延胡索乙素含量，結(jié)果見(jiàn)表7。

表7 藥材的含量測(cè)定結(jié)果

2010年版藥典規(guī)定延胡索中含延胡索乙素（C21H25NO4）不得少于0.050%。

1.5　檢查

本品為膠囊劑，根據(jù)中國(guó)藥典2010年版一部附錄IL膠囊劑項(xiàng)下的規(guī)定，按通則規(guī)定的方法檢測(cè)其水分、裝量差異、崩解時(shí)限、微生物限度檢查等常規(guī)檢查項(xiàng)，結(jié)果均符合規(guī)定。同時(shí)，依據(jù)中國(guó)藥典2010年版一部附錄Ⅸ E重金屬檢查法第二法和附錄Ⅸ F砷鹽檢查法第一法，對(duì)本品進(jìn)行了重金屬和砷鹽的測(cè)定，結(jié)果重金屬低于10 ppm，砷鹽低于2 ppm。

1.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

參照《中藥新藥質(zhì)量穩(wěn)定性研究的技術(shù)要求》和《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄XⅨC藥物穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則，對(duì)三批上市包裝的樣品進(jìn)行了加速穩(wěn)定性試驗(yàn)[溫度(40 ± 2)℃，相對(duì)濕度(75 ± 5)%，6個(gè)月]和長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)（室溫條件下，12個(gè)月），結(jié)果各項(xiàng)考察指標(biāo)與0月比較，其質(zhì)量沒(méi)有明顯變化，表明本品質(zhì)量穩(wěn)定，有效期可暫定二年。

2 結(jié)果

2.1 佛手的薄層鑒別結(jié)果

佛手供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)（見(jiàn)圖5）。

1: 對(duì)照藥材 2: 陰性對(duì)照 3: 供試品

2.2 延胡索乙素的薄層鑒別結(jié)果

延胡索乙素供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)（見(jiàn)圖6）。

1: 對(duì)照品 2: 陰性對(duì)照 3: 供試品

2.3 石菖蒲的薄層鑒別結(jié)果

石菖蒲供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)（見(jiàn)圖7）。

1: 對(duì)照藥材 2: 陰性對(duì)照 3: 供試品

2.4 延胡索乙素的含量

延胡索乙素含量測(cè)定的線性范圍為12 ~192 μg，相關(guān)系數(shù)R2 = 0.9999；加樣回收率為99.3% (RSD 3.2)。結(jié)果見(jiàn)圖8。

圖8 延胡素乙素曲線

3 討論

3.1 測(cè)定方法的選擇

復(fù)方制劑中延胡索乙素含量測(cè)定方法，文獻(xiàn)報(bào)道的主要有高效液相色譜法、分光光度法、薄層掃描法等。分光光度法、薄層掃描法前處理復(fù)雜，操作要求高，操作比較復(fù)雜，檢測(cè)周期長(zhǎng)、檢測(cè)誤差大，《中國(guó)藥典》2010年版一部延胡索乙素含量測(cè)定項(xiàng)下，建立了延胡索乙素含量測(cè)定方法且根據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，本實(shí)驗(yàn)建立的延胡索乙素含量測(cè)定方法操作簡(jiǎn)便快速，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，有效成分分離較好，其他成分無(wú)干擾，可作為該制劑的含量控制指標(biāo)，能較好地控制本品的質(zhì)量。

3.2 流動(dòng)相的選擇

選擇《中國(guó)藥典》2010年版一部延胡索乙素含量測(cè)定中流動(dòng)相[1]及文獻(xiàn)[2-5]報(bào)道的流動(dòng)相進(jìn)行試驗(yàn)，最終確定甲醇一0.1%磷酸(三乙胺調(diào)pH值＝6.0) (62:38)為流動(dòng)相，在此流動(dòng)相條件下，樣品中的延胡索乙素峰形好，與雜質(zhì)峰分離度較好，保留時(shí)間適合。

3.3 流動(dòng)相pＨ的選擇

為使延胡索乙素達(dá)到較好的分離效果，對(duì)不同的pＨ值如5.5、5.8、6.0、6.3、6.5等進(jìn)行比較，最后通過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證確定pＨ值6.0峰形好，出峰時(shí)間較為理想，與雜質(zhì)峰分離度較好，保留時(shí)間適合。

3.4 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

用甲醇溶解適量的延胡索乙素對(duì)照品作為供試液，用紫外分光光度法進(jìn)行200~400 nm范圍掃描，在282 nm處有最大吸收峰，干擾少且穩(wěn)定，與《中國(guó)藥典》2010年版[1]記載其最大吸收峰在280 nm處相近，所以選擇282nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

3.5 佛手、延胡索乙素與石菖蒲的鑒別

樣品中佛手、延胡索乙素、石菖蒲的鑒別，經(jīng)空白制劑和三批樣品的試驗(yàn)，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置顯相同顏色的斑點(diǎn)；但在缺佛手、延胡索乙素、石菖蒲藥材的陰性樣品色譜中，在與供試品、對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，沒(méi)有顯相同顏色的斑點(diǎn)，故用本方法鑒別樣品中的佛手、延胡索乙素、石菖蒲有很好的專(zhuān)屬性和重現(xiàn)性，陰性無(wú)干擾。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:130.

[2] 梁國(guó)華,吳福彬. HPLC測(cè)定克痹骨泰膠囊中延胡索乙素含量[J].中國(guó)藥師,2012,15(3):427-428.

[3] 馮益明.HPLC測(cè)定復(fù)方棗仁膠囊中延胡索乙素含量[J].中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn),2010,11(3):214-216.

[4] 張其,王守英.HPLC測(cè)定舒筋消咽丸中延胡索乙素含量[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐,2008,22(1):44-45.

[5] 劉超英,劉丹, 韓建偉. HPLC測(cè)定創(chuàng)靈凝膠中延胡索乙素含量[J].藥物分析雜志,2009,29(8): 330-332.

STUDY OF QUALITY STANDARD FOR WEIDEKANG CAPSULE

*LUO Xiao-kui1，HU Wei-ming2，YANG Zhi-bin1

（1. The Central People's Hospital of Ji'an, Ji’an, Jiangxi 343000, China;2. Ji’an Pharmaceutical Companies, Ji’an, Jiangxi 343000, China）

: Toestablish HPLC method for measuring the content of the effective component-tetra hydropalmatine and TLC method for identifyingvar. sarcodactylis, tetrahydropalmatine andin Weidekang capsule.: The chromatographic column is Diamonsil C18(5 μm, 200 × 4.6 mm), mobile phase is optimized after reviewing references as 62 to 38 for methanol-0.1% phosphate (adjusted PH=6 by triethylamine), flow rate is 1.0 mL/min, detection wavelength is 254 nm.: The linear range of tetrahydropalmatine is 12-192ug, correlation coefficient R2is 0.9999, recovery rate is 99.3% (RSD 3.2). The developing solvents are N-hexane-ethyl acetate (3:1), N-hexane-methanol-ethyl acetate-concentrated aqueous ammonia (8:2:2:0.1), petroleum ether (60～90 ℃)-Ethyl acetate (3:1) forvar., tetrahydropalmatine and’s TLC identification in which silica gel 254 thin layer plates are used respectively.: The method is stable, accurate and reproducible well. The samples can display the spots with the same color as the reference standard chromatography in TLC identification. In a word, the HPLC can be used as the content measuring method and identification method for this capsule.

weidekang capsule; tetrahydropalmatine; HPLC; TLC

R921.2

A

10.3969/j.issn.1674-8085.2013.04.019

1674-8085(2013)04-0084-06

2013-03-03；

2013-06-27

*羅筱葵(1955-)，男，江西吉安人，主任藥師，主要從事醫(yī)院藥學(xué)研究(E-mail:luoxiaok000115@tom.com);

胡偉銘(1962-)，男，江西吉水人，副主任中藥師，主要從事生物制藥工程研究(E-mail:Huweimin@126.com);

楊志彬(1979-)，男，江西吉安人，主管藥師，主要從事醫(yī)院藥學(xué)研究(E-mail:Yangzw1979@163.com).