喙尾琵琶甲乙醇提取物急性毒性實(shí)驗研究

常 征，李洪潮，丁長春，劉 偉

（文山學(xué)院 生化系，云南 文山 663000）

喙尾琵琶甲（Blaps rynchopetera Fairmaire），是鞘翅目擬步甲科琵琶甲屬的昆蟲，［1］在彝族、壯族、苗族中已有很長的藥用歷史，它被廣泛用作抗菌消炎藥，以及治療心血管、治療類風(fēng)濕和腫瘤等疾病的藥物，它還具有一定的調(diào)節(jié)人體免疫系統(tǒng)的功能。據(jù)調(diào)查，在這些民族治療各種疑難病癥的處方中，80%以上都含有該昆蟲［2］。在云南民間特別是在少數(shù)民族中還常用于治療咳嗽、發(fā)燒、疔瘡、胃炎、腫瘤等疾?。?］。因此，它是一種極具利用價值和開發(fā)潛力的民族民間藥用昆蟲。但目前多集中于對該昆蟲的抗菌消炎、化學(xué)成分、生態(tài)特征等方面的研究，并未曾見到過在毒理學(xué)方面的研究，為此，筆者對喙尾琵琶甲提取物的急性毒性進(jìn)行了初步研究，為口服該藥用昆蟲的安全性提供了一定的藥理學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

R201D-II型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海申順實(shí)業(yè)有限公司）；SPS402F型雙杰電子天平（上海奧豪斯公司）。

1.2 試藥

喙尾琵琶甲購自文山市小西門藥材市場。

1.3 動物

昆明種小白鼠，4周齡，體質(zhì)量（20±2）g，購自昆明醫(yī)學(xué)院動物試驗中心，云南實(shí)驗動物許可證：SCXK（滇2011-0008）。動物按性別分組分籠飼養(yǎng)，喂食標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料，自由飲水和攝食。

2 方法

2.1 喙尾琵琶甲乙醇提取物的制備

喙尾琵琶甲1 kg用60%乙醇浸泡提取3次，將用紗布過濾后的提取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至膏狀，將膏狀物用蒸餾水配制成濃度為 6.25 g（生藥） /mL溶液，放在4 ℃的冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 半數(shù)致死量實(shí)驗

取昆明小白鼠40只，隨機(jī)分成4個組，每組10 只，雌雄各半，以喙尾琵琶甲乙醇提取物可供灌胃的最大混懸濃度（6.25 g 生藥/mL）為起始濃度，按組距 0.1 遞減，即喙尾琵琶甲乙醇提取物以6250，625，62.5，6.25 mg/mL的藥物濃度和小鼠灌胃可承受的最大體積0.4 mL/ 10 g 體重灌胃 1次。給藥前禁食不禁水過夜（12 h左右），給藥后常規(guī)飼養(yǎng)，觀察小白鼠在給藥后7 d內(nèi)的死亡數(shù)并記錄，7 d后全部動物脫頸處死。由于7 d內(nèi)小白鼠無1只死亡，無法計算半數(shù)致死量，所以進(jìn)行最大耐受量實(shí)驗［4-5］。

2.3 最大耐受量實(shí)驗

取昆明小白鼠20只，隨機(jī)分成2個組，每組10只，雌雄各半，給藥組以喙尾琵琶甲乙醇提取物可供灌胃的最大混懸濃度（每毫升含6.25 g生藥）和0.4 mL/10 g體重的最大灌胃體積進(jìn)行灌胃，灌胃前禁食不禁水過夜（12 h），之后1 d內(nèi)間隔6 h 2次給藥，間隔期間禁食不禁水，第2次給藥4 h后開始喂食，觀察7 d。空白對照組以等體積蒸餾水灌胃，方法同給藥組。

2.4 觀察指標(biāo)

本實(shí)驗的觀察指標(biāo)主要是小白鼠的死亡數(shù)、進(jìn)食量和體質(zhì)量，另外還輔以觀察小白鼠給藥前后的外觀形態(tài)、行為活動、精神狀態(tài)、分泌物和糞便形狀等。進(jìn)食量和體質(zhì)量的記錄都于每天早晨8點(diǎn)開始，其余輔助項的觀察于給藥當(dāng)天多次進(jìn)行記錄，第2天后每天的上下午各觀察1次，7 d后將小白鼠全部脫頸處死。

3 結(jié)果

3.1 半數(shù)致死量實(shí)驗

喙尾琵琶甲乙醇提取物按0.4 mL/10 g灌胃體積，以6250，625，62.5，6.25 mg/mL的濃度灌胃后，在7 d觀察時間內(nèi)未見一只小白鼠死亡；對其各組間進(jìn)行進(jìn)食量和體質(zhì)量比較也均顯示出無顯著性差異（ P＞ 0.05）；其輔助觀察項外觀形態(tài)、行為活動、精神狀態(tài)、飲食情況、分泌物和排泄物等均未見明顯異常。實(shí)驗結(jié)果表明，喙尾琵琶甲乙醇提取物對實(shí)驗小白鼠體質(zhì)量增長與進(jìn)食量無明顯影響（見表 1，表 2） 。

表1 喙尾琵琶甲乙醇提取物對小白鼠體質(zhì)量的影響（x±s） （單位：g）

表2 喙尾琵琶甲乙醇提取物對小白鼠進(jìn)食量的影響（x ± s） （單位：g）

3.2 最大耐受量實(shí)驗

在對小白鼠的死亡數(shù)的統(tǒng)計中，實(shí)驗小白鼠以喙尾琵琶甲乙醇提取物的最大混懸濃度6.25 g/mL和可承受的最大體積0.4 mL/10 g體重1 d間隔6 h 2次灌胃給藥后，連續(xù)觀察7 d，小白鼠無死亡情況出現(xiàn)。由于6.25 g/mL 醇提液已經(jīng)很粘稠，且該濃度已經(jīng)很大，可作為最大給藥濃度，故喙尾琵琶甲乙醇提取物對小鼠的最大耐受量（MTD）為500 g/kg；其次，在對小白鼠體質(zhì)量和進(jìn)食量的統(tǒng)計中，由表3和表4可知，除在給藥當(dāng)天，給藥組小白鼠與對照組小白鼠在體質(zhì)量和進(jìn)食量上略有下降外（但無顯著差異），在之后的6 d中又逐漸恢復(fù)正常，且與空白對照組比較無顯著性差異（ P＞0.05）；第三，在對輔助項的觀察中，無論是對照組還是給藥組，在給藥后的當(dāng)天大部分小白鼠出現(xiàn)自主活動減少、懶動、不活躍、有的甚至出現(xiàn)閉目、反應(yīng)有些遲鈍等現(xiàn)象，但無豎毛、抽搐、翻倒等異常情況，且上述癥狀從給藥第2天開始逐步恢復(fù)正常。

表3 喙尾琵琶甲乙醇提取物對最大耐受量實(shí)驗小白鼠體質(zhì)量的影響（ x±s） （單位：g）

表4 喙尾琵琶甲乙醇提取物對最大耐受量實(shí)驗小白鼠進(jìn)食量的影響（ x±s） （單位：g）

4 討論

喙尾琵琶甲在民間的使用方法很多，有直接活體口服的，有在火中燒熟后口服的，有單藥泡酒外用的，也有與其它藥材配伍后服用的等等。但在使用劑量上缺乏科學(xué)指導(dǎo)，故本文對該藥物的口服安全性提供科學(xué)依據(jù)，對指導(dǎo)臨床用藥，并進(jìn)一步為該藥的治療方法的規(guī)范化和標(biāo)準(zhǔn)化研究打下良好的基礎(chǔ)。本研究進(jìn)行了喙尾琵琶甲乙醇提取物的半數(shù)致死量實(shí)驗研究，喙尾琵琶甲乙醇提取物按0.4 mL/10 g灌胃體積，以 6250，625，62.5，6.25 mg/mL的濃度灌胃后，在7 d觀察時間內(nèi)未見一只小白鼠死亡，故無法計算出半致死劑量（LD50）；對其各組間進(jìn)行進(jìn)食量和體質(zhì)量比較也均顯示出無顯著性差異（ P＞0.05）；其輔助觀察項外觀形態(tài)、行為活動、精神狀態(tài)、飲食情況、分泌物和排泄物等均未見明顯異常。這些現(xiàn)象都說明了喙尾琵琶甲乙醇提取物的毒性很低，故進(jìn)行了最大耐受量研究。

在最大耐受量實(shí)驗中，實(shí)驗小白鼠以喙尾琵琶甲乙醇提取物的最大混懸濃度6.25 g/mL和可承受的最大體積0.4 mL/10 g 體重1 d間隔6 h 2次灌胃給藥后，連續(xù)觀察7 d，小白鼠無死亡情況出現(xiàn)。由于6.25 g/mL醇提液已經(jīng)很粘稠，且該濃度已經(jīng)很大，可作為最大給藥濃度，故喙尾琵琶甲乙醇提取物對小鼠的最大耐受量（MTD）為500 g/kg；且喙尾琵琶甲乙醇提取物對小白鼠體質(zhì)量和進(jìn)食量的影響與對照組比較均無顯著性差異（ P＞0.05），故可認(rèn)為喙尾琵琶甲乙醇提取物急性毒性較小，在常規(guī)劑量下服用是安全、可靠的。

［1］趙敏，陳曉鳴，孫龍，等.云南省喙尾琵琶甲分布及生態(tài)環(huán)境調(diào)查［J］.林業(yè)科學(xué)研究，2007（3）：356-362.

［2］林南英，劉為忠，李維莉，等.藥用昆蟲云南琵琶甲的化學(xué)成分研究［J］.中國民族民間醫(yī)藥雜志，2000（3）：162-164.

［3］李蕾，羅氚蕓，劉勇.云南琵琶甲抗菌活性成分研究［J］.中草藥，2001（3）：197-199.

［4］徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實(shí)驗方法學(xué)（第3版）［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：366.

［5］唐大軒，熊靜悅，梁婭君，等.川楝子對大鼠完全急性毒性作用研究［J］.時珍國醫(yī)國藥，2011（10）：2387.