• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    人參皂苷Rg1對小鼠腦缺血再灌注后腦組織損傷及Nrf2/HO-1途徑的影響*

    2013-10-24 06:29:27黃小平鄧常清張秋雁
    中國病理生理雜志 2013年11期
    關(guān)鍵詞:神經(jīng)細(xì)胞達(dá)拉皂苷

    吳 露, 黃小平, 鄧常清, 嚴(yán) 杰, 張秋雁

    (1湖南中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院心血管科,湖南 瀏陽 410300; 2湖南中醫(yī)藥大學(xué),湖南 長沙 410208)

    人參皂苷Rg1對小鼠腦缺血再灌注后腦組織損傷及Nrf2/HO-1途徑的影響*

    吳 露1, 黃小平2△, 鄧常清2, 嚴(yán) 杰2, 張秋雁2

    (1湖南中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院心血管科,湖南 瀏陽 410300;2湖南中醫(yī)藥大學(xué),湖南 長沙 410208)

    目的觀察人參皂苷Rg1對小鼠腦缺血再灌注后腦組織損傷的影響,并從核因子E2相關(guān)因子2(Nrf2)/血紅素加氧酶1(HO-1)信號通路研究其作用機(jī)制。方法C57BL/6小鼠隨機(jī)分組,連續(xù)給藥3 d,末次給藥1 h后,結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈造成腦缺血20 min,再灌注24 h。以具有抗氧化應(yīng)激損傷作用、治療缺血性腦血管病有效的藥物依達(dá)拉奉作為陽性對照藥。取腦組織行海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞病理學(xué)測定,RT-PCR法測定Nrf2和HO-1 mRNA表達(dá),Western bloting測定腦組織胞核、胞漿Nrf2和全細(xì)胞HO-1蛋白含量。結(jié)果(1)缺血再灌注24 h后,神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)病理性損傷,細(xì)胞存活率顯著降低。人參皂苷Rg1和依達(dá)拉奉可使神經(jīng)細(xì)胞損傷明顯減輕,細(xì)胞存活率顯著升高。(2)腦缺血再灌注24 h,腦組織Nrf2 mRNA和HO-1 mRNA表達(dá)增強(qiáng),同時腦組織胞核和胞漿中Nrf2蛋白含量增加,核轉(zhuǎn)位率升高,HO-1蛋白表達(dá)增強(qiáng)。人參皂苷Rg1和依達(dá)拉奉均能降低腦組織胞漿Nrf2蛋白含量,升高胞核Nrf2含量,使Nrf2核轉(zhuǎn)位率升高,并使腦組織HO-1 mRNA和蛋白表達(dá)顯著增加。依達(dá)拉奉的作用強(qiáng)于人參皂苷Rg1,但兩藥對腦組織Nrf2 mRNA表達(dá)無顯著影響。結(jié)論人參皂苷Rg1具有抗腦缺血再灌注損傷的作用,其機(jī)制可能與激活Nrf2/HO-1信號途徑、促進(jìn)Nrf2合成和核轉(zhuǎn)位、從而促進(jìn)下游抗氧化蛋白HO-1的表達(dá)有關(guān)。

    腦缺血; 再灌注損傷; 人參皂苷Rg1; 氧化性應(yīng)激; 核因子E2相關(guān)因子2; 血紅素加氧酶1

    Figure 1. Chemical structure of ginsenoside Rg1.

    圖1人參皂苷Rg1化學(xué)結(jié)構(gòu)圖

    氧化應(yīng)激損傷在腦缺血再灌注損傷中具有重要的意義[3]。腦缺血再灌注后,腦組織產(chǎn)生大量的自由基對神經(jīng)細(xì)胞具有損傷作用。抑制腦缺血后氧化應(yīng)激反應(yīng)是防治缺血性腦損傷的重要手段。近年來研究表明,核因子E2 相關(guān)因子2(nuclear factor E2-related factor 2, Nrf2)/血紅素加氧酶1(heme oxyge-nase 1,HO-1)信號途徑在抗氧化損傷中具有重要的作用[11]。因此,本文研究了三七的主要成分人參皂苷Rg1抗腦缺血再灌注后腦組織損傷的作用,并從Nrf2/HO-1途徑研究了其作用機(jī)制。

    材 料 和 方 法

    1材料

    1.1動物 SPF級雄性C57BL/6小鼠,體重18~22 g,由湖南維通利華實(shí)驗動物有限公司提供。動物合格證號為SCXK(湘)2009-0004。飼養(yǎng)于SPF級動物實(shí)驗室,濕度45%、室溫25 ℃的環(huán)境。

    1.2受試藥物 人參皂苷Rg1購自成都曼思特生物科技有限公司,純度≥98%,用時以5%羧甲基纖維素鈉配成混懸液備用。依達(dá)拉奉(3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮,3-methyl-1-phenyl-2-pyrazolin-5-one),南京先聲東元制藥有限公司生產(chǎn),規(guī)格10 mg/5 mL,以生理鹽水配成400 mg/L溶液。

    1.3試劑 全蛋白提取試劑盒KGP2100購自南京凱基生物科技發(fā)展有限公司;細(xì)胞核和細(xì)胞漿蛋白提取試劑盒、磷酸酶抑制劑復(fù)合物Ⅲ和改良型BCA蛋白質(zhì)定量檢測試劑盒購自上海生工生物工程股份有限公司;動物組織總RNA提取試劑盒購自天根生物試劑有限公司;Reverse Transcription System逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購自Promega;兔抗小鼠β-actin 多克隆抗體和兔抗小鼠HO-1多克隆抗體和兔抗小鼠Nrf2多克隆抗體購自Santa Cruz,過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔IgG購自北京中杉生物技術(shù)有限公司。

    2方法

    在傳統(tǒng)教學(xué)中,教師在備課時更多的考慮是怎怎樣才能講的到位,怎樣才能讓學(xué)生聽明白聽得懂。而合作學(xué)習(xí)的理論認(rèn)為,教師備課時應(yīng)該更多的考慮如何使學(xué)生更加主動的積極的參與學(xué)習(xí),使學(xué)生學(xué)得更多更好。合作學(xué)習(xí)的實(shí)踐成果是由學(xué)習(xí)目標(biāo)和學(xué)習(xí)內(nèi)容的特點(diǎn)決定的。所以,教師精心選擇適用于合作學(xué)習(xí)的學(xué)習(xí)內(nèi)容就顯得尤為重要。要使合作學(xué)習(xí)進(jìn)行得有價值有成果,教師首先就應(yīng)該要吃透教材,在深入理解教材的基礎(chǔ)上制定出具體的、適合學(xué)生的年齡特點(diǎn)和認(rèn)知結(jié)構(gòu)的學(xué)習(xí)內(nèi)容和學(xué)習(xí)任務(wù)。

    2.1腦缺血模型制作[4]乙醚麻醉小鼠,仰臥位固定,在頸部正中做1 cm切口,暴露頸總動脈及伴行的迷走神經(jīng),分離并夾閉雙側(cè)頸總動脈造成腦缺血,20 min后恢復(fù)血流再灌注24 h。假手術(shù)組也同樣進(jìn)行手術(shù),但不進(jìn)行腦缺血和再灌注。再灌注24 h后,將小鼠迅速斷頭,取出腦組織置于冰上,去除小腦及腦干后做相應(yīng)指標(biāo)檢測。

    2.2動物分組和給藥方法 將小鼠隨機(jī)分為4組:假手術(shù)組、腦缺血再灌注組(模型組)、人參皂苷Rg1(50 mg/kg)+腦缺血再灌注組(人參皂Rg1組)和依達(dá)拉奉(4 mg/kg)+腦缺血再灌注組(依達(dá)拉奉組)。依達(dá)拉奉組腹腔注射給藥,每天給藥2次,人參皂苷Rg1組灌胃給藥,假手術(shù)組和模型組灌胃給予0.5%羧甲基纖維素鈉,給藥體積均為10 L/kg,每天給藥1次。連續(xù)3 d,第3天末給藥1 h后造模。再灌注期間同前給藥。

    2.3海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞存活率測定 取視交叉后2 cm腦組織,4%多聚甲醛固定,常規(guī)HE染色,計數(shù)海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞。正常神經(jīng)細(xì)胞胞膜完整、核仁清晰,蘇木素染色均勻。損傷神經(jīng)細(xì)胞胞核固縮或溶解,胞漿出現(xiàn)“嗜伊紅”染色或正常細(xì)胞結(jié)構(gòu)消失甚至出現(xiàn)空泡。每張切片在×400視野下取海馬CA1區(qū)5個視野進(jìn)行測定,計算正常細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)的百分比,即得神經(jīng)細(xì)胞存活率。取5個視野平均值進(jìn)行統(tǒng)計分析。

    2.4RT-PCR法測定腦組織Nrf2和HO-1 mRNA表達(dá) 取右腦視交叉前組織,以Trizol法提取腦組織總RNA,測定A260/A280為1.8~2.0,純度>90%。逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,以此為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。Nrf2引物:上游序列5’-ATCAAAAAGCCCCATTCACA-3’,下游序列5’-CCGCCTTTTCAGTAGATGGA-3’,擴(kuò)增片段為364 bp。HO-1引物:上游序列5’-AGCCCCACCAAGTTCAAACA-3’,下游序列5’-TGCCAACAGGAAGCTGAGAG-3’,擴(kuò)增片段321 bp。β-actin引物:上游序列5’-GAGACCTTCAACACCCCAGC-3’,下游序列5’-CCACAGGATTCCATACCCAA-3’,擴(kuò)增片段446 bp。按PCR試劑盒操作,反應(yīng)體系 20 μL,擴(kuò)增條件為:95 ℃ 2 min,94 ℃ 45 s,60 ℃ 30 s,72 ℃ 2 min,35個循環(huán),72 ℃ 10 min。取擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳,凝膠成像系統(tǒng)對目的條帶進(jìn)行掃描,Image-Pro Plus圖像分析軟件測定目的條帶的相對吸光度(A),以目的基因條帶的A/Aβ-actin作為目的基因表達(dá)的相對強(qiáng)度,以相對表達(dá)強(qiáng)度進(jìn)行分析。

    2.5Western bloting測定腦組織Nrf2和HO-1蛋白表達(dá) 取大腦組織,按說明書分別進(jìn)行全細(xì)胞、胞核和胞漿蛋白的提取,以改良型BCA蛋白質(zhì)定量法檢測蛋白質(zhì)含量,確定全細(xì)胞蛋白質(zhì)上樣總量110 μg,細(xì)胞漿蛋白質(zhì)上樣總量110 μg,細(xì)胞核蛋白質(zhì)上樣總量50 μg。取蛋白樣品與1/3量的4×SDS凝膠上樣緩沖液混合使上樣總體積為20 μL,煮沸變性5~10 min。SDS-PAGE 分離2~3 h,300 mA恒流1 h濕轉(zhuǎn)至PVDF膜上,用含5%脫脂奶粉的TBS溶液封閉3 h,TBST溶液洗3次,每次10 min。再分別與兔抗小鼠β-actin抗體(1∶1 000)、兔抗小鼠Nrf2抗體(1∶500)和兔抗小鼠HO-1抗體(1∶500)溶液3 mL混合,4 ℃靜置過夜,TBST溶液洗3次,每次15 min。然后與辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的Ⅱ抗(1∶1 000)5~8 mL室溫孵育1 h,TBST洗膜3次。取增強(qiáng)型HRP-DAB底物顯色試劑盒進(jìn)行顯影,染色為藍(lán)紫色。將PVDF膜掃描,Image Pro-Plus 6.0圖像分析軟件測定目的條帶的累積吸光度(integrated absorbance,IA), 以總蛋白中的β-actin為內(nèi)參照,以目的條帶IA值與總蛋白β-actinIA值的比值作為該目的蛋白的相對表達(dá)量。

    3統(tǒng)計學(xué)處理

    數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示,運(yùn)用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件分析。先將各組數(shù)據(jù)進(jìn)行方差齊性檢驗,多組間比較采用單因素方差分析,方差齊者用LSD檢驗。方差不齊時先將數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換后使之方差齊,再行分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    結(jié) 果

    1人參皂苷Rg1對腦組織神經(jīng)細(xì)胞損傷的影響

    再灌注24 h,假手術(shù)組幾乎未見神經(jīng)細(xì)胞損傷,腦組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)層次清楚,形態(tài)正常。模型組腦組織細(xì)胞排列紊亂,細(xì)胞腫脹明顯,部分細(xì)胞出現(xiàn)嗜酸性變性或核固縮改變,細(xì)胞存活率顯著低于假手術(shù)組(P<0.01)。與模型組比較,各藥物組神經(jīng)細(xì)胞損傷均減輕,細(xì)胞存活率均顯著升高(P<0.01)。人參皂苷Rg1 組與依達(dá)拉奉組比較無顯著差異(均P>0.05),見圖2、表1。

    Figure 2. Effect of ginsenoside Rg1 on brain nerve cell injury in hippocampal CA1 region (HE staining, ×400).1: sham; 2: cerebral I/R; 3: ginsenoside Rg1+cerebral I/R; 4: edaravone+cerebral I/R.

    圖2人參皂苷Rg1對腦組織海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞損傷的影響

    表1人參皂苷Rg1對海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞存活率的影響

    Table 1. Effect of ginsenoside Rg1 on survival rate of nerve cells in hippocampal CA1 region (%.Mean±SD.n=8)

    GroupSurvivalrateofnervecellsSham92.0±3.7CerebralI/R47.1±8.3**GinsenosideRg1+cerebralI/R77.0±6.3△△Edaravone+cerebralI/R84.8±5.6△△

    **P<0.01vssham;△△P<0.01vscerebral I/R.

    2人參皂苷Rg1對腦組織Nrf2、HO-1mRNA表達(dá)的影響

    與假手術(shù)組比較,模型組、人參皂苷Rg1組和依達(dá)拉奉組Nrf2 mRNA表達(dá)均顯著升高(P<0.05或P<0.01)。與模型組比較,各給藥組Nrf2 mRNA表達(dá)無顯著變化(均P>0.05),見圖3、表2。

    與假手術(shù)組比較,模型組、人參皂苷Rg1組和依達(dá)拉奉組HO-1 mRNA表達(dá)均顯著升高(P<0.05或P<0.01)。與模型組比較,人參皂苷Rg1組和依達(dá)拉奉組HO-1 mRNA的表達(dá)均顯著升高(P<0.01)。依達(dá)拉奉組HO-1 mRNA的表達(dá)顯著高于人參皂苷Rg1組(P<0.05),見圖3、表2。

    Figure 3. Effects of ginsenoside Rg1 on the expression of Nrf2 and HO-1 mRNA in brain tissues.1: Sham;2: cerebral I/R; 3: ginsenoside Rg1+cerebral I/R;4: edaravone+cerebral I/R.

    圖3人參皂苷Rg1對腦組織Nrf2、HO-1mRNA表達(dá)的影響

    表2 人參皂苷Rg1對腦組織Nrf2和HO-1 mRNA表達(dá)的影響

    ◇P<0.05,◇◇P<0.01vssham;△△P<0.01vscerebral I/R;▲P<0.05vsginsenoside Rg1+cerebral I/R.

    3人參皂苷Rg1對腦組織Nrf2和HO-1蛋白表達(dá)的影響

    與假手術(shù)組比較,模型組胞漿和胞核Nrf2蛋白表達(dá)顯著升高(P<0.01),Nrf2核轉(zhuǎn)位率顯著增加(P<0.01)。與模型組比較,人參皂苷Rg1組及依達(dá)拉奉組胞漿Nrf2蛋白表達(dá)量顯著降低(P<0.05或P<0.01),胞核Nrf2蛋白表達(dá)量顯著升高(P<0.01),Nrf2核轉(zhuǎn)位率顯著增加(P<0.01)。依達(dá)拉奉組胞漿Nrf2蛋白含量顯著低于人參皂苷Rg1組(P<0.05),胞核Nrf2蛋白含量顯著高于人參皂苷Rg1組(P<0.05),Nrf2核轉(zhuǎn)位率顯著高于人參皂苷Rg1組(P<0.05),見圖4、表3。

    與假手術(shù)組比較,模型組HO-1蛋白表達(dá)量顯著升高(P<0.01)。與模型組比較,人參皂苷Rg1組及依達(dá)拉奉組HO-1蛋白表達(dá)量均顯著升高(P<0.05或P<0.01)。依達(dá)拉奉組HO-1蛋白表達(dá)量顯著高于人參皂苷Rg1組(P<0.05),見圖4、表3。

    Figure 4. Effects of ginsenoside Rg1 on the protein expression of Nrf2 and HO-1 in brain tissues.1: sham; 2: cerebral I/R; 3: ginsenoside Rg1+cerebral I/R;4: edaravone+cerebral I/R.

    圖4人參皂苷Rg1對腦組織Nrf2和HO-1蛋白表達(dá)的影響

    討 論

    建立穩(wěn)定的動物模型對研究腦缺血再灌注損傷及保護(hù)機(jī)制有著重要的意義。Yang等[4]經(jīng)過對比研究后發(fā)現(xiàn),C57BL/6 小鼠由于其先天椎動脈后交通支(Willis環(huán))發(fā)育不全,是非常好的研究全腦缺血的動物模型,只要夾閉雙側(cè)頸總動脈即可造成全腦缺血。

    表3 人參皂苷Rg1對腦組織Nrf2和HO-1 蛋白表達(dá)的影響

    ◇◇P<0.01vssham;△P<0.05,△△P<0.01vscerebral I/R;▲P<0.05vsginsenoside Rg1+cerebral I/R.

    腦缺血時,特別是再灌注時,自由基大量產(chǎn)生,導(dǎo)致腦組織氧化損傷。氧自由基多攻擊不飽和脂肪酸,引發(fā)脂質(zhì)過氧化反應(yīng),導(dǎo)致細(xì)胞損傷;NO也是一種自由基,生理量的NO對腦具有保護(hù)作用,而高濃度的NO可抑制腦組織能量代謝,引起DNA損傷,并抑制DNA的合成和修復(fù),誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[5]。正常情況下,體內(nèi)還存在天然的自由基清除系統(tǒng),如谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)等。腦缺血后由于自由基生成增加,體內(nèi)抗氧化物質(zhì)被消耗,使SOD、GSH-Px、GSH 等顯著下降[6]。

    本研究表明,腦缺血再灌注24 h后,海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞發(fā)生水腫、變性和死亡,存活率降低。人參皂苷Rg1和依達(dá)拉奉均可抑制海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞存活率的降低,提示人參皂苷Rg1可抑制腦缺血再灌注后神經(jīng)細(xì)胞的損傷。

    Nrf2屬于亮氨酸拉鏈家族的調(diào)節(jié)抗氧化應(yīng)激反應(yīng)的重要轉(zhuǎn)錄因子,Kelch樣ECH相關(guān)蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)是其特異性受體。正常情況下,在胞漿內(nèi)Keap1與Nrf2形成復(fù)合物以抑制Nrf2 的活性。在氧化應(yīng)激等情況下,Keap1與Nrf2 解離,Nrf2發(fā)生核轉(zhuǎn)位進(jìn)入細(xì)胞核,與抗氧化反應(yīng)元件(antioxidant response elements,ARE)結(jié)合,啟動ARE 調(diào)控的第Ⅱ相解毒酶及抗氧化酶基因表達(dá),增強(qiáng)細(xì)胞對氧化應(yīng)激和親核化合物的抗性[7]。ARE 調(diào)控的抗氧化蛋白有HO-1、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(glutathioneS-transferase,GST)、GSH等,這些酶能夠保護(hù)機(jī)體免受活性氧(reactive oxygen species, ROS)的侵害。在動物實(shí)驗、細(xì)胞體外實(shí)驗和Nrf2基因敲除實(shí)驗均已證實(shí),Nrf2基因剔除小鼠的腦缺血損傷程度加重[8-9], 激活Keap1/Nrf2/ARE 通路,促進(jìn)HO-1 等蛋白的表達(dá),減輕腦缺血性損傷[10-11]。

    HO屬微粒體酶系,是血紅素分解代謝的限速酶。HO有3種同工酶,分別是HO-1、HO-2和HO-3。其中HO-1為誘導(dǎo)型酶,參與血紅素代謝,在腦內(nèi)廣泛表達(dá),并在短暫腦缺血時表達(dá)升高[12]。用HO-1誘導(dǎo)劑或轉(zhuǎn)基因技術(shù)使組織中HO-1表達(dá)增加可增強(qiáng)組織的抗氧化損傷能力,抑制炎癥反應(yīng),減輕缺血/再灌注損傷[13]。研究顯示,HO-1表達(dá)上調(diào)增加神經(jīng)元對氧化應(yīng)激的耐受性[14]。

    本研究表明,腦缺血再灌注后,腦組織Nrf2 mRNA和HO-1 mRNA表達(dá)增強(qiáng),同時胞核和胞漿中Nrf2蛋白含量、核轉(zhuǎn)位率增加,HO-1蛋白表達(dá)增強(qiáng),表明腦缺血后,為適應(yīng)缺血缺氧等應(yīng)激刺激,腦組織Nrf2 mRNA和蛋白表達(dá)增加,激活Nrf2/HO-1途徑,Nrf2與Keap1解離,前者發(fā)生核轉(zhuǎn)位進(jìn)入胞核,與ARE 結(jié)合,啟動了下游抗氧化蛋白HO-1等的表達(dá),使HO-1蛋白合成增加,從而對抗缺血缺氧導(dǎo)致的腦組織損傷,這是機(jī)體產(chǎn)生的一種保護(hù)性反應(yīng)。人參皂苷Rg1和依達(dá)拉奉均能使胞漿Nrf2蛋白含量降低而胞核含量升高,Nrf2核轉(zhuǎn)位率增加,HO-1表達(dá)增加。但各給藥組腦組織Nrf2 mRNA表達(dá)未見明顯增強(qiáng),表明各藥物抗缺血性腦損傷的作用與促進(jìn)Nrf2蛋白的核轉(zhuǎn)位有關(guān),即人參皂苷Rg1和依達(dá)拉奉可進(jìn)一步激活Nrf2/ARE信號途徑,促進(jìn)Nrf2蛋白的合成和核轉(zhuǎn)位,從而促進(jìn)了抗氧化物質(zhì)HO-1 mRNA表達(dá)及蛋白合成,發(fā)揮抗氧化損傷作用。而依達(dá)拉奉對Nrf2/ARE信號途徑的激活作用強(qiáng)于人參皂苷Rg1。

    [1] Li H, Deng CQ, Chen BY, et al. Total saponins ofPanaxNotoginsengmodulate the expression of caspases and atte-nuate apoptosis in rats following focal cerebral ischemia-reperfusion[J]. J Ethnopharmacol, 2009,121(3): 412-418

    [2] 唐映紅, 黃小平, 譚 華, 等. 三七總皂苷對腦缺血再灌注后神經(jīng)元凋亡及凋亡線粒體途徑c-Jun氨基末端激酶表達(dá)的影響[J]. 中國實(shí)驗方劑學(xué)雜志, 2010, 16 (16): 129-132.

    [3] Rodrigo J, Fernandez AP, Serrano J, et al. The role of free radicals in cerebral hypoxia and ischemia[J]. Free Radic Biol Med, 2005, 39(1): 26-50.

    [4] Yang G, Kitagawa K, Matsushita K, et al. C57BL/6 strain is most susceptible to cerebral ischemia following bilateral common carotid occlusion among seven mouse strains:selective neuronal death in the murine transient forebrain ischemia[J]. Brain Res, 1997, 752(1-2): 209-218.

    [5] 陳慎仁,陳林興,陳少如. 誘導(dǎo)型一氧化氮合酶與疾病[J]. 中國病理生理雜志,2000, 16(2): 179-183.

    [6] Nishi T, Maier CM, Hayashi T, et al. Superoxide dismutase 1 overexpression reduces MCP-1 and MIP-1 alpha expression after transient focal cerebral ischemia[J]. J Cereb Blood Flow Metab, 2005, 25(10): 1312-1324.

    [7] Motohashi H, Yamamoto M. Nrf2-Keap1 defines a physiologically important stress response mechanism[J]. Trends Mol Med, 2004, 10(11): 549-557.

    [8] Shih AY, Li P, Murphy TH. A small-molecule-inducible Nrf2-mediated antioxidant response provides effective prophylanxis against cerebral ischemiainvivo[J]. J Neurosci, 2005, 25(44): 10321-10335.

    [9] Shah ZA, Li RC, Thimmulappa RK, et al. Role of reactive oxygen species in modulation of Nrf2 following ischemic reperfusion injury[J]. Neuroscience, 2007, 147(1): 53-59.

    [10] Yang C, Zhang X, Fan H, et al. Curcumin upregulates transcription factor NRF2, HO-1 espression and protects rat brains against focal ischemia[J]. Brain Res, 2009, 1282: 133-141.

    [11] Son TG, Camandola S, Arumugam TV, et al. Plumbagin, a novel Nrf2/ARE activator, protects against cerebral ischemia[J]. J Neurochem, 2010, 112(5): 1316-1326.

    [12] Schipper HM, Song W, Zukor H, et al. Heme oxygenase-I and nuerodegeneration: expanding frontiers of engagement [J]. J Neurochem, 2009,110(2): 469-485.

    [13] Li Volti G, Sorrenti V, Murabito P, et al. Pharmacological induction of heme oxygenase-1 inhibits iNOS and oxidative stress in renal ischemia-reperfusion injury [J]. Transplant Proc, 2007, 39(10): 2986-2991.

    [14] Li Q, Li J, Zhang L, et al. Preconditioning with hyperbaric oxygen induces tolerance against oxidative injury via increased expression of heme oxygenase-1 in primary cultured spinal cord neurons[J]. Life Sci, 2007, 80(12): 1087-1093.

    撤稿聲明

    因署名爭議,作者提出撤銷發(fā)表在本刊2005年第9期的2篇文章,即:

    急性心肌梗死后輔助性T細(xì)胞功能失衡的意義[J]. 中國病理生理雜志, 2005, 21(9):1691-1695.

    急性心肌梗死大鼠淋巴細(xì)胞體外增殖及殺傷效應(yīng)的觀察[J]. 中國病理生理雜志, 2005, 21(9):1848-1850.

    特此聲明。

    《中國病理生理雜志》編輯部

    2013年11月1日

    EffectsofginsenosideRg1ofPanaxnotoginsengonbraintissueinjuryandNrf2/HO-1signalpathwayaftercerebralischemia/reperfusioninmice

    WU Lu1, HUANG Xiao-ping2, DENG Chang-qing2, YAN Jie2, ZHANG Qiu-yan2

    (1DepartmentofCardiology,theSecondAffiliatedHospitalofIntegratedTraditionalandWesternMedicine,HunanUniversityofChineseMedicine,Liuyang410300,China;2HunanUniversityofChineseMedicine,Changsha410208,China.E-mail:jialeliu@hotmail.com)

    AIM: To observe the effects of ginsenoside Rg1 ofPanaxnotoginsengon brain tissue injury after mouse cerebral ischemia/reperfusion(I/R), and to explore the mechanisms involving nuclear factor E2-related factor 2 (Nrf2)/heme oxygenase 1 (HO-1) signal pathway.METHODSC57BL/6 mice were randomly divided into sham group, cerebral I/R group, ginsenoside Rg1+cerebral I/R group and edaravone+cerebral I/R group. Ginsenoside Rg1 was successively administered for 3 d. One hour after final administration, bilateral common carotid arteries were ligated to induce brain tissue injury for 20 min, and then reperfusion for 24 h. Edaravone, a drug for anti-oxidative stress injury in the treatment of ischemic cerebro-vascular disease, was used as a positive control. The brain tissues were obtained to determine the neural cellular pathology in hippocampal CA1 region. The mRNA expression of Nrf2 and HO-1 was detected by RT-PCR. The protein levels of Nrf2 in the nucleus and cytoplasm and HO-1 in the whole cells in the brain tissues were measured by Western blotting.RESULTSAfter ischemia/reperfusion for 24 h, the pathological injury in the neural cells was obvious, and the cell survival rate decreased. Ginsenoside Rg1 and edaravone attenuated the neural cell injury, and significantly increased the cell survival rate. After ischemia/reperfusion for 24 h, the mRNA expression of Nrf2 and HO-1 significantly increased in the brain tissues. The protein levels of Nrf2 in the nucleus and cytoplasm in the brain tissues were increased, the nuclear translocaition rate and the protein expression of HO-1 also increased. Ginsenoside Rg1 and edaravone both decreased the protein levels of Nrf2 in the cytoplasm of the brain tissues, increased that in the nucleus, and also increased Nrf2 nuclear translocation rate and the protein expression of HO-1. The effect of edaravone was higher than that of ginsenoside Rg1, but they had no significant effect on the mRNA expression of Nrf2 in the brain tissues.CONCLUSIONGinsenoside Rg1 has the effect of anti-brain tissue injury on cerebral ischemia/reperfusion. The mechanisms may be related to activating the Nrf2/HO-1 signal pathway, promoting Nrf2 synthesis and nuclear translocation, thus promoting the expression of downstream antioxidant protein HO-1.

    Brain ischemia; Reperfusion injury; Ginsenoside Rg1; Oxidative stress; Nuclear factor E2-related factor 2; Heme oxygenase 1

    R285.5

    A

    10.3969/j.issn.1000- 4718.2013.11.027

    1000- 4718(2013)11- 2066- 06

    2013- 06- 18

    2013- 09- 09

    國家自然科學(xué)基金資助項目(No. 81102557);教育部高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項科研基金資助項目(No. 20104323110001);湖南省高校創(chuàng)新平臺開放基金資助項目(No. 11K050);湖南省中醫(yī)藥管理局重點(diǎn)項目(No.201301);湖南省教育廳項目(No. 11C0963);湖南省高??萍紕?chuàng)新團(tuán)隊支持計劃項目

    △通訊作者Tel: 0731-88458201; E-mail: jialeliu@hotmail.com

    猜你喜歡
    神經(jīng)細(xì)胞達(dá)拉皂苷
    熊果酸減輕Aβ25-35誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡
    中成藥(2021年5期)2021-07-21 08:39:04
    HPLC-MS/MS法同時測定三七花總皂苷中2種成分
    中成藥(2018年9期)2018-10-09 07:19:04
    HPLC法測定大鼠皮膚中三七皂苷R1和人參皂苷Rb1
    中成藥(2017年9期)2017-12-19 13:34:40
    十天記錄達(dá)拉維佳能EOS 5DS印度行攝
    HPLC法同時測定熟三七散中13種皂苷
    中成藥(2017年6期)2017-06-13 07:30:34
    PCI 術(shù)后心肌缺血再灌注損傷給予依達(dá)拉奉的效果評價
    操控神經(jīng)細(xì)胞“零件”可抹去記憶
    達(dá)沙替尼聯(lián)合氟達(dá)拉濱對慢粒K562細(xì)胞的抑制作用研究
    高效液相色譜梯度洗脫法同時測定三七總皂苷中人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1和三七皂苷R1含量
    Hoechst33342/PI雙染法和TUNEL染色技術(shù)檢測神經(jīng)細(xì)胞凋亡的對比研究
    国产男女内射视频| 男男h啪啪无遮挡| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 久久99热这里只频精品6学生| 欧美日韩亚洲高清精品| 黄色视频不卡| 高清av免费在线| 人妻 亚洲 视频| 亚洲精品国产一区二区精华液| 老熟女久久久| 操出白浆在线播放| 欧美精品高潮呻吟av久久| 亚洲欧美激情在线| 叶爱在线成人免费视频播放| 岛国在线观看网站| 国产精品 国内视频| 12—13女人毛片做爰片一| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 欧美黄色片欧美黄色片| 妹子高潮喷水视频| 丁香六月欧美| 亚洲天堂av无毛| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 高清在线国产一区| videosex国产| 国产精品久久久久久精品古装| 中文字幕人妻熟女乱码| 欧美在线一区亚洲| 啪啪无遮挡十八禁网站| 午夜福利在线观看吧| 一进一出好大好爽视频| 国产av国产精品国产| 丝袜人妻中文字幕| 成年人免费黄色播放视频| 欧美日韩黄片免| 91老司机精品| 国产精品偷伦视频观看了| 一级,二级,三级黄色视频| 亚洲全国av大片| 日本av手机在线免费观看| 国产成人精品无人区| 少妇精品久久久久久久| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 亚洲三区欧美一区| 91麻豆av在线| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产精品.久久久| 一级a爱视频在线免费观看| 人人澡人人妻人| 后天国语完整版免费观看| 午夜福利视频在线观看免费| 色播在线永久视频| 免费人妻精品一区二区三区视频| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲五月婷婷丁香| 深夜精品福利| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 久久久国产成人免费| 久久中文字幕人妻熟女| 国产真人三级小视频在线观看| 黄色 视频免费看| 无限看片的www在线观看| av片东京热男人的天堂| 久久免费观看电影| 欧美黑人欧美精品刺激| 丝袜在线中文字幕| 正在播放国产对白刺激| 中亚洲国语对白在线视频| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 午夜福利一区二区在线看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 免费高清在线观看日韩| 俄罗斯特黄特色一大片| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产不卡av网站在线观看| 蜜桃在线观看..| 国产一区有黄有色的免费视频| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 另类精品久久| 男女之事视频高清在线观看| 欧美中文综合在线视频| 两性夫妻黄色片| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 中文亚洲av片在线观看爽 | 国产高清视频在线播放一区| 欧美乱码精品一区二区三区| 正在播放国产对白刺激| 首页视频小说图片口味搜索| 麻豆国产av国片精品| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 欧美精品啪啪一区二区三区| 天天添夜夜摸| 手机成人av网站| 黄片播放在线免费| 香蕉国产在线看| 自线自在国产av| 中文字幕高清在线视频| 国产亚洲欧美精品永久| 欧美精品一区二区大全| 精品视频人人做人人爽| 亚洲成人免费电影在线观看| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 麻豆国产av国片精品| 女性生殖器流出的白浆| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 日本av手机在线免费观看| 十八禁人妻一区二区| 日本a在线网址| 国产黄频视频在线观看| 黄色视频不卡| 精品一品国产午夜福利视频| 动漫黄色视频在线观看| av不卡在线播放| 亚洲avbb在线观看| 在线观看免费日韩欧美大片| 中文字幕人妻丝袜制服| 两个人免费观看高清视频| 他把我摸到了高潮在线观看 | 日韩视频在线欧美| 麻豆成人av在线观看| 亚洲av成人一区二区三| 又大又爽又粗| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 国产午夜精品久久久久久| 女性被躁到高潮视频| 欧美精品av麻豆av| 中文欧美无线码| 国产一区二区三区综合在线观看| 丝袜在线中文字幕| 亚洲成人手机| 麻豆国产av国片精品| 性色av乱码一区二区三区2| av在线播放免费不卡| 男女无遮挡免费网站观看| 一本久久精品| 黄片播放在线免费| 2018国产大陆天天弄谢| 国产熟女午夜一区二区三区| 中文字幕人妻丝袜制服| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 国产精品久久久av美女十八| 亚洲熟女毛片儿| 亚洲色图综合在线观看| 精品第一国产精品| 三级毛片av免费| 国产国语露脸激情在线看| 国产不卡一卡二| 日韩中文字幕欧美一区二区| 不卡av一区二区三区| 欧美精品av麻豆av| 99热网站在线观看| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 欧美黄色片欧美黄色片| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 手机成人av网站| 91精品国产国语对白视频| 欧美中文综合在线视频| 无人区码免费观看不卡 | 久久免费观看电影| 午夜福利在线免费观看网站| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 欧美日韩黄片免| 国产1区2区3区精品| 国产高清videossex| 性少妇av在线| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 色视频在线一区二区三区| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 高潮久久久久久久久久久不卡| 中文字幕最新亚洲高清| 高清黄色对白视频在线免费看| 成在线人永久免费视频| 亚洲精品粉嫩美女一区| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 人妻一区二区av| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 一级黄色大片毛片| 亚洲国产欧美网| 国精品久久久久久国模美| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲精品久久午夜乱码| 人人澡人人妻人| 国产在线精品亚洲第一网站| 精品国产乱码久久久久久小说| 欧美激情极品国产一区二区三区| 国产99久久九九免费精品| 成人三级做爰电影| 夜夜夜夜夜久久久久| 免费看十八禁软件| 最近最新免费中文字幕在线| 叶爱在线成人免费视频播放| 国产不卡av网站在线观看| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| av天堂在线播放| 久久久久久久国产电影| 9色porny在线观看| 国产精品欧美亚洲77777| 露出奶头的视频| 国产一卡二卡三卡精品| 在线观看免费视频网站a站| 嫩草影视91久久| 少妇 在线观看| 麻豆乱淫一区二区| 又紧又爽又黄一区二区| 99精品在免费线老司机午夜| 精品高清国产在线一区| 欧美激情久久久久久爽电影 | 狂野欧美激情性xxxx| 国产熟女午夜一区二区三区| 极品人妻少妇av视频| 精品熟女少妇八av免费久了| 亚洲熟女精品中文字幕| 中文字幕人妻熟女乱码| 午夜福利在线观看吧| 国产福利在线免费观看视频| 51午夜福利影视在线观看| 十八禁人妻一区二区| 国产国语露脸激情在线看| 亚洲成国产人片在线观看| av超薄肉色丝袜交足视频| 久久99一区二区三区| 啦啦啦 在线观看视频| 人妻一区二区av| 久久狼人影院| 午夜福利乱码中文字幕| 韩国精品一区二区三区| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 咕卡用的链子| 一本大道久久a久久精品| 中文亚洲av片在线观看爽 | 女警被强在线播放| 中文字幕人妻熟女乱码| 最新的欧美精品一区二区| 精品免费久久久久久久清纯 | 丁香六月天网| 成人特级黄色片久久久久久久 | 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 91大片在线观看| 亚洲精品久久午夜乱码| 一级毛片女人18水好多| 99九九在线精品视频| 亚洲综合色网址| 日韩中文字幕视频在线看片| 中文字幕色久视频| 亚洲人成伊人成综合网2020| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 亚洲七黄色美女视频| 香蕉丝袜av| 亚洲熟妇熟女久久| 精品少妇黑人巨大在线播放| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 亚洲成人免费av在线播放| 欧美成狂野欧美在线观看| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产精品99久久99久久久不卡| 国产一区二区 视频在线| 国产区一区二久久| 超色免费av| 最新的欧美精品一区二区| 51午夜福利影视在线观看| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 一区福利在线观看| 欧美激情久久久久久爽电影 | 十八禁高潮呻吟视频| 青青草视频在线视频观看| 国产区一区二久久| 久久午夜亚洲精品久久| 男女无遮挡免费网站观看| 在线观看66精品国产| 美女福利国产在线| 久久ye,这里只有精品| 91麻豆av在线| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 久久久精品免费免费高清| 999精品在线视频| 曰老女人黄片| 亚洲三区欧美一区| 中文亚洲av片在线观看爽 | 91成人精品电影| 亚洲午夜理论影院| 久久ye,这里只有精品| 亚洲精品国产一区二区精华液| 久久久国产成人免费| 午夜福利在线免费观看网站| 少妇精品久久久久久久| 多毛熟女@视频| bbb黄色大片| 精品国产乱码久久久久久小说| 操出白浆在线播放| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 捣出白浆h1v1| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 成人永久免费在线观看视频 | 99国产综合亚洲精品| 久久亚洲精品不卡| 99久久人妻综合| 9色porny在线观看| 亚洲精品国产一区二区精华液| av福利片在线| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 人成视频在线观看免费观看| 高清视频免费观看一区二区| 国产又色又爽无遮挡免费看| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 热re99久久精品国产66热6| 激情视频va一区二区三区| 色老头精品视频在线观看| 久久热在线av| 在线观看免费日韩欧美大片| 高清黄色对白视频在线免费看| 亚洲中文av在线| avwww免费| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 国产精品免费视频内射| 久久久久久久久免费视频了| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 久久亚洲真实| 精品免费久久久久久久清纯 | 视频区欧美日本亚洲| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 免费日韩欧美在线观看| 久久精品91无色码中文字幕| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 国产精品1区2区在线观看. | 国产av精品麻豆| 日日爽夜夜爽网站| 精品少妇久久久久久888优播| 黄片播放在线免费| 99精品久久久久人妻精品| videosex国产| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 国产在线精品亚洲第一网站| 丝袜人妻中文字幕| 久久人人97超碰香蕉20202| 亚洲精品中文字幕在线视频| 国产精品亚洲一级av第二区| 欧美日韩av久久| 亚洲专区国产一区二区| 欧美日韩精品网址| 脱女人内裤的视频| 伦理电影免费视频| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 在线播放国产精品三级| 多毛熟女@视频| 国产精品一区二区在线不卡| 日韩中文字幕视频在线看片| 99国产精品一区二区三区| 9色porny在线观看| 国产精品一区二区在线不卡| 欧美大码av| 国产精品亚洲av一区麻豆| 午夜福利在线免费观看网站| 激情视频va一区二区三区| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 欧美中文综合在线视频| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 国产成人影院久久av| 亚洲男人天堂网一区| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 精品少妇内射三级| 丰满少妇做爰视频| av免费在线观看网站| 亚洲精品中文字幕在线视频| 日本五十路高清| 国产亚洲一区二区精品| 国产成人免费观看mmmm| 日本一区二区免费在线视频| 久9热在线精品视频| aaaaa片日本免费| 精品国产一区二区久久| 精品国产乱码久久久久久小说| 国产精品九九99| 大陆偷拍与自拍| 1024香蕉在线观看| 国产免费福利视频在线观看| 国产黄频视频在线观看| 亚洲精品国产一区二区精华液| av又黄又爽大尺度在线免费看| 免费在线观看日本一区| 老司机深夜福利视频在线观看| 久久久精品区二区三区| 自线自在国产av| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 亚洲av美国av| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产有黄有色有爽视频| 桃红色精品国产亚洲av| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 国产精品欧美亚洲77777| 搡老乐熟女国产| 在线观看舔阴道视频| 欧美日韩av久久| 我要看黄色一级片免费的| 香蕉久久夜色| 9色porny在线观看| 欧美乱妇无乱码| 亚洲国产中文字幕在线视频| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 精品国产亚洲在线| 嫩草影视91久久| 两个人免费观看高清视频| 女人久久www免费人成看片| 日本精品一区二区三区蜜桃| 国产精品一区二区在线观看99| 麻豆av在线久日| 日本wwww免费看| 黄色毛片三级朝国网站| 国产精品久久久久久精品电影小说| 国产高清视频在线播放一区| 在线观看一区二区三区激情| 国产在线免费精品| 国产三级黄色录像| 久久人人97超碰香蕉20202| 嫩草影视91久久| 国产免费av片在线观看野外av| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 午夜福利欧美成人| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 香蕉国产在线看| 亚洲精品国产一区二区精华液| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 精品国产亚洲在线| 午夜福利视频精品| 午夜两性在线视频| 国产日韩欧美在线精品| 波多野结衣av一区二区av| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 国产成人精品无人区| 精品国产乱码久久久久久小说| 国产男女内射视频| 欧美国产精品va在线观看不卡| 国产精品影院久久| 宅男免费午夜| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 人人妻,人人澡人人爽秒播| 亚洲精品中文字幕在线视频| 大型黄色视频在线免费观看| 高清视频免费观看一区二区| 99riav亚洲国产免费| 五月天丁香电影| 黄色毛片三级朝国网站| 中文字幕高清在线视频| 不卡av一区二区三区| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 精品人妻熟女毛片av久久网站| tocl精华| 日本av手机在线免费观看| 手机成人av网站| 欧美午夜高清在线| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 一区二区三区乱码不卡18| 日韩视频一区二区在线观看| 亚洲天堂av无毛| av一本久久久久| 精品福利观看| 亚洲视频免费观看视频| 大陆偷拍与自拍| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | av线在线观看网站| 三级毛片av免费| 午夜成年电影在线免费观看| 一区二区三区激情视频| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 欧美性长视频在线观看| 一个人免费看片子| 国产欧美日韩一区二区三| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 亚洲情色 制服丝袜| 少妇 在线观看| 热99久久久久精品小说推荐| 99riav亚洲国产免费| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 亚洲av片天天在线观看| 99久久人妻综合| 国产成人精品在线电影| 亚洲精品粉嫩美女一区| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 免费高清在线观看日韩| 性色av乱码一区二区三区2| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 亚洲人成77777在线视频| av超薄肉色丝袜交足视频| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 欧美+亚洲+日韩+国产| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产淫语在线视频| 免费在线观看完整版高清| 色精品久久人妻99蜜桃| 久久久欧美国产精品| 国产亚洲精品久久久久5区| av片东京热男人的天堂| 黄色怎么调成土黄色| 久久久欧美国产精品| 久久久久精品人妻al黑| 黄色视频不卡| 亚洲七黄色美女视频| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 日日摸夜夜添夜夜添小说| 热99国产精品久久久久久7| 中文字幕制服av| 男女床上黄色一级片免费看| 免费在线观看完整版高清| 国产熟女午夜一区二区三区| 欧美一级毛片孕妇| 黑人猛操日本美女一级片| 久热爱精品视频在线9| 一区二区三区激情视频| 欧美黑人欧美精品刺激| 超色免费av| 精品免费久久久久久久清纯 | 热re99久久精品国产66热6| a级片在线免费高清观看视频| 午夜福利,免费看| 国产麻豆69| 亚洲成国产人片在线观看| 日韩有码中文字幕| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 99久久精品国产亚洲精品| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 午夜视频精品福利| 新久久久久国产一级毛片| 国产精品影院久久| av一本久久久久| 十八禁网站网址无遮挡| 亚洲伊人色综图| 国产精品九九99| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲少妇的诱惑av| 国产三级黄色录像| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 久9热在线精品视频| 桃花免费在线播放| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 精品人妻1区二区| 免费观看a级毛片全部| 18禁观看日本| 日韩中文字幕视频在线看片| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 国产精品一区二区免费欧美| 丝袜美足系列| 日韩欧美国产一区二区入口| 国产精品.久久久| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 欧美日韩成人在线一区二区| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 日韩视频在线欧美| 亚洲精品av麻豆狂野| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 国产男女内射视频| 2018国产大陆天天弄谢| 一区在线观看完整版| 久久久水蜜桃国产精品网| 亚洲国产中文字幕在线视频| 久久国产精品人妻蜜桃| 脱女人内裤的视频| 色在线成人网| 视频区欧美日本亚洲| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 三上悠亚av全集在线观看| 国产野战对白在线观看| 女同久久另类99精品国产91| 午夜久久久在线观看| 中文欧美无线码| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 欧美黑人欧美精品刺激| 婷婷丁香在线五月| 国产精品二区激情视频| 欧美在线黄色| 国产精品一区二区在线观看99| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 精品少妇内射三级| 高清av免费在线| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 两个人免费观看高清视频| av有码第一页| 欧美成人免费av一区二区三区 | 成人18禁在线播放| 久久久久久免费高清国产稀缺| 男女下面插进去视频免费观看| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 精品一区二区三区四区五区乱码| 国产人伦9x9x在线观看| 热re99久久精品国产66热6| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 久久国产亚洲av麻豆专区| 久久精品国产a三级三级三级| 日韩欧美免费精品| 免费少妇av软件| 精品福利永久在线观看| 久久久欧美国产精品| 久久久久精品人妻al黑| 久久九九热精品免费| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 美女扒开内裤让男人捅视频| 日本av免费视频播放| 大片电影免费在线观看免费| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 欧美黑人欧美精品刺激| 欧美日韩精品网址| 亚洲成人免费电影在线观看| 免费在线观看完整版高清| 午夜福利在线观看吧| 岛国毛片在线播放| 久久毛片免费看一区二区三区| 丝瓜视频免费看黄片| 999久久久国产精品视频| 国产91精品成人一区二区三区 | 亚洲国产成人一精品久久久| 日韩视频一区二区在线观看|