• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    IFN-γ上調(diào)人胃癌細(xì)胞株P(guān)D-L1表達(dá)*

    2013-10-24 06:29:15陳淑芬侯婧瑛吳淑云王凌云
    中國病理生理雜志 2013年11期
    關(guān)鍵詞:細(xì)胞株生存率胃癌

    陳淑芬, 侯婧瑛, 吳淑云, 王凌云△

    (中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院 1消化內(nèi)科, 2急診科,廣東 廣州 510120)

    IFN-γ上調(diào)人胃癌細(xì)胞株P(guān)D-L1表達(dá)*

    陳淑芬1, 侯婧瑛2, 吳淑云1, 王凌云1△

    (中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院1消化內(nèi)科,2急診科,廣東 廣州 510120)

    目的研究不同人胃癌細(xì)胞株表面程序性死亡配體1(PD-L1)表達(dá)及干擾素γ(IFN-γ)對(duì)其表達(dá)的誘導(dǎo)情況。方法分別培養(yǎng)不同人胃癌細(xì)胞株AGS、BGC823、MGC803和SGC7901,經(jīng)不同濃度IFN-γ、作用不同時(shí)間后,利用流式細(xì)胞術(shù)及real-time PCR檢測胃癌細(xì)胞株P(guān)D-L1在蛋白和mRNA水平的表達(dá)情況。結(jié)果流式細(xì)胞術(shù)顯示AGS、BGC823、MGC803和SGC7901細(xì)胞PD-L1蛋白表達(dá)率分別為(1.567±0.109)%、(2.640±0.577)%、(1.760±0.236)%和(16.030±1.289)%;不同胃癌細(xì)胞株對(duì)IFN-γ反應(yīng)不同,經(jīng)不同濃度IFN-γ刺激后均可不同程度上調(diào)PD-L1的表達(dá)(P<0.05);real-time PCR顯示10 μg/L IFN-γ刺激各胃癌細(xì)胞株12 h后PD-L1 mRNA水平上調(diào)(P<0.05)。結(jié)論胃癌細(xì)胞株組成性表達(dá)PD-L1;IFN-γ可上調(diào)胃癌細(xì)胞株P(guān)D-L1的表達(dá),呈現(xiàn)濃度、時(shí)間依賴性;其中以SGC7901細(xì)胞(來源于轉(zhuǎn)移淋巴結(jié))表達(dá)最高,推測胃癌細(xì)胞中PD-L1的表達(dá)與腫瘤分化程度無關(guān),與組織來源和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān);IFN-γ上調(diào)胃癌細(xì)胞PD-L1,表明IFN-γ并非都是抑制腫瘤增殖、生長,可能參與介導(dǎo)腫瘤免疫逃逸,故臨床運(yùn)用IFN-γ輔助治療胃癌時(shí)應(yīng)慎用。

    胃癌細(xì)胞; 程序性死亡配體1; 干擾素γ; 預(yù)后

    程序性死亡配體1(programmed death ligand 1, 簡稱PD-L1,又稱為B7-H1),是一種含有290個(gè)氨基酸的I型跨膜糖蛋白,于1997年被Dong等[1]從胎盤cDNA文庫中發(fā)現(xiàn)并確認(rèn)。PD-L1蛋白廣泛表達(dá)于抗原提呈細(xì)胞、活化T/B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、胎盤滋養(yǎng)層、心肌內(nèi)皮和胸腺皮質(zhì)上皮細(xì)胞。在許多腫瘤組織亦有PD-L1蛋白的表達(dá),如宮頸癌、乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌[2-3],且腫瘤組織中PD-L1的表達(dá)水平較癌旁組織明顯升高,與患者臨床預(yù)后緊密相關(guān)[1,4]。胃癌是常見且惡性程度較高的消化道惡性腫瘤,手術(shù)是首選治療方法,然而術(shù)后患者預(yù)后差,5年總生存率僅約30%~50%,術(shù)后聯(lián)合免疫治療和/或化療方案有著較為肯定的療效。干擾素γ(interferon-γ,IFN-γ)因其具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖、調(diào)節(jié)免疫功能的作用而廣泛用于腫瘤治療。近年研究發(fā)現(xiàn)IFN-γ可誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞、胰腺癌PD-L1表達(dá)[2,5]。目前國內(nèi)外關(guān)于胃癌細(xì)胞株P(guān)D-L1表達(dá)及IFN-γ對(duì)其表達(dá)影響的研究及報(bào)道較少。本研究通過流式細(xì)胞術(shù)及實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR分析不同胃癌細(xì)胞株P(guān)D-L1表達(dá),并探討IFN-γ能否上調(diào)不同胃癌細(xì)胞株P(guān)D-L1表達(dá),以期為胃癌的綜合治療方案提供依據(jù)。

    材 料 和 方 法

    1材料

    胃癌細(xì)胞株AGS、BGC823、MGC803和SGC7901均由中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院黃開紅教授惠贈(zèng);胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)和RPMI-1640培養(yǎng)基均購于HyClone;IFN-γ購于Peprotech;PE標(biāo)記抗人PD-L1抗體和PE標(biāo)記小鼠IgG1同型抗體均購于eBioscience。Trizol和TaKaRa PrimeScriptTMRT Master Mix 均購于寶生生物公司,SsoAdvancedTMSYBR Green Supermix購于華南地區(qū)Bio-Rad總代理;FACS流式細(xì)胞儀為BD產(chǎn)品。CFX96實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀為Bio-Rad產(chǎn)品。

    2方法

    2.1不同濃度IFN-γ對(duì)胃癌細(xì)胞PD-L1表達(dá)的影響 待體外培養(yǎng)的胃癌細(xì)胞處于生長對(duì)數(shù)期時(shí),消化制成細(xì)胞懸液,調(diào)整密度為1×108/L,接種于24孔板培養(yǎng)24 h,分別加入不同濃度IFN-γ(0 μg/L、5 μg/L、10 μg/L、20 μg/L、40 μg/L和80 μg/L),繼續(xù)培養(yǎng)24 h收獲細(xì)胞。每次設(shè)置3個(gè)復(fù)孔,重復(fù)3次。

    2.2IFN-γ刺激不同胃癌細(xì)胞株不同時(shí)點(diǎn)PD-L1表達(dá) 取對(duì)數(shù)生長期胃癌細(xì)胞,接種于24孔板,實(shí)驗(yàn)組加10 μg/L[5-6]IFN-γ,分別培養(yǎng)不同時(shí)間(0 h、12 h、24 h、36 h、48 h和72 h),每個(gè)時(shí)點(diǎn)設(shè)置3個(gè)復(fù)孔,收獲各時(shí)段細(xì)胞。重復(fù)3次。

    2.3流式細(xì)胞術(shù)檢測 收集上述處理細(xì)胞,0.02%EDTA消化,離心,1 000 r/min 5 min,PBS(含1%FBS)洗滌2次;PBS(含1%FBS)重懸細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞密度為1×109/L;各吸取100 μL細(xì)胞懸液,分為2管,分別加入PE標(biāo)記小鼠IgG1和PE標(biāo)記鼠抗人 PD-L1抗體1 μL,混勻置于4 ℃避光孵育30 min,2 mL PBS洗滌1次,300 μL PBS重懸,上機(jī)檢測。

    2.4Real-time PCR 細(xì)胞懸液接種于6孔板,10 μg/L IFN-γ干預(yù)12 h,據(jù)TaKaRa Total RNA說明書提取總RNA,-80℃保存;按TaKaRa PrimeScriptTMRT Master Mix 說明書合成cDNA, -20℃保存;引物設(shè)計(jì)合成由Life Invitrogen 公司完成。β-actin正義序列5’-CATGTACGTTGCTATCCAGGC-3’,反義序列5’-CTCCTTAATGTCACGCACGAT-3’;PD-L1正義序列 5’-GGACAAGCAGTGACCATCAAG-3’,反義序列5’-CCCAGAATTACCAAGTGAGTCCT-3’。按照Bio-Rad SsoAdvancedTMSYBR Green Supermix說明書實(shí)驗(yàn)。體系為20 μL,取2 μL cDNA產(chǎn)物分別與PD-L1引物和β-actin引物進(jìn)行反應(yīng),反應(yīng)條件:95 ℃預(yù)變性30 s,95 ℃ 5 s,60 ℃ 30 s,重復(fù)40次循環(huán)。Bio-Rad CFX96實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀操作反應(yīng)。數(shù)據(jù)分析采用2-ΔCt。

    3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    采用SPSS 16.0軟件分析,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示。兩組樣本均數(shù)比較采用t檢驗(yàn);多組樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析(One-way ANOVA),組間多重比較采用Bonferroni法。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    結(jié) 果

    1胃癌細(xì)胞株AGS、BGC823、MGC803和SGC7901均表達(dá)PD-L1

    流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示不同胃癌細(xì)胞株AGS、BGC823、MGC803和SGC7901均不同程度表達(dá)PD-L1(與標(biāo)記同型抗體的胃癌細(xì)胞株相互比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,均P<0.05);其中以SGC7901表達(dá)最高[(16.030±1.289)%],余依次為BGC823、MGC803和AGS,見圖1。

    2胃癌細(xì)胞經(jīng)IFN-γ刺激后呈現(xiàn)劑量和時(shí)間依賴性上調(diào)PD-L1蛋白表達(dá)

    流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果證實(shí)胃癌細(xì)胞株AGS、BGC823、MGC803和SGC7901均可經(jīng)不同濃度IFN-γ刺激后上調(diào)PD-L1,并呈現(xiàn)劑量依賴性:隨著IFN-γ濃度升高,PD-L1蛋白表達(dá)呈現(xiàn)增高趨勢,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見圖2;在10 μg/L IFN-γ刺激不同時(shí)間后,不同胃癌細(xì)胞株P(guān)D-L1蛋白表達(dá)均呈現(xiàn)上升趨勢,48 h達(dá)高峰,72 h后開始下降,其中BGC823、MGC803和SGC7901表達(dá)與0 h比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,見圖3。不同胃癌細(xì)胞株對(duì)IFN-γ的反應(yīng)敏感性不同,以BGC823和SGC7901較為敏感,低濃度(5 μg/L和10 μg/L)IFN-γ即可上調(diào)PD-L1表達(dá)(P<0.05),而細(xì)胞株AGS和MGC803則需要中濃度(40 μg/L)和高濃度(80 μg/L)IFN-γ上調(diào)PD-L1表達(dá)(P<0.05),見圖2。

    Figure 1. PD-L1 surface expression in four different human gastric cancer cell lines analysed by flow cytometry.Mean±SD.n=3.*P<0.05vsisotype control.

    圖1不同胃癌細(xì)胞株表面PD-L1的表達(dá)

    Figure 2. Dose-dependent surface expression of PD-L1 in human gastric cancer cells induced by IFN-γ. AGS,BGC823, MGC803 and SGC7901 cells were treated with diffenrent concentrations of IFN-γ for 24 h. PD-L1 surface expression was analysed by flow cytometry. Mean±SD.n=3.*P<0.05vs0 μg/L.

    圖2不同濃度IFN-γ對(duì)不同胃癌細(xì)胞株P(guān)D-L1表達(dá)的影響

    Figure 3. Time-dependent surface expression of PD-L1 in human gastric cancer cells induced by IFN-γ. Human gastric cancer cell lines AGS,BGC823,MGC803 and SGC7901 were treated with IFN-γ (10 μg/L) for diffenrent time. PD-L1 surface expression was analysed by flow cytometry.Mean±SD.n=3.**P<0.01vs0 h.

    圖3IFN-γ作用不同時(shí)間對(duì)不同胃癌細(xì)胞株P(guān)D-L1表達(dá)的影響

    3IFN-γ上調(diào)胃癌細(xì)胞株P(guān)D-L1mRNA表達(dá)

    Real-time PCR結(jié)果顯示10 μg/L IFN-γ刺激胃癌細(xì)胞12 h,各種胃癌細(xì)胞PD-L1 mRNA水平均上調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),其中以SGC7901細(xì)胞最明顯,見圖4。

    討 論

    胃癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤,根治性手術(shù)是治療的首選方法,但術(shù)后復(fù)發(fā)率高,預(yù)后差。據(jù)調(diào)查,我國胃癌的發(fā)病率及死亡率均高于世界水平[7]。提高生存率,改善患者預(yù)后具有重要意義。研究發(fā)現(xiàn)PD-L1表達(dá)陽性的胃癌患者其1年、3年生存率均低于表達(dá)陰性者,術(shù)后PD-L1可明顯下降,而復(fù)發(fā)時(shí)升高[3]。高表達(dá)PD-L1的腫瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)率明顯升高,無病生存率及總生存率均明顯低于PD-L1陰性或低表達(dá)者[4]。故目前PD-L1已被公認(rèn)可作為評(píng)估腫瘤患者預(yù)后的獨(dú)立因素[4,8-9]。我們前期通過免疫組化發(fā)現(xiàn)胃癌組織表達(dá)PD-L1,PD-L1表達(dá)陽性者與表達(dá)陰性組的1年生存率上未見明顯差異,而3年生存率存在差異性,表達(dá)陽性組較陰性組3年生存率相對(duì)較低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(未發(fā)表)。本研究通過流式細(xì)胞術(shù)及RT-PCR技術(shù)分別從蛋白及mRNA水平檢測各胃癌細(xì)胞株中PD-L1表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)胃癌細(xì)胞株AGS、BGC823、MGC803和SGC7901均組成性表達(dá)PD-L1。實(shí)驗(yàn)選用不同分化程度、不同來源的胃癌細(xì)胞系(AGS和BGC823均為低分化胃腺癌,MGC803為低分化胃黏液腺癌,SGC7901為中分化胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶),以SGC7901細(xì)胞表面PD-L1表達(dá)最高,考慮可能與其來源于胃癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié),而PD-L1高表達(dá)于活化淋巴細(xì)胞有關(guān)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示PD-L1的表達(dá)水平與腫瘤的分化程度無直接關(guān)系,而可能與胃癌細(xì)胞組織來源及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。

    Figure 4. PD-L1 relative mRNA expression stimulated with IFN-γ in four different gastric cancer cell lines. The gastric cancer cell lines AGS,BGC823,MGC803 and SGC7901 were treated with IFN-γ (10 μg/L)for 12 h. The relative expression of PD-L1 mRNA was analysed by real-time PCR.Mean±SD.n=3.*P<0.05vscontrol group.

    圖4IFN-γ刺激不同胃癌細(xì)胞株前后PD-L1mRNA相對(duì)表達(dá)量

    在胃癌進(jìn)展過程中,IFN-γ逐漸減少,甚至難以檢測[10],因此我們推測IFN-γ下降與胃癌分期有關(guān)。焦付豐等[11]亦發(fā)現(xiàn)胃癌患者IFN-γ較正常對(duì)照組分泌減少;劉曉玲等[12]研究證實(shí)胃癌化療后部分緩解的患者IFN-γ較化療前升高。體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)均證明IFN-γ能抑制腫瘤生長及腫瘤的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移,并在機(jī)體免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮著重要作用,故IFN-γ被廣泛用于臨床抗腫瘤治療。本實(shí)驗(yàn)首先運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)發(fā)現(xiàn)持續(xù)IFN-γ刺激可上調(diào)胃癌細(xì)胞株P(guān)D-L1蛋白的表達(dá);且不同胃癌細(xì)胞對(duì)上調(diào)PD-L1蛋白所需IFN-γ刺激濃度、時(shí)間不一,考慮可能與細(xì)胞對(duì)IFN-γ敏感程度差異有關(guān)[13];為了進(jìn)一步探討IFN-γ在mRNA水平對(duì)PD-L1誘導(dǎo)情況,我們選用文獻(xiàn)中常用的IFN-γ濃度(10 μg/L)刺激胃癌細(xì)胞,利用real-time PCR檢測發(fā)現(xiàn)IFN-γ刺激胃癌細(xì)胞后,PD-L1 mRNA表達(dá)升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。目前導(dǎo)致IFN-γ上調(diào)PD-L1表達(dá)的機(jī)制尚不明確,有學(xué)者發(fā)現(xiàn)在PD-L1啟動(dòng)子區(qū)域含有數(shù)個(gè)IFN-γ反應(yīng)元件[6,14],我們從mRNA及蛋白水平均發(fā)現(xiàn)經(jīng)IFN-γ處理后胃癌細(xì)胞PD-L1表達(dá)升高,故推測IFN-γ可能在PD-L1基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控水平發(fā)揮作用,從而上調(diào)其在腫瘤細(xì)胞表面的表達(dá)。但PD-L1具體調(diào)節(jié)機(jī)制仍需進(jìn)一步探索。

    本實(shí)驗(yàn)證明IFN-γ可上調(diào)胃癌細(xì)胞PD-L1表達(dá), 而腫瘤細(xì)胞高表達(dá)PD-L1,能降低其自身免疫原性,促使腫瘤細(xì)胞逃避機(jī)體的免疫系統(tǒng)攻擊[14],表明IFN-γ并非都是抑制腫瘤增殖、生長,可能一定程度上促進(jìn)腫瘤免疫逃逸[5],所以臨床上運(yùn)用IFN-γ治療腫瘤時(shí)應(yīng)謹(jǐn)慎。

    [1] Dong H,Strome SE,Salomao DR,et al. Tumor-associated B7-H1 promotes T-cell apoptosis: a potential mechanism of immune evasion[J]. Nat Med, 2002,8(8): 793-800.

    [2] 吳清松,黃東勝,劉軍偉,等. B7H1在胰腺癌panc-1細(xì)胞的表達(dá)及其功能研究[J]. 中國病理生理雜志,2010,26(12):2337-2341.

    [3] 馬 君,黃東勝,金洪傳,等. LPS誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞Panc-1表達(dá)B7-H1[J].中國病理生理雜志,2011,27(12):2270-2275.

    [4] Wu C, Zhu Y, Jiang J, et al. Immunohistochemical localization of programmed death-1 ligand-1 (PD-L1) in gastric carcinoma and its clinical significance[J]. Acta Histochemica, 2006, 108(1): 19-24.

    [5] Liang M, Fu J. Triptolide inhibits interferon-γ induced programmed death-1-ligand 1 surface expression in breast cancer cells[J]. Cancer Lett, 2008, 270(2):337-341.

    [6] Lee SJ,Jang BC,Lee SW,et al. Interferon regulatory factor-1 is prerequisite to the constitutive expression and IFN-gamma-induced upregulation of B7-H1(CD274)[J]. FEBS Lett, 2006, 580(3):755-762.

    [7] 鄒小農(nóng),孫喜斌,陳萬青,等. 2003-2007年中國胃癌發(fā)病與死亡情況分析[J].腫瘤, 2012,32(2):109-114.

    [8] Yamada T,Rino Y,Wada N,et al. A case of long-term survival of 5 years after operation and chemotherapy for type 4 gastric cancer with peritoneal dissemination[J]. Gan To Kagaku Ryoho,2008, 35(1):117-119.

    [9] 劉書漫,李倩如,張 娓,等.共刺激分子B7-H1在胃癌中表達(dá)上調(diào)[J].基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床,2008,28(5):450-454.

    [10] 劉 鵬,司履生,李 睿,等.原位雜交檢測胃癌組織中幾種細(xì)胞因子的mRNA變化[J].西安醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 2001,22(5):408-410.

    [11] 焦付豐,曲維蘭,王長印,等.胃癌患者血清細(xì)胞因子水平變化及與腫瘤分化程度的關(guān)系[J].山東醫(yī)藥,2011,51(43): 26-27.

    [12] 劉曉玲,高 俊,韓存芝,等.胃癌患者化療前后Th1/Th2細(xì)胞因子的檢測及其臨床意義[J].中華腫瘤雜志, 2008, 11(30): 844-847.

    [13] 鄧 昊,鎮(zhèn)鴻燕,周紅艷,等.人胃癌IFN-γ-STAT-1通路的作用及其機(jī)制[J].世界華人消化雜志,2009,17(11):1103-1107.

    [14] Mazanet MM, Hughes CC. B7-H1 is expressed by human endothelial cells and suppresses T cell cytokine synthesis[J]. J Immunol,2002,169(7):3581-3588.

    Interferon-γup-regulatesprogrammeddeathligand1inhumangastriccancercells

    CHEN Shu-fen1, HOU Jing-ying2, WU Shu-yun1, WANG Ling-yun1

    (1DepartmentofGastroenterology,2EmergencyDepartment,SunYat-senMemorialHospitalofSunYat-senUniversity,Guangzhou510120,China.E-mail:xzr020@aliyun.com)

    AIM: To study the expression of programmed death ligand 1 (PD-L1) in human gastric cancer cells with or without the stimulation of interferon-γ (IFN-γ).METHODSThe protein levels of PD-L1 in 4 different human gastric cancer cell lines AGS, BGC823, MGC803 and SGC7901 with or without IFN-γ treatment were analyzed by flow cytometry. The mRNA expression of PD-L1 in those cell lines was also detected by real-time PCR.RESULTSFlow cytometry analysis showed that the rates of PD-L1 surface expression in the 4 human gastric cancer cell lines AGS, BGC823, MGC803 and SGC7901 were (1.567±0.109)%, (2.640±0.577)%, (1.760±0.236)% and (16.030±1.289)%, respectively. After the 4 gastric cancer cell lines were treated with IFN-γ at different concentrations or for different time, the PD-L1 surface expression increased at different levels with significant differences between groups. Real-time PCR also indicated that IFN-γ up-regulated PD-L1 expression at mRNA level.CONCLUSIONPD-L1 surface expression is found in human gastric cancer cell lines AGS, BGC823, MGC803 and SGC7901. IFN-γ up-regulates the expression of PD-L1. SGC7901 cell line, which is from metastatic lymph nodes, expresses the highest protein level of PD-L1 among the 4 cell lines, indicating that PD-L1 expression may be related to lymph node metastasis, not to differentiation grade. IFN-γ may mediate the tumor immune escape so that it should be carefully applied in the treatment of gastric cancer.

    Gastric cancer cells; Programmed death ligand 1; Interferon-γ; Prognosis

    R363

    A

    10.3969/j.issn.1000- 4718.2013.11.006

    1000- 4718(2013)11- 1952- 05

    2013- 08- 20

    2013- 10- 02

    廣東省科技社會(huì)發(fā)展項(xiàng)目(No. 2012B031800362)

    △通訊作者 Tel:020-81332489;E-mail:xzr020@aliyun.com

    猜你喜歡
    細(xì)胞株生存率胃癌
    “五年生存率”不等于只能活五年
    人工智能助力卵巢癌生存率預(yù)測
    “五年生存率”≠只能活五年
    HER2 表達(dá)強(qiáng)度對(duì)三陰性乳腺癌無病生存率的影響
    P53及Ki67在胃癌中的表達(dá)及其臨床意義
    胃癌組織中LKB1和VEGF-C的表達(dá)及其意義
    穩(wěn)定敲低MYH10基因細(xì)胞株的建立
    胃癌組織中VEGF和ILK的表達(dá)及意義
    Rab27A和Rab27B在4種不同人肝癌細(xì)胞株中的表達(dá)
    穩(wěn)定抑制PAK2蛋白表達(dá)的HUH—7細(xì)胞株的建立
    kizo精华| 国产真人三级小视频在线观看| a级片在线免费高清观看视频| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲av男天堂| 咕卡用的链子| 国产一级毛片在线| 日韩精品免费视频一区二区三区| 精品国产乱码久久久久久男人| 又大又爽又粗| 国产精品三级大全| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 亚洲精品一区蜜桃| 免费看不卡的av| 欧美97在线视频| 欧美 日韩 精品 国产| 久热爱精品视频在线9| 无限看片的www在线观看| 国产成人啪精品午夜网站| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 成人国产av品久久久| 麻豆av在线久日| 国产色视频综合| 777米奇影视久久| 精品卡一卡二卡四卡免费| 婷婷成人精品国产| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 一级毛片电影观看| 亚洲五月色婷婷综合| 免费少妇av软件| 最近中文字幕2019免费版| 男人操女人黄网站| 久久青草综合色| 欧美成人午夜精品| av在线老鸭窝| 三上悠亚av全集在线观看| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 美女扒开内裤让男人捅视频| 久久性视频一级片| 日韩人妻精品一区2区三区| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 老司机影院毛片| 欧美精品一区二区免费开放| 中国国产av一级| 老司机亚洲免费影院| 久久精品国产a三级三级三级| 亚洲,欧美精品.| 纵有疾风起免费观看全集完整版| √禁漫天堂资源中文www| 高清欧美精品videossex| 好男人电影高清在线观看| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 国产精品偷伦视频观看了| 欧美少妇被猛烈插入视频| 欧美日韩av久久| 日本欧美视频一区| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 亚洲精品国产一区二区精华液| 无限看片的www在线观看| 97在线人人人人妻| 国产亚洲精品久久久久5区| 99热网站在线观看| 老司机深夜福利视频在线观看 | 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 18禁观看日本| 亚洲av电影在线进入| 日韩一本色道免费dvd| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 中国美女看黄片| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 考比视频在线观看| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 亚洲av综合色区一区| 午夜视频精品福利| 国产精品.久久久| 香蕉国产在线看| 亚洲熟女精品中文字幕| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲av成人精品一二三区| 男人操女人黄网站| 大香蕉久久网| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 多毛熟女@视频| 老司机在亚洲福利影院| kizo精华| 女警被强在线播放| 日韩免费高清中文字幕av| www.自偷自拍.com| 夫妻性生交免费视频一级片| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 国产黄频视频在线观看| 日日爽夜夜爽网站| 国产一区有黄有色的免费视频| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 欧美在线一区亚洲| 1024香蕉在线观看| 欧美久久黑人一区二区| 啦啦啦在线免费观看视频4| 黄色视频在线播放观看不卡| 欧美成人精品欧美一级黄| 欧美97在线视频| 女人久久www免费人成看片| 亚洲精品自拍成人| 国产成人91sexporn| 亚洲,一卡二卡三卡| 国产1区2区3区精品| a级毛片黄视频| 欧美av亚洲av综合av国产av| 免费在线观看完整版高清| 天堂中文最新版在线下载| 日本色播在线视频| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 男女下面插进去视频免费观看| 久久人妻福利社区极品人妻图片 | 男女边吃奶边做爰视频| 国产成人免费无遮挡视频| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| videos熟女内射| 看免费成人av毛片| 国产精品国产三级专区第一集| 99久久精品国产亚洲精品| 精品第一国产精品| 97人妻天天添夜夜摸| 老汉色∧v一级毛片| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 捣出白浆h1v1| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 桃花免费在线播放| 中国国产av一级| a 毛片基地| 日本91视频免费播放| 尾随美女入室| 大话2 男鬼变身卡| 99国产精品一区二区蜜桃av | 成人亚洲精品一区在线观看| 午夜福利,免费看| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 免费不卡黄色视频| 99久久精品国产亚洲精品| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 国产片内射在线| 国产免费视频播放在线视频| 亚洲国产精品成人久久小说| 另类精品久久| avwww免费| 日韩av在线免费看完整版不卡| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 欧美日韩精品网址| av在线app专区| 成年女人毛片免费观看观看9 | 韩国精品一区二区三区| 欧美黑人精品巨大| 久久人妻福利社区极品人妻图片 | 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 黄片小视频在线播放| cao死你这个sao货| 一本色道久久久久久精品综合| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 日韩一区二区三区影片| 精品一品国产午夜福利视频| 成人亚洲欧美一区二区av| 波多野结衣一区麻豆| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 久久免费观看电影| 性高湖久久久久久久久免费观看| 亚洲七黄色美女视频| 香蕉国产在线看| √禁漫天堂资源中文www| 最近手机中文字幕大全| 欧美成人午夜精品| 十八禁高潮呻吟视频| 日韩电影二区| 亚洲第一青青草原| 看免费成人av毛片| 日韩大码丰满熟妇| 夫妻午夜视频| 久久精品久久精品一区二区三区| 亚洲欧美一区二区三区久久| 97人妻天天添夜夜摸| 欧美 日韩 精品 国产| 另类亚洲欧美激情| 国产成人av教育| 国产在视频线精品| 欧美激情 高清一区二区三区| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 亚洲五月色婷婷综合| 欧美日本中文国产一区发布| 成年女人毛片免费观看观看9 | 亚洲,欧美,日韩| 亚洲人成电影免费在线| 欧美日韩av久久| 亚洲,欧美,日韩| 国产一区二区在线观看av| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 日本一区二区免费在线视频| 欧美日韩av久久| 亚洲国产日韩一区二区| 十分钟在线观看高清视频www| 97人妻天天添夜夜摸| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产成人91sexporn| 国产老妇伦熟女老妇高清| 国产91精品成人一区二区三区 | 久久久亚洲精品成人影院| 色视频在线一区二区三区| av天堂在线播放| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 国产av国产精品国产| 亚洲成人免费av在线播放| 国产精品 国内视频| 色视频在线一区二区三区| 国产一级毛片在线| 18禁国产床啪视频网站| 欧美日韩综合久久久久久| 久久99精品国语久久久| 波多野结衣一区麻豆| 国产精品人妻久久久影院| av在线播放精品| 欧美成人午夜精品| 91成人精品电影| 波野结衣二区三区在线| 最新在线观看一区二区三区 | 女人久久www免费人成看片| 色综合欧美亚洲国产小说| 悠悠久久av| 性色av乱码一区二区三区2| 久久国产精品人妻蜜桃| 免费少妇av软件| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 亚洲av片天天在线观看| 国产一卡二卡三卡精品| 少妇人妻 视频| a 毛片基地| 国产在线免费精品| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 欧美人与性动交α欧美软件| av有码第一页| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 精品亚洲成a人片在线观看| 亚洲精品自拍成人| 好男人视频免费观看在线| 成人午夜精彩视频在线观看| 成人国语在线视频| 亚洲专区中文字幕在线| 大香蕉久久成人网| 亚洲精品日本国产第一区| 99re6热这里在线精品视频| 成年女人毛片免费观看观看9 | 51午夜福利影视在线观看| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 日本欧美视频一区| 亚洲国产av新网站| 黄色 视频免费看| 波野结衣二区三区在线| 亚洲,一卡二卡三卡| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 视频区图区小说| 一级a爱视频在线免费观看| 亚洲中文av在线| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 免费看十八禁软件| 在现免费观看毛片| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产日韩一区二区三区精品不卡| avwww免费| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 水蜜桃什么品种好| 天堂中文最新版在线下载| xxxhd国产人妻xxx| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 啦啦啦在线观看免费高清www| 午夜视频精品福利| 青草久久国产| 国产精品一区二区精品视频观看| 中文字幕人妻丝袜制服| 中文字幕高清在线视频| 久久久久精品人妻al黑| 久久久久精品国产欧美久久久 | 波多野结衣av一区二区av| 国产黄频视频在线观看| 一级a爱视频在线免费观看| 免费观看人在逋| 久久久久久久精品精品| 亚洲人成网站在线观看播放| 大片电影免费在线观看免费| 国产野战对白在线观看| 操出白浆在线播放| 韩国高清视频一区二区三区| 老鸭窝网址在线观看| 丝袜美足系列| 国产精品九九99| 久久久久精品国产欧美久久久 | 男女无遮挡免费网站观看| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 午夜两性在线视频| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 亚洲欧美一区二区三区久久| av有码第一页| 久久99热这里只频精品6学生| 欧美黑人精品巨大| 一级片'在线观看视频| 亚洲图色成人| 日本wwww免费看| 久久久精品区二区三区| 亚洲一区二区三区欧美精品| 水蜜桃什么品种好| 国产成人精品无人区| 99久久99久久久精品蜜桃| 一二三四社区在线视频社区8| 2018国产大陆天天弄谢| 日本91视频免费播放| 国产国语露脸激情在线看| 久久久精品区二区三区| 国产成人影院久久av| 成年人午夜在线观看视频| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 人人澡人人妻人| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 久久这里只有精品19| 超碰97精品在线观看| 人成视频在线观看免费观看| 欧美国产精品va在线观看不卡| 90打野战视频偷拍视频| 亚洲国产欧美网| 91精品三级在线观看| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产深夜福利视频在线观看| 又大又黄又爽视频免费| 久久久久国产精品人妻一区二区| 啦啦啦 在线观看视频| 日韩制服骚丝袜av| 午夜日韩欧美国产| 飞空精品影院首页| 国产av精品麻豆| 欧美国产精品一级二级三级| 九色亚洲精品在线播放| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 新久久久久国产一级毛片| 国产精品 国内视频| 亚洲精品av麻豆狂野| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 母亲3免费完整高清在线观看| 黄色怎么调成土黄色| 99热国产这里只有精品6| 中文字幕最新亚洲高清| 婷婷成人精品国产| 精品国产乱码久久久久久男人| 美女扒开内裤让男人捅视频| 久久精品久久久久久久性| 国产av精品麻豆| 男女高潮啪啪啪动态图| 在线观看www视频免费| 亚洲,欧美,日韩| 成年人黄色毛片网站| 精品少妇久久久久久888优播| 美女视频免费永久观看网站| 日本黄色日本黄色录像| 又大又黄又爽视频免费| 国产成人免费无遮挡视频| 欧美 日韩 精品 国产| 九草在线视频观看| 亚洲国产av新网站| 亚洲精品国产av成人精品| 国产日韩欧美亚洲二区| 久久久久久久久久久久大奶| 亚洲国产精品一区三区| 另类精品久久| videosex国产| svipshipincom国产片| 自线自在国产av| 免费观看av网站的网址| 欧美中文综合在线视频| 在线观看www视频免费| 大香蕉久久网| 欧美黄色淫秽网站| 婷婷色av中文字幕| 国产精品成人在线| 亚洲精品中文字幕在线视频| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 麻豆av在线久日| 9热在线视频观看99| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 国产在视频线精品| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 美女福利国产在线| 久久女婷五月综合色啪小说| 国产成人精品久久二区二区免费| 天天添夜夜摸| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 视频区欧美日本亚洲| 一区二区三区四区激情视频| 久久精品国产亚洲av涩爱| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 中文欧美无线码| xxxhd国产人妻xxx| 亚洲欧洲国产日韩| 午夜激情av网站| 在线精品无人区一区二区三| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 免费看av在线观看网站| 国产有黄有色有爽视频| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 国产xxxxx性猛交| 少妇人妻 视频| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产xxxxx性猛交| 久久性视频一级片| 91九色精品人成在线观看| 乱人伦中国视频| 男女之事视频高清在线观看 | 天堂8中文在线网| 日本五十路高清| 最新的欧美精品一区二区| 午夜91福利影院| av视频免费观看在线观看| 丝袜人妻中文字幕| 亚洲av片天天在线观看| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 最新的欧美精品一区二区| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| videos熟女内射| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 国产1区2区3区精品| 深夜精品福利| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 欧美亚洲日本最大视频资源| 日韩av在线免费看完整版不卡| 丁香六月欧美| 亚洲精品一二三| 亚洲伊人久久精品综合| av国产久精品久网站免费入址| a级片在线免费高清观看视频| 狂野欧美激情性xxxx| 超碰97精品在线观看| 天天添夜夜摸| 男女高潮啪啪啪动态图| 亚洲 国产 在线| 天天添夜夜摸| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 丝袜在线中文字幕| 国产男女超爽视频在线观看| 大香蕉久久网| 国产人伦9x9x在线观看| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 啦啦啦在线免费观看视频4| a级片在线免费高清观看视频| 日韩制服骚丝袜av| 国产黄色视频一区二区在线观看| 欧美日韩综合久久久久久| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 99热全是精品| 中文字幕人妻丝袜制服| 黄片播放在线免费| 日韩电影二区| 中文字幕色久视频| 成年动漫av网址| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 欧美激情 高清一区二区三区| 亚洲精品av麻豆狂野| 黑丝袜美女国产一区| 超碰成人久久| 中国美女看黄片| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 日韩伦理黄色片| 极品少妇高潮喷水抽搐| svipshipincom国产片| 亚洲av美国av| 国产免费视频播放在线视频| 男女免费视频国产| 男人爽女人下面视频在线观看| 久久99精品国语久久久| 久久人人97超碰香蕉20202| 可以免费在线观看a视频的电影网站| av欧美777| 欧美久久黑人一区二区| 免费高清在线观看日韩| 美女国产高潮福利片在线看| 国产色视频综合| 好男人电影高清在线观看| 首页视频小说图片口味搜索 | 欧美另类一区| 国产在线视频一区二区| 美国免费a级毛片| 人成视频在线观看免费观看| 丝袜在线中文字幕| 国产97色在线日韩免费| 两个人免费观看高清视频| 一级毛片女人18水好多 | 欧美日韩av久久| 91国产中文字幕| 成人国产一区最新在线观看 | 亚洲成人国产一区在线观看 | 在线看a的网站| 欧美性长视频在线观看| 99精国产麻豆久久婷婷| 精品卡一卡二卡四卡免费| 国产欧美日韩精品亚洲av| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 日本五十路高清| 最黄视频免费看| 99热全是精品| 国产免费福利视频在线观看| 精品少妇久久久久久888优播| 免费看不卡的av| 久久久久国产一级毛片高清牌| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 欧美成狂野欧美在线观看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产一区二区激情短视频 | 无遮挡黄片免费观看| 在线观看免费午夜福利视频| 日韩中文字幕欧美一区二区 | xxxhd国产人妻xxx| 蜜桃在线观看..| 夫妻午夜视频| 美女午夜性视频免费| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 大香蕉久久成人网| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 精品高清国产在线一区| 国产精品二区激情视频| 亚洲国产精品一区三区| 久久亚洲精品不卡| 免费av中文字幕在线| 免费少妇av软件| 国产成人啪精品午夜网站| 十八禁网站网址无遮挡| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 波多野结衣一区麻豆| 纯流量卡能插随身wifi吗| 操出白浆在线播放| 好男人电影高清在线观看| 在线观看免费午夜福利视频| 黄色视频在线播放观看不卡| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 一区二区三区乱码不卡18| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 欧美另类一区| 免费少妇av软件| 91麻豆av在线| 欧美+亚洲+日韩+国产| 最黄视频免费看| 激情视频va一区二区三区| 亚洲av国产av综合av卡| 久热爱精品视频在线9| 久久99精品国语久久久| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产高清国产精品国产三级| 夫妻性生交免费视频一级片| 超碰成人久久| 永久免费av网站大全| 欧美日韩av久久| 久久国产精品大桥未久av| 中文字幕av电影在线播放| 波野结衣二区三区在线| av不卡在线播放| 日韩av在线免费看完整版不卡| 国产精品一二三区在线看| 欧美成狂野欧美在线观看| 97在线人人人人妻| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产精品国产av在线观看| 久久热在线av| 午夜福利一区二区在线看| 国产一区亚洲一区在线观看| 丁香六月天网| www.精华液| 国产欧美日韩一区二区三 | 男女下面插进去视频免费观看| 国产成人欧美| 中文字幕色久视频| 久久精品国产亚洲av涩爱| 亚洲国产精品成人久久小说| 精品国产乱码久久久久久小说| 成年动漫av网址| 午夜日韩欧美国产| 18在线观看网站| 新久久久久国产一级毛片| 久久久久久久久免费视频了| 久久人妻熟女aⅴ| 老汉色∧v一级毛片| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 国产精品.久久久| 一级a爱视频在线免费观看| 亚洲免费av在线视频| 亚洲男人天堂网一区| 99国产精品一区二区三区| 99热国产这里只有精品6| 人妻 亚洲 视频| 91精品国产国语对白视频| a级毛片在线看网站| 国产在线一区二区三区精| 国产精品一区二区在线不卡| 国产有黄有色有爽视频| 欧美成人精品欧美一级黄| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 久久久国产精品麻豆| 天堂俺去俺来也www色官网| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 看免费成人av毛片| 午夜激情av网站| 日韩制服骚丝袜av| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 中文乱码字字幕精品一区二区三区|