鉀離子通道蛋白Kir2.1/KCNJ2及多藥耐藥蛋白MRP1/ABCC1在小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及相關(guān)性*

劉換新, 吳曉霞, 張 燕, 郭琳瑯

(1南方醫(yī)科大學(xué)附屬珠江醫(yī)院病理科，廣東廣州 510282； 2武警廣東總隊(duì)醫(yī)院病理科, 廣東 廣州 510507)

鉀離子通道蛋白Kir2.1/KCNJ2及多藥耐藥蛋白MRP1/ABCC1在小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及相關(guān)性*

劉換新1,2, 吳曉霞2, 張 燕2, 郭琳瑯1△

(1南方醫(yī)科大學(xué)附屬珠江醫(yī)院病理科，廣東廣州 510282；2武警廣東總隊(duì)醫(yī)院病理科, 廣東 廣州 510507)

目的探討內(nèi)向整流鉀通道2.1(Kir2.1/KCNJ2)及多藥耐藥相關(guān)蛋白1(MRP1/ABCC1)在小細(xì)胞肺癌(SCLC) 中的表達(dá)情況及兩者的相關(guān)性。方法采用實(shí)時(shí)定量PCR和蛋白印跡法檢測小細(xì)胞肺癌多藥耐藥細(xì)胞株H69AR及敏感株H69細(xì)胞中Kir2.1/KCNJ2及MRP1/ABCC1 mRNA和蛋白的表達(dá)水平，采用免疫組化EnVision兩步法檢測44 例SCLC組織中Kir2.1/KCNJ2和MRP1蛋白的表達(dá)水平；采用蛋白免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)檢測Kir2.1/KCNJ2與MRP1/ABCC1之間的相互作用。結(jié)果H69AR細(xì)胞株中Kir2.1/KCNJ2及MRP1/ABCC1 mRNA和蛋白的表達(dá)均顯著高于H69細(xì)胞株，二者均有顯著差異(P<0.05)；免疫組化結(jié)果表明SCLC組織中Kir2.1/KCNJ2和MRP1/ABCC1陽性表達(dá)率分別為47.7%(21/44) 和52.3%(23/44)，兩者表達(dá)在SCLC 中呈正相關(guān)(r=0.853，P<0.01); Kir2.1/KCNJ2與MRP/ABCC1在H69AR細(xì)胞內(nèi)可形成復(fù)合物。結(jié)論Kir2.1/KCNJ2與小細(xì)胞癌多藥耐藥有關(guān)。Kir2.1/KCNJ2和MRP1/ABCC1之間可能存在共同作用通路。Kir2.1/KCNJ2可能通過調(diào)控MRP1/ABCC1的表達(dá)促進(jìn)SCLC多藥耐藥的發(fā)生。

小細(xì)胞肺癌; 內(nèi)向整流鉀通道; 多藥耐藥相關(guān)蛋白1; 免疫共沉淀

肺癌的發(fā)病率已居世界惡性腫瘤首位，近年來,我國肺癌發(fā)病率及病死率也持續(xù)升高。據(jù)世界衛(wèi)生組織預(yù)測,到2025年,我國肺癌患者數(shù)將居世界之首[1]。根據(jù)其組織學(xué)特點(diǎn)，肺癌可分為小細(xì)胞肺癌(small-cell lung cancer，SCLC)和非小細(xì)胞肺癌(non-small-cell lung cancer，NSCLC)2種，SCLC發(fā)病率占原發(fā)性肺癌的15%左右。目前，人們對NSCLC的研究取得諸多進(jìn)展，但迄今為止對SCLC 的研究卻較少有重大突破。SCLC的治療手段主要為藥物治療，但由于其極易發(fā)生多藥耐藥性(multidrug resistance，MDR)[2-3]，從而導(dǎo)致化療失敗，復(fù)發(fā)率高，臨床預(yù)后差，2年存活率不足5%，90%的患者多在確診后5年內(nèi)死亡。因此，SCLC的化療耐藥性成為近年來SCLC臨床治療亟需解決的問題之一。國內(nèi)外對腫瘤MDR 的發(fā)生機(jī)制進(jìn)行了廣泛的研究,但目前仍有諸多環(huán)節(jié)尚未明確。最近有關(guān)離子通道與腫瘤之間的關(guān)系引起了越來越多的注意，離子通道中與細(xì)胞增殖和腫瘤密切相關(guān)的是鉀通道[4]，我們前期運(yùn)用高通量基因芯片證實(shí)[5-6]，部分鉀通道，如內(nèi)向整流鉀通道2.1(inward rectifying potassium channel 2.1, Kir2.1/KCNJ2)在小細(xì)胞肺癌耐藥細(xì)胞株中高表達(dá)，但其機(jī)制未明。本研究擬檢測Kir2.1/KCNJ2及多藥耐藥相關(guān)蛋白1(multidrug resistance-associated protein 1,MRP1/ABCC1)在小細(xì)胞肺癌組織及小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系H69/H69AR中的表達(dá)，分析二者的相關(guān)性，為探討小細(xì)胞肺癌多藥耐藥機(jī)制提供新的思路。

材 料 和 方 法

1材料

1.1標(biāo)本采集 收集2009 年11 月到2013 年1 月在我院經(jīng)病理證實(shí)的小細(xì)胞肺癌患者44例，并開始接受順鉑和依托泊苷的規(guī)范聯(lián)合化療。其中男性36例，女性8例，年齡40～73 歲，平均(58.9±11.4) 歲，小細(xì)胞肺癌分期采用美國退伍軍人醫(yī)院和國際肺癌研究會(huì)(Veterans Administration Lung Study Group)制定的VA分期，分為局限期(limited disease，LD) 和廣泛期(extensive disease，ED)。局限期20例，廣泛期24例。

1.2試劑 鼠抗人Kir2.1及MRP1單克隆抗體為Sigma產(chǎn)品，Ⅱ抗為基因(上海)生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，ECL為福建邁新生物技術(shù)有限公司。Trizol RNA試劑盒、RT試劑盒和Taq酶PCR試劑盒均購自Invitrogen。

1.3儀器 Thermo超低溫冰箱，Leica全自動(dòng)包埋機(jī)，Leica切片機(jī)，Leica免疫組化染色儀，醫(yī)用微波爐，IX71倒置顯微鏡(Olympus)，Bio-Rad電泳儀，Tanon濕電轉(zhuǎn)膜儀轉(zhuǎn)印槽，F(xiàn)ACSCalibur流式細(xì)胞儀，羅氏LC480PCR擴(kuò)增儀和Stratagene熒光定量PCR儀。

2方法

2.1免疫組化檢測 采用EnVision法，切片脫蠟至水，置入0.01 mol/L枸櫞酸抗原修復(fù)液中，微波高溫修復(fù)10 min，然后按照公司提供的標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行操作，進(jìn)行顯色，常規(guī)脫水，透明，封片，用公司提供的陽性對照片為對照，用PBS替代Ⅰ抗為陰性對照。按染色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞數(shù)評分：(1)染色強(qiáng)度：0為陰性，1為弱陽性，2為陽性，3為強(qiáng)陽性；(2)陽性細(xì)胞數(shù)：0為無陽性細(xì)胞，1為陽性細(xì)胞數(shù)低于25%，2為陽性細(xì)胞數(shù)25%～50%，3為陽性細(xì)胞數(shù)超過50%。(1) 和 (2) 之和即為最后得分，得3～6分者評為免疫組織化學(xué)染色陽性。

2.2組織標(biāo)本及H69、H69AR細(xì)胞總RNA的提取 組織標(biāo)本立即采用Trizol 試劑分別提取細(xì)胞總RNA，并于-80℃冰箱保存。H69及H69AR 細(xì)胞總RNA 提取使用RNeasy Mini Kit (Qiagen) ，按照說明書提取，變性后通過瓊脂凝膠電泳法評價(jià)RNA 質(zhì)量，并通過分光光度計(jì)測量濃度。從每個(gè)樣品中取2 μg使用cDNA 合成試劑盒(寶生物科技公司) 用于合成cDNA，cDNA 的合成使用逆轉(zhuǎn)錄酶及9-nt 隨機(jī)引物。

2.3Real-time PCR檢測 基因的引物由Invitrogen 公司合成。使用cDNA合成試劑盒合成cDNA，取10 μL PCR 反應(yīng)試劑進(jìn)行PCR 反應(yīng)，反應(yīng)試劑包括1 μL RT product、1×PCR Master Mix、15 nmol/L 正向引物和15 nmol/L 負(fù)向引物。引物由生工生物(上海)有限公司合成。用先前提取的H69及H69AR細(xì)胞mRNA，取2 μg RNA 進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，后各取7.5 μL行PCR 反應(yīng)，以GAPDH作為內(nèi)參照。KCNJ2 上游引物為5’-GGT GTG TGT GTC TTC ACC GAA C-3’，下游引物5’-CAA TTG GGC ATT CAT CCG TGA C-3’，擴(kuò)增片段大小為574 bp ;ABCC1上游引物5’-GAG CAA AGA CAA TGC GAT CAA GCT GAT G-3’，下游引物5’-GAC AAT CGG ATC GCG CTG ATG AAC GG-3’，擴(kuò)增片段大小為504 bp。內(nèi)參照GAPDH上游引物5’-GGA AGG ACT CAT GAC CAC AGT CC-3’，下游引物5’-TCG CTG TTG AAG TCA GAG GAG ACC-3’，擴(kuò)增片段大小為204 bp。PCR 反應(yīng)體系為50 μL，反應(yīng)條件為: 95 ℃ 預(yù)變性5 min，94 ℃ 30 s，55 ℃ 40 s，72 ℃ 1 min,35個(gè)循環(huán)，72 ℃ 10 min。 反應(yīng)結(jié)束后確認(rèn)real-time PCR的擴(kuò)增曲線和熔解曲線，進(jìn)行PCR定量時(shí)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線?；虻谋磉_(dá)量=2-ΔΔCt,ΔΔCt=(待測樣品目的基因的Ct平均值-待測樣本看家基因的Ct平均值)-(對照樣品的目的基因的Ct平均值-對照樣本看家基因的Ct平均值)。

2.4Western blotting 檢測 分別收集H69及H69AR細(xì)胞的蛋白質(zhì)，采用BCA法進(jìn)行蛋白質(zhì)定量后，取80 μg 蛋白質(zhì)樣品經(jīng)15%SDS-PAGE 分離、轉(zhuǎn)膜后用5%牛血清白蛋白封閉2 h。依次加入Ⅰ抗4 ℃孵育過夜，加入Ⅱ抗在37 ℃孵育2 h，以GAPDH作為內(nèi)參照。

2.5免疫共沉淀 用4 ℃預(yù)冷的PBS洗滌細(xì)胞2次，最后1次吸干PBS； 加入預(yù)冷的RIPA Buffer(1 mL/100 μg組織), 在冰上充分研磨。把研磨液轉(zhuǎn)移到1.5 mL EP管中，4 ℃，14 000×g離心15 min，立即將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中。取出60 μL上清用作SDS-PAGE電泳。其余上清加入抗體，4 ℃混勻過夜或室溫1 h。用PBS洗2遍Protein A 瓊脂糖珠，5 000 r/min離心30 s，收集沉淀，然后用PBS配制成50%濃度，剪掉槍尖部分，避免在涉及瓊脂糖珠的操作中破壞瓊脂糖珠。加入100 μL Protein A瓊脂糖珠來捕捉抗原抗體復(fù)合物，4 ℃緩慢搖動(dòng)過夜或室溫1 h。5 000 r/min離心30 s，把瓊脂糖珠-抗原抗體復(fù)合物沉淀下來，上清保存至新的離心管，取出60 μL作SDS-PAGE電泳。 用500 μL預(yù)冷的PBS洗沉淀，5 000 r/min離心30 s，棄上清，洗5遍。用100 μL 0.1 mol/L甘氨酸(pH 2.8)將瓊脂糖珠-抗原抗體復(fù)合物懸起，輕輕混勻，離心，取上清。將樣品加入1/10的1 mol/L Tris-HCl(pH 8.0)中和緩沖液，使蛋白穩(wěn)定。然后進(jìn)行Western blotting檢測(基本步驟同前)。

3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 13.0 統(tǒng)計(jì)軟件處理，各組間率的差異采用2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)分析，數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，組間均數(shù)比較用t檢驗(yàn)，以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1Kir2.1/KCNJ2及MRP1/ABCC1蛋白表達(dá)與SCLC臨床病理特征的關(guān)系

Kir2.1/KCNJ2 蛋白的陽性信號主要定位于細(xì)胞漿，MRP1/ABCC1陽性信號定位于胞膜，見圖1、2；Kir2.1/KCNJ2及MRP1/ABCC1表達(dá)均與患者年齡、性別、吸煙情況無關(guān)(P>0.05)；Kir2.1/KCNJ2在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中陽性表達(dá)率為46.15% (12/26)，略低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的50.0%(9/18)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后臨床分期為廣泛期組陽性Kir2.1/KCNJ2表達(dá)率為87.5%(15/24)，高于局限期組的57.5%(6/20)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組MRP1/ABCC1陽性表達(dá)率為53.84%(14/26)，高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的44.44%(8/18)，但差異亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后臨床分期為廣泛期組MRP1/ABCC1陽性表達(dá)率為75.0%(18/24)，高于局限期的25.0% (5/20)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

Figure 1. The expression of Kir2.1/KCNJ2 in SCLC tissues(EnVision, ×400);A:positive expression;B:negative control.

圖1Kir2.1/KCNJ2在SCLC組織中的表達(dá)

Figure 2. The expression of MRP1/ABCC1 in SCLC tissues(EnVision,×400);A:positive expression;B:negative control.

圖2MRP1/ABCC1在SCLC組織中的表達(dá)

2Kir2.1/KCNJ2與MRP1/ABCC1的相關(guān)性

在44 例SCLC 組織中，Kir2.1/KCNJ2 蛋白陽性表達(dá)率為47.7%(21/44)，MRP1/ABCC1陽性表達(dá)率為52.3%(23/44)，兩者在組織中表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.853，P<0.01)，見表2。

3Real-timePCR檢測結(jié)果

H69及H69AR細(xì)胞株中均可見Kir2.1/KCNJ2及MRP1/ABCC1 mRNA表達(dá)，且H69AR細(xì)胞Kir2.1/KCNJ2及MRP1/ABCC1 mRNA表達(dá)顯著高于H69細(xì)胞，見圖3A。

表1Kir2.1/KCNJ2、MRP1/ABCC1蛋白表達(dá)與SCLC患者臨床病理特征的關(guān)系

Table 1. The relationship between the expression of Kir2.1/KCNJ2 and MRP1/ABCC1 and the clinicopathological characteristics in SCLC patients

ClinicopathologicalfeaturenKir2.1/KCNJ2MRP1/ABCC1PositiveNegativePPositiveNegativePSex>0.05>0.05 Male3617(16.19%)1919(16.66%)17 Femal84(3.80%)44(3.51%)4Age(year)>0.05>0.05 <55136(5.71%)78(3.51%)5 ≥553115(14.28%)1615(13.15%)16Smokinghistory>0.05>0.05 Yes3919(18.09%)2019(16.66%)20 No52(1.90%)34(3.51%)1Lymphnodemetastasis>0.05>0.05 Yes2612(11.43%)1414(12.28%)12 No189(8.57%)98(7.02%)10Clinicalstage<0.05<0.05 Limiteddisease206(5.71%)145(4.38%)15 Extensivedisease2415(14.28%)918(15.79%)6

表2肺小細(xì)胞癌組織中Kir2.1/KCNJ2及多藥耐藥蛋白MRP1/ABCC1表達(dá)之間的關(guān)系

Table 2. The correlation between the expression of Kir2.1/KCNJ2 and the expression of MRP1/ABCC1 in SCLC tissues (n=44)

Kir2.1/KCNJ2MRP1/ABCC1NegativePositiveStronglypositiveNegative2025Positive114Stronglypositive038

r=0.853，P<0.01.

4Westernblotting檢測結(jié)果

耐藥株H69AR中的Kir2.1/KCNJ2與MRP1/ABCC1蛋白的表達(dá)均顯著高于敏感株H69，見圖3B。

5免疫共沉淀驗(yàn)證KCNJ2與ABCC1在體內(nèi)相互作用

KCNJ2與ABCC1在H69AR細(xì)胞株中的結(jié)合度顯著高于H69細(xì)胞株中的結(jié)合度，見圖4，提示KCNJ2與ABCC1有可能相互作用參與小細(xì)胞肺癌多藥耐藥。

Figure 3. Expression of Kir2.1/KCNJ2 and MRP1/ABCC1 mRNA (A) and protein (B) levels in H69 and H69AR cell lines. Mean±SD.n=5.**P<0.01vsH69.

圖3Kir2.1/KCNJ2及MRP1/ABCC1mRNA在H69及H69AR細(xì)胞株中的表達(dá)

Figure 4. Interaction of ABCC1 (A) and KCNJ2 (B) in cell system identified by co-immunoprecipitation assays.Mean±SD.n=5.**P<0.01vsH69.

圖4免疫共沉淀方法驗(yàn)證KCNJ2與ABCC1在H69和H69AR細(xì)胞株中相互作用

討 論

臨床上小細(xì)胞肺癌患者的治療以化療為主，但多次化療后常出現(xiàn)MDR，進(jìn)而出現(xiàn)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。MDR的發(fā)生機(jī)制非常復(fù)雜，多藥耐藥相關(guān)蛋白、具有外排泵作用的膜蛋白如ABC(ATP-binding cassette)家族成員P-糖蛋白、肺耐藥蛋白等過度表達(dá)，細(xì)胞內(nèi)酶系統(tǒng)如拓?fù)洚悩?gòu)酶、谷胺酰轉(zhuǎn)肽酶等異常,抗凋亡基因bcl-2、c-myc等過度表達(dá)以及細(xì)胞修復(fù)系統(tǒng)增強(qiáng)都是可能的原因。目前對于小細(xì)胞肺癌的多藥耐藥尚未找到有效的解決辦法，而多藥耐藥的產(chǎn)生正是小細(xì)胞肺癌治療效果差的主要原因。因此，試圖通過干擾或抑制與耐藥有關(guān)的基因的表達(dá)，逆轉(zhuǎn)其耐藥性，是臨床治療小細(xì)胞肺癌努力方向[7-8]。目前尚未找到理想靶點(diǎn)逆轉(zhuǎn)小細(xì)胞肺癌多藥耐藥。鉀離子通道存在于多種細(xì)胞中，是細(xì)胞膜電位的重要決定因子，通過控制鉀離子通道的開放與關(guān)閉從而改變膜電位，引起鈣離子等信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的改變；基礎(chǔ)研究已經(jīng)表明[9-11]，腫瘤細(xì)胞上有多種不同的鉀離子通道，這些鉀離子通道對調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖和凋亡起重要作用，其機(jī)制是通過多種通路來參與。有實(shí)驗(yàn)證實(shí)，鉀通道阻斷劑能抑制腫瘤增殖。另外，一些鉀離子通道在某些腫瘤細(xì)胞膜上有特異性高表達(dá)，從而成為抗腫瘤作用新靶點(diǎn)的依據(jù)[12]。

1989年P(guān)ancrazio等[13]首先發(fā)現(xiàn)鉀離子通道與小細(xì)胞肺癌耐藥的相關(guān)性，之后Cole等[14]及Jirsch等[15]亦進(jìn)行了類似的研究，Lam 等[16]的研究發(fā)現(xiàn)鉀離子通道電壓的改變與小細(xì)胞肺癌組織中多藥耐藥蛋白的表達(dá)有關(guān)，但其機(jī)制未明。之后未見相關(guān)報(bào)道。而關(guān)于鉀離子通道蛋白Kir2.1與小細(xì)胞肺癌的相關(guān)性研究則未見報(bào)道。Kcnj2基因定位于第17號染色體17q23[17]，其編碼蛋白為內(nèi)向整流鉀通道Kir2.1， Kir2.1與腫瘤的相關(guān)性的研究報(bào)道不多，且均未涉及機(jī)制方面的研究。有研究者運(yùn)用基因芯片篩選差異表達(dá)基因時(shí)發(fā)現(xiàn)，Kir2.1/KCNJ2在甲狀腺乳頭狀癌中高表達(dá)[18]， 之后的研究也得出類似結(jié)論[19-20]。我們前期通過高通量芯片篩選小細(xì)胞肺癌耐藥細(xì)胞株和敏感細(xì)胞株中與耐藥有關(guān)的基因時(shí)發(fā)現(xiàn)，耐藥細(xì)胞株H69AR中KCNJ2的表達(dá)明顯增高[5]，為了證實(shí)基因芯片的結(jié)果，本研究運(yùn)用免疫組化、real-time PCR和Western blotting方法從基因和蛋白水平檢測小細(xì)胞肺癌敏感細(xì)胞株H69及耐藥細(xì)胞株H69AR中KCNJ2和ABCC1的表達(dá)，運(yùn)用免疫共沉淀檢測KCNJ2和ABCC1二者的相關(guān)性，同時(shí)運(yùn)用免疫組化檢測了44例小細(xì)胞肺癌組織中KCNJ2和ABCC1蛋白的表達(dá)，結(jié)果表明，KCNJ2與ABCC1之間存在明顯的正相關(guān)關(guān)系，說明KCNJ2可能通過ABCC1參與了小細(xì)胞肺癌的多藥耐藥。需要說明的是，本研究采用H69細(xì)胞系是從1例確診為小細(xì)胞肺癌未經(jīng)過治療的男性患者的胸腔積液培養(yǎng)獲得，經(jīng)反復(fù)誘導(dǎo)耐藥轉(zhuǎn)化為H69AR細(xì)胞，證實(shí)對阿霉素及拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ抵抗，是目前國際上公認(rèn)的多藥耐藥的小細(xì)胞肺癌模型。MRP1是從耐多柔比星(阿霉素) 小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系H69/H69AR中發(fā)現(xiàn)的一種ABC超家族轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，研究證實(shí)，H69AR細(xì)胞MRP1/ABCC1高表達(dá)[21-22]。在耐藥細(xì)胞株中基因表達(dá)水平高于敏感細(xì)胞將近100倍。因此，KCNJ2參與小細(xì)胞肺癌多藥耐藥的機(jī)制可能是KCNJ2可上調(diào)MRP1/ABCC1的表達(dá)，從而增強(qiáng)小細(xì)胞肺癌多藥耐藥性。另外，Yamaguchi等[23]的一項(xiàng)研究結(jié)果顯示，甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1 (thyroid transcription factor-1，TTF-1)在肺腺癌的發(fā)生發(fā)展中扮演重要角色，巧合的是，Kir2.1/KCNJ2與TTF-1都恰好在肺腺癌、甲狀腺癌及肺小細(xì)胞肺癌中高度表達(dá)，提示KCNJ2還有可能通過其它通路影響小細(xì)胞肺癌多藥耐藥，其機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。

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ClinicalsignificanceofKir2.1/KCNJ2andMRP1/ABCC1proteinexpressioninsmall-celllungcancer

LIU Huan-xin1,2, WU Xiao-xia2, ZHANG yan2,GUO Lin-lang1

(1DepartmentofPathology,ZhujiangHospital,SouthernMedicalUniversity,Guangzhou510282,China;2DepartmentofPathology,GuangdongProvincialCorpsHospitalofChinesePeople’sArmedPoliceForces,Guangzhou510507,China.E-mail:linlang@yahoo.com)

AIM: To investigate the expression of inward rectifying potassium channel 2.1 (Kir2.1/KCNJ2) and multidrug resistance-associated protein 1 (MRP1/ABCC1) in small-cell lung cancer (SCLC), and the correlation between them.METHODSThe mRNA and protein expression of MRP1/ABCC1 and Kir2.1/KCNJ2 in H69 and H69AR cell lines was detected by real-time PCR and Western blotting. Immunohistochemistry (EnVision) method was used to detect the expression of Kir2.1/KCNJ2 and MRP1/ABCC1 proteins in 44 cases of SCLC tissues. The interaction of Kir2.1/KCNJ2 with MRP1/ABCC1 was tested by co-immunoprecipitation (co-IP).RESULTSThe mRNA and protein expression of MRP1/ABCC1 and Kir2.1/KCNJ2 in H69AR cells was all significantly higher than that in H69 cells (P<0.05). The positive expression rates of Kir2.1/KCNJ2 and MRP1/ABCC1 in the 44 cases of SCLC tissues were 47.7% (21/44) and 52.3% (23/44), respectively. A positive correlation was found between the expression of Kir2.1/KCNJ2 and MRP1/ABCC1 in SCLC tissues (r=0.853,P<0.01). Co-IP results showed that Kir2.1/KCNJ2 could bind MRP1/ABCC1 in H69AR cells.CONCLUSIONKir2.1/KCNJ2 is related to the multidrug resistance of SCLC. Kir2.1/KCNJ2 and MRP1/ABCC1 may have common function roles. Therefore, Kir2.1/KCNJ2 may promote the multidrug resistance of SCLC by regulating the expression of MRP1/ABCC1.

Small-cell lung cancer; Inwardly rectifying potassium channels; Multidrug resistance-associated protein 1; Co-immunoprecipitation

R743.2

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2013.11.004

1000- 4718(2013)11- 1940- 06

2013- 03- 25

2013- 10- 22

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.81172241)

△通訊作者 Tel: 020-84313872; E-mail: linlang@yahoo.com