高效液相色譜法測定阿奇霉素片中阿奇霉素含量*

韓振爽，李瑋瑋

(天津懷仁制藥有限公司，天津 300385)

阿奇霉素片抗嗜肺軍團菌、流感嗜血桿菌，對革蘭陰性菌具有更高的抗菌活性，對肺炎支原體的作用為大環(huán)內(nèi)酯類中最強者，不良反應(yīng)輕，輕、中度肝腎功能不良者可以應(yīng)用。本實驗采用高效液相色譜法測定阿奇霉素片的含量，結(jié)果準(zhǔn)確，精密度高，重現(xiàn)性好。

1 儀器與試藥

Waters 2690高效液相色譜儀(美國Waters公司)，Waters 2487紫外檢測器(美國Waters公司)。KQ－100B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。阿奇霉素片(天津懷仁制藥有限公司，批號110101、110102、110103)。乙腈為色譜純，磷酸氫二鉀、磷酸氫二鈉、鹽酸與乙醇為分析純，水為純化水。阿奇霉素對照品(法國進口，批號CS30026－F67081)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱Thermo C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相磷酸鹽緩沖液(取0.05 mol/L 磷酸氫二鉀溶液，用20%的磷酸溶液調(diào)節(jié)pH至8.2)－乙腈(45∶55)為流動相，流速為1.0 ml/min，檢測波長為210 nm，進樣量為 50 μl。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取阿奇霉素對照品適量，加乙腈溶解并定量稀釋制成每1 m l中約含阿奇霉素1 mg的溶液，作為對照溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品10片，研細(xì)粉，精密稱取適量，加乙腈溶解并定量稀釋制成每1 ml中約含阿奇霉素1 mg的溶液，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 按處方比例和工藝制備不含阿奇霉素的陰性樣品，并按供試品溶液的制法制成陰性對照溶液，備用。

2.3 專屬性考查 在上述色譜條件下，精密吸取對照溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各50 μl注入液相色譜儀，阿奇霉素的保留時間為26.881 min，樣品色譜圖中，在與對照品溶液色譜圖相應(yīng)保留時間處，有相同色譜峰，而陰性樣品在此處無干擾，色譜圖見圖1。

2.4 線性關(guān)系考查 精密稱取阿奇霉素對照品適量，配成濃度為 0.60、0.80、1.0、1.2 和 1.4 mg/ml的系列溶液，分別精密吸取50 μl注入液相色譜儀，以濃度(C)對峰面積(Y)進行線性回歸，得回歸方程 Y=2965.6 C+9005.9(r=0.9998)，結(jié)果表明阿奇霉素在0～1.4 mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖1 對照品(A)供試品(B)陰性對照(C)HPLC色譜圖

2.5 重復(fù)性試驗 取同一對照品溶液，在上述色譜條件下，連續(xù)進樣6次，RSD為0.58%(n=6)，結(jié)果表明方法的重現(xiàn)性良好。

2.6 溶液穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，在室溫下放置，分別于0、2、4、6和8 h時分別按上述色譜條件測定，結(jié)果表明，供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定性良好，峰面積的RSD為1.40%。

2.7 加樣回收率試驗 精密稱取空白混合輔料適量，加入阿奇霉素對照品分別做80%、100%和120%三個濃度的回收率，每個濃度做3份樣品共9份，按上述色譜條件下測定含量，計算回收率，平均回收率為99.6%，RSD 為 0.56%(n=9)，結(jié)果見表 1。

表1 加樣回收試驗結(jié)果

2.8 樣品測定 取3批樣品按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，精密吸取對照溶液和供試品溶液各50 μl分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。用外標(biāo)法計算樣品的含量分別為 0.2455、0.2485 和 0.2465 mg/片。

3 討論

3.1 適用性試驗 取阿奇霉素系統(tǒng)適用性對照品適量，加乙腈溶解并稀釋制成每1 ml中含10 mg的溶液，取50 μl注入液相色譜儀，色譜圖與標(biāo)準(zhǔn)圖譜一致。

3.2 耐用性試驗 本方法采用［Thermo C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm)、CAPCELL PAK MGⅡ C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm)、SMA C18(250 mm × 4.6 mm，5 μm)］不同型號色譜柱，測定同批樣品(110101)含量，測定結(jié)果基本一致。本方法與抗生素微生物檢定法相比專屬性強，靈敏度高，準(zhǔn)確度和重復(fù)性好，省時方便，可以作為控制阿奇霉素含量測定的有效手段。