蒙藥協(xié)日嘎洗劑抑菌實驗研究

都日娜，烏日娜

協(xié)日嘎洗劑的原處方來源于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準蒙藥分冊》[1]，其處方由姜黃、黃柏、梔子、蒺藜四味藥材組成，具有利尿、瀉濕熱的作用。蒙醫(yī)臨床應用協(xié)日嘎四味湯散治療小便閉止、尿頻、尿急。據(jù)文獻報道協(xié)日嘎四味湯散中4種藥材的有效成分具有良好的抗菌、抗炎和修復創(chuàng)傷的功效[2,3]，因此我們將其改制成外用洗劑，對臨床常見真菌、細菌進行抑菌試驗，觀察其抑菌作用，篩選出最佳的抑菌濃度，為臨床治療感染性皮膚病提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 菌種 ①實驗用醫(yī)學真菌：白念珠菌（編號ATCC11006）、紅色毛癬菌、石膏樣小孢子菌、羊毛樣小孢子菌、犬小孢子菌、馬拉色菌屬（編號CMCC(F)1/17a），其中白念珠菌為內(nèi)蒙古醫(yī)學院微生物實驗室提供的標準菌株；紅色毛癬菌、石膏樣小孢子菌、羊毛樣小孢子菌及犬小孢子菌為內(nèi)蒙古醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院皮膚科提供的臨床菌株；馬拉色菌屬為中國醫(yī)學科學院皮膚病研究所提供的標準菌株。②實驗用醫(yī)學細菌：金黃色葡萄球菌(編號26003)、炭疽桿菌（編號63601）、白色葡萄球菌（編號26101）、變形桿菌（編號49001）、綠膿桿菌（編號為10102）、耐藥大腸桿菌，其中耐藥大腸桿菌由內(nèi)蒙古醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院檢驗科提供；金黃色葡萄球菌、炭疽桿菌、白色葡萄球菌、變形桿菌、綠膿桿菌為內(nèi)蒙古醫(yī)學院微生物實驗室提供的標準菌株。

1.1.2 培養(yǎng)基 淺部真菌及白念珠菌選用沙氏麥芽糖蛋白胨瓊脂基（沙堡弱培養(yǎng)基），馬拉色菌屬采用LNA培養(yǎng)基，細菌采用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。

1.1.3 藥物 實驗用蒙藥協(xié)日嘎洗劑（內(nèi)蒙古醫(yī)學院藥學院藥劑實驗室制備），對照液采樂洗劑（西安楊森制藥有限公司），無水乙醇（天津化學試劑廠分析醇），青霉素G陽標（杭州天和微生物試劑有限公司）和慶大霉素GM陽標（北京天壇藥物生物技術(shù)開發(fā)公司）均為標準藥敏紙片，單位均為10 μg。

1.2 實驗方法

1.2.1 抑制真菌實驗 ①藥物稀釋法（試管法）[4]：制備含協(xié)日嘎洗劑30%、20%、10%、5%的培養(yǎng)基，每組30例；pH值為5，試管分裝高壓滅菌，凝成斜面，備用。②分別設置空白對照組（未加藥）、采樂洗劑對照組（30%）和20%乙醇對照組，每組30例。③進行隨機抽樣[5]后，接種菌株。④抑制真菌實驗結(jié)果：白念珠菌培養(yǎng)48 h后觀察，馬拉色菌屬培養(yǎng)72 h后觀察，其他菌培養(yǎng)14 d后觀察。

1.2.2 抑制細菌實驗 ① 菌種接種[6]：接種環(huán)將新鮮細菌各取米粒大小分別劃線接種于含營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的平皿內(nèi)，每組細菌培養(yǎng)30例。② 管碟法[6]：每個平皿分別放置青霉素G（10 μg）標準藥敏紙片、慶大霉素GM（10 μg）標準藥敏紙片及兩個直徑為5 mm的滅菌不銹鋼小管，管內(nèi)分別加入200 μl的原藥液和20%乙醇對照液，置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中。③ 抑制細菌實驗結(jié)果：24 h后觀察結(jié)果，用游標卡尺測量抑菌環(huán)直徑并記錄。

1.3 統(tǒng)計學方法

數(shù)據(jù)采用PEMS 3.1軟件包進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料兩個率之間的比較用χ2檢驗。數(shù)據(jù)描述采用±s，計量資料多個樣本均數(shù)比較用方差分析，t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 抑制真菌實驗結(jié)果

協(xié)日嘎洗劑不同濃度組與空白對照組、20%乙醇對照組相比較，對羊毛樣小孢子菌、石膏樣小孢子菌、犬小孢子菌、紅色毛癬菌、白念珠菌、馬拉色菌屬的抑制作用明顯，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；協(xié)日嘎洗劑組與采樂洗劑組相比較，對上述4種真菌抑制作用差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；5%、10%、20%、30%協(xié)日嘎洗劑組間對上述真菌抑制作用比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），說明不同濃度的協(xié)日嘎洗劑抑菌作用無差異（表1）。

2.2 抑制細菌實驗結(jié)果

抑制革蘭陰性桿菌實驗結(jié)果顯示：協(xié)日嘎洗劑對綠膿桿菌有抑制作用，但抑制作用較慶大霉素弱，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；協(xié)日嘎洗劑組對變形桿菌、耐藥大腸桿菌無效；20%乙醇對照組對實驗菌株均無效（表2）。

抑制革蘭陽性菌實驗結(jié)果顯示：協(xié)日嘎洗劑組對金黃色葡萄球菌、炭疽桿菌、白色葡萄球菌有抑制作用，但抑制作用較青霉素弱，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；20%乙醇對照組對實驗菌株均無效（表3）。

表2 協(xié)日嘎洗劑與慶大霉素抑菌環(huán)直徑比較 （±s，mm）

表2 協(xié)日嘎洗劑與慶大霉素抑菌環(huán)直徑比較 （±s，mm）

革蘭 陰性桿菌耐藥大腸桿菌 綠膿桿菌 變形桿菌200 μl協(xié)日嘎洗劑 0 13.17±0.65 0慶大霉素 0 23.53±0.83 15.28±1.48 20%乙醇對照 0 0 0組 別

表3 協(xié)日嘎洗劑與青霉素抑菌環(huán)直徑比較 （±s，mm）

表3 協(xié)日嘎洗劑與青霉素抑菌環(huán)直徑比較 （±s，mm）

組 別葡萄球菌炭疽桿菌白色葡萄球菌革 蘭 陽 性 菌金黃色200 μl協(xié)日嘎洗劑 12.27±0.51 12.98±0.61 12.91±0.44青霉素 34.12±0.73 26.77±0.75 30.62±1.05 20%乙醇對照 0 0 0

3 討論

協(xié)日嘎四味湯散是蒙藥經(jīng)典藥方，《中國藥典》、《蒙醫(yī)百科全書》、《蒙醫(yī)方劑學》均有記載，該藥的傳統(tǒng)劑型為湯散劑。蒙藥湯散具有制法簡便、療效明顯、費用低廉等特點，但服用量大，且口感差，服用困難，難以適應患者要求，尚有許多值得改進和提高之處。本實驗在蒙醫(yī)藥理論指導下，應用現(xiàn)代科學方法和先進的制劑技術(shù)進行化學成分的分析，并研究開發(fā)新的蒙藥劑型，將湯散改為洗劑。改變后協(xié)日嘎洗劑不但用藥方法簡便，而且局部用藥不經(jīng)肝、腎代謝，毒性及不良反應小，患者易接受，臨床易推廣，使傳統(tǒng)蒙藥揚長避短，這樣既保留了傳統(tǒng)方劑的功能，又擴展了原傳統(tǒng)蒙藥的治療范圍，并且適應時代的要求，使之更好地發(fā)揮蒙醫(yī)藥的作用，取得明顯的社會效益和經(jīng)濟效益。

表1 不同濃度協(xié)日嘎洗劑和采樂洗劑對6種真菌的抑菌作用

感染性皮膚病是皮膚科臨床常見的疾病，其發(fā)病率高、傳染性強、易復發(fā)等特點日益受到臨床醫(yī)生的重視。因此，我們所選的實驗用真菌菌種為臨床常見致病菌，采用藥物倍比稀釋法，選取30%、20%、10%、5%協(xié)日嘎洗劑實驗組和30%采樂洗劑對照組、20%乙醇對照組、空白對照組進行對比實驗。結(jié)果表明不同濃度的協(xié)日嘎洗劑均有抑菌作用，與采樂洗劑相比，抑制本實驗選定的6種真菌作用相當，因此我們將本實驗協(xié)日嘎洗劑的最佳抑菌濃度定為5%（0.023 5 g/ml），與高濃度協(xié)日嘎洗劑組相比，不僅生藥量少，且藥效相同。

抑制細菌實驗選用管碟法[6,7]，其具有載藥量大、濃度高、藥物不易被破壞等優(yōu)點。選定的實驗用菌種為引起細菌性皮膚病的臨床常見致病菌，結(jié)果顯示協(xié)日嘎洗劑對綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌、炭疽桿菌、白色葡萄球菌的抑制作用較弱。

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會. 中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準:蒙藥分冊 [M]. 赤峰: 內(nèi)蒙古科學技術(shù)出版社, 1998:87.

[2]布日額. 蒙藥材姜黃本草考證 [J]. 中藥材, 2007, 2(2):239-240.

[3]布日額. 蒙藥材黃柏的本草考證 [J]. 中藥材, 2007, 30(8): 1037-1038.

[4]占萍, 劉維達. 抗真菌藥物敏感性試驗方法的新進展 [J]. 中國真菌學雜志, 2007, 2(1):45-48.

[5]馬斌榮. 醫(yī)學統(tǒng)計學:隨機數(shù)字表[M]. 4版. 北京:人民衛(wèi)生出版社, 2006:263.

[6]林雪玲. 黃連解毒散超細微粉藥代動力學研究與體外抑菌試驗 [J]. 福建農(nóng)林大學學報, 2006, 10(3):35-36.

[7]李志偉. 蒙藥開發(fā)現(xiàn)狀 [J]. 時珍國醫(yī)國藥, 2004, 15(2):128-129.