兒童尿液中8-羥基脫氧鳥苷水平的影響研究

侯小霞

兒童尿液中8-羥基脫氧鳥苷水平的影響研究

侯小霞

目的探討兒童尿液中8-羥基脫氧鳥苷水平與兒童生長發(fā)育的影響。方法采用雙抗體夾心法檢測尿液中8-羥基脫氧鳥苷的水平，同時收集兒童的身高、體重、頭圍、胸圍和年齡等指標。結果尿液中8-羥基脫氧鳥苷水平，男童和女童之間差異無統(tǒng)計學意義；7～8歲組兒童高于3～4歲組兒童，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結論高年齡兒童處于一個較高的氧化應激水平，并可能對兒童生長發(fā)育造成影響。

尿液；8-羥基脫氧鳥苷；年齡

在眾多的DNA氧化損傷中，8-羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)最常見，而且是一種高致突變性氧化損傷產(chǎn)物[1]。在體內(nèi)穩(wěn)定存在，為代謝的終產(chǎn)物，是目前國際上公認的一種新型的評價DNA 氧化損傷和氧化應激狀態(tài)的敏感指標和生物標志物。機體在氧化應激因素的作用下，出現(xiàn)8-OHdG水平的增高，提示機體發(fā)生DNA損傷增加[2]。本實驗以兒童為研究對象，采集兒童尿液，收集有關體格發(fā)育指標，檢測其中8-OHdG的水平，從而探討兒童尿液中8-OHdG水平與相關因素之間的關系。

1 資料與方法

1.1一般資料本研究中，男性兒童70名，女性兒童49名，均來自于同一地區(qū)幼兒園。在取得父母及幼兒園老師同意后，進行樣本采集和數(shù)據(jù)收集。

1.2尿液的采集和8-OHdG水平的檢測 取晨尿中段尿10 ml放入干凈的試管中，標記姓名和編號，-20 ℃冰箱保存。應用雙抗體夾心法測定標本中人8-OHdG水平。主要試劑：人8-OHdG水平檢測試劑盒(廈門慧嘉生物)；主要儀器：全波長酶標儀(美國熱電公司)，金屬恒溫加熱器(上?？蚌蝺x器設備有限公司)。用純化的人8-OHdG抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入人8-OHdG抗原，再與HRP標記的人8-OHdG結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人8-OHdG呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中人8-OHdG濃度。

1.3兒童體格發(fā)育指標及相關數(shù)據(jù)收集 收集兒童性別、年齡等指標，并進行身高(cm)、體重(kg)、頭圍(cm)和胸圍(cm)的檢測，收集數(shù)據(jù)。

1.4統(tǒng)計學方法 采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計分析，偏正態(tài)分布用中位數(shù)表示，均數(shù)比較用非參數(shù)檢驗(K-S、M-W檢驗)，相關因素分析使用Spearman等級相關分析，以α=0.05作為檢驗標準。

2 結果

兒童尿液中8-OHdG水平經(jīng)M-W檢驗表明，男、女童尿中8-OHdG值比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；兒童尿中8-OHdG水平隨著年齡的增大而增高，7～8歲組兒童高于3～4歲組兒童，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1和圖1。

兒童尿液中8-OHdG水平與兒童的身高、體重、頭圍和胸圍之間，經(jīng)相關性檢驗表明，無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

表1 不同年齡組兒童尿中8-OHdG比較

注：*P<0.05，與3～4歲組兒童8-OHdG水平比較差異具有統(tǒng)計學意義

圖1 不同年齡組兒童尿中8-OHdG比較

3 討論

本次研究中發(fā)現(xiàn)，兒童尿液中8-OHdG水平的平均值為412.38 ng/gCr，男、女童8-OHdG水平比較差異無統(tǒng)計學意義。根據(jù)兒童年齡分組并分析，實驗數(shù)據(jù)顯示，與3～4歲組相比，7～8歲組兒童尿中8-羥基脫氧鳥苷明顯增高，差異具有統(tǒng)計學意義。羥自由基和超氧陰離子能直接與DNA分子反應，導致DNA鏈斷裂、堿基修飾和DNA 蛋白交聯(lián)等氧化性DNA 損傷，其中最主要的致突變性損傷反應是鳥嘌呤上C8與-OH 結合，產(chǎn)生 8-OHdG[3]。尿液中8-OHdG 水平反映機體氧化應激水平，因此本研究提示隨著兒童年齡的增大，機體DNA損傷增高，與低年齡兒童相比，高年齡兒童處于一個較高的氧化應激水平，并可能對兒童生長發(fā)育造成影響。

[1] Arito Yamane, Takashi Kohno, Kohei Ito, et al.Differential ability of polymorphic OGG1 proteins to suppress mutagenesis induced by 8-hydroxyguanine in human cell in vivo. Carcinogenesis, 2004, 25(9) :1689-1694.

[2] Takiguchi M, Achanzar WE, Qu W, et al. Effects of cadmium on DNA-(Cytosine-5) methyltransferase activity and DNA methylation status during cadmium-induced cellular transformation. Exp Cell Res, 2003, 286(2):355-365.

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