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    高效液相色譜法測定維生素B1片中維生素B1的含量

    2013-10-19 09:23:00廣東省韶關市食品藥品檢驗所512028劉旺培嚴曉明陳華龍
    首都食品與醫(yī)藥 2013年22期
    關鍵詞:液相色譜儀附表乙腈

    廣東省韶關市食品藥品檢驗所(512028)劉旺培 嚴曉明 陳華龍

    維生素B1片為用于預防和治療維生素B1缺乏癥,如腳氣病、神經(jīng)炎、消化不良等藥品,口服吸收快,安全有效?,F(xiàn)行的國家藥品標準對維生素B1片中維生素B1的含量采用紫外分光光度法[1],精密度、靈敏度較差,自動化程度較低。之前《中國藥品標準》2004年05期有報道過高效液相色譜法測定維生素B1的含量,本文介紹高效液相色譜法測定維生素B1的含量,具有分析方法簡單、快速,分析結果準確、穩(wěn)定的特點。

    1 儀器與試藥

    日本島津LC-20A高效液相色譜儀,四元梯度泵,自動進樣器,Lc-solution工作站。維生素B1對照品(中國藥品生物制品檢定所提供,批號:100390-200502,105℃干燥2h后使用),維生素B1片樣品(2012年韶關市評價抽驗和監(jiān)督抽驗,批號:111101,120301,120601);甲醇和乙腈為色譜純,其他試劑為分析純。

    2 方法與結果

    2.1色譜條件 色譜柱:Diamonsil,C18(5μm,150mm×4.6mm);流動相:甲醇-乙腈-0.02mol/L庚烷磺酸鈉溶液(含1%三乙胺,用磷酸調節(jié)pH值至5.5,9∶9∶82);檢測波長為238nm;流速為1.0ml/min;進樣量:10μl。

    2.2線性范圍試驗 精密稱取維生素B1對照品適量,加水稀釋至含維生素B1為0.5026mg/ml的儲備液;分別吸取儲備液溶液1.0ml、2.0ml、3.0ml、5.0ml、10.0ml,置于10ml量瓶中,加水稀釋至刻度。分別取上述溶液10μl,注入液相色譜儀,記錄色譜圖見附圖,以濃度作橫坐標(X),以峰面積作縱坐標(Y),作線性回歸,得回歸方程。線性試驗結果表明:維生素B1在50.5~505μg/ml濃度范圍內具有良好的線性關系?;貧w方程分別為Y=18240X+39282,r=0.99999。

    2.3重復性試驗 取含維生素B1濃度分別為101μg/ml的對照品溶液,精密取10μl,注入液相色譜儀,重復進樣6次,計算峰面積的RSD分別為0.1%。結果顯示,本方法及儀器精密度良好。

    2.4溶液的穩(wěn)定性試驗 取同一維生素B1片樣品溶液,置于室溫下,分別于0、2、8、12、24h取樣測定,結果顯示,本品測定溶液在24h內測定,維生素B1的峰面積均無明顯改變,說明本測定溶液比較穩(wěn)定。

    附圖 色譜圖

    2.5回收率試驗 精密量取已知含量的供試品0.06670g(含維生素B1為9.513mg)置100ml容量瓶中,分別加入維生素B1(0.505mg/ml)對照品各1.6、2.0、2.4ml,加水稀釋至刻度,精密取10μl注入液相色譜儀,測定回收率,結果見附表1。

    2.6樣品含量測定 取3批樣品適量,分別加水稀釋至含維生素B1約100μg/ml溶液,進樣10μl,按外標峰面積法計算含量。結果顯示,3批樣品的含量均符合原標準的規(guī)定,見附表2。

    附表1 維生素B1加樣回收試驗結果

    附表2 樣品含量測定結果(標示量的%)

    3 討論

    3.1流動相和溶劑的選擇 維生素B1為水溶性物質,在水中溶解性很好,在中性水中相對穩(wěn)定,用水做溶劑既經(jīng)濟又環(huán)保,且便于操作。本文選用甲醇-乙腈-0.02mol/L庚烷磺酸鈉溶液(含1%三乙胺,用磷酸調節(jié)pH值至5.5,9∶9∶82)為流動相,維生素B1的峰形好,保留時間適中。

    3.2測定波長的選擇 以水為空白,用供試品溶液和對照品溶液在200~400nm波長范圍內掃描,測定結果顯示,維生素B1在238nm波長處有最大吸收,所以選擇238nm為測定波長,且在238nm波長處雜質吸收小。

    3.3結論 實驗證明,該研究提出的HPLC法測定維生素B1片的含量,選擇性、準確度及專屬性都比目前采用的紫外分光光度法檢測的高,且方法簡便、精密度高、重現(xiàn)性好,自動化程度高,可作為提高維生素B1片中維生素B1的含量的檢測方法。

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