鴨坦布蘇病毒病的流行特點及診斷技術

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(余姚市禽畜病防治研究所, 浙江余姚 315400)

2010年以來，我國部分省市的蛋鴨群突然出現了一種新的產蛋下降病，大量研究表明該病由黃病毒科黃病毒屬的一種新病毒引起[1-3]，由于該病毒的核苷酸序列與黃病毒屬恩他耶病毒群的蚊媒坦布蘇病毒印尼株和泰國株的同源性達87%～91%[2]，因此將其命名為鴨坦布蘇病毒。由于該病是近年來新發(fā)的一種傳染病，本文將鴨坦布蘇病毒病的流行特點及診斷要點簡要介紹如下，供參考。

1 流行特點

1.1傳播速度快 筆者在臨床診斷過程中發(fā)現鴨坦布蘇病毒在1～2 d內能感染鴨場的所有鴨子，一般1周左右即可感染一個養(yǎng)殖小區(qū)或聚養(yǎng)區(qū)的所有鴨群。一戶養(yǎng)鴨一旦發(fā)病，隨后以點為中心，快速向周邊區(qū)域擴散，數天內即可傳播周邊區(qū)域，特別是鴨棚密集區(qū)傳播更迅速，發(fā)病更嚴重。

1.2發(fā)病率高，死亡率較低 鴨場一旦發(fā)生該病，即可引起鴨群中的所有個體感染發(fā)?。话l(fā)病率幾近100%，但死亡率較低，產蛋鴨通常低于15%，多數在5%以下[4]；發(fā)病率和死亡率多與發(fā)病季節(jié)和養(yǎng)殖場的管理和繼發(fā)感染有關；部分養(yǎng)殖場的青年鴨和雛鴨發(fā)病后，死亡率可達20%左右。

1.3鴨為主要宿主 該病主要危害各種蛋鴨、肉用種鴨(櫻桃谷鴨、北京鴨等)和野鴨種鴨，也有少量20～30日齡幼鴨、種鵝和蛋雞發(fā)病的報道[1,5,6]。

2 臨床診斷要點

2.1采食量突然下降 該病發(fā)病后，2～3 d內鴨群采食量可突然降至原來的20%～30%，部分患鴨停食，一般需2周左右采食量才能逐漸恢復[7]。

2.2產蛋率急劇下降 伴隨著采食量的驟降，1周內產蛋率可從高峰期的90%～95%下降到5%～10%，甚至停止產蛋。一般在發(fā)病后20～30 d產蛋量開始恢復，大部分蛋鴨產蛋率可恢復到原來的90%左右[7,8]。

2.3病鴨體溫升高 患鴨排綠色稀糞，體溫升高，后期部分發(fā)病鴨可能出現腦炎樣神經癥狀，表現為行走、站立不穩(wěn)，頭頸抽搐，倒地不起，個別患鴨癱瘓、共濟失調。肉鴨發(fā)病以神經癥狀為主。

2.4種蛋受精率下降 患鴨發(fā)病期間種蛋受精率下降，病程1個月左右即可自行恢復，恢復程度與鴨群狀態(tài)、日齡相關，但不能達到產蛋高峰[8]。

3 病理診斷要點

病變特點之一 卵巢病變，表現為卵泡膜嚴重充血、出血，卵泡變形、液化、壞死，卵巢萎縮等(圖1 A、B)，后期卵泡破裂，出現卵黃性腹膜炎。

病變特點之二 肝臟腫大，表面有出血點或出血塊(圖1 C、D)。

病變特點之三 脾臟斑駁呈大理石狀，部分極度腫大出血并破裂(圖1 E、F)；胰腺有出血和壞死，心肌外觀蒼白，有白色條紋狀壞死，內膜出血。

4 實驗室診斷

鴨坦布蘇病毒的實驗室診斷主要有病毒分離、RT-PCR檢測、ELISA檢測等。

4.1病毒分離培養(yǎng) 這是檢測病鴨組織中鴨坦布蘇病毒最為準確的一種病原學診斷方法。采集病死鴨的出血卵泡膜和卵巢病料，按常規(guī)勻漿后反復凍融3次，經尿囊腔無菌接種9日齡SPF雞胚或10日齡鴨胚，接胚后4 d左右胚胎死亡，部分需連續(xù)傳代3代以上胚胎才出現死亡。死胚胚胎充血、出血，肝臟出血，腎臟有尿酸鹽沉積，尿囊液粘稠，并含有大量尿酸鹽[9]。

對分離病毒進行血凝試驗，鴨坦布蘇病毒無血凝活性；流感病毒、鴨副粘病毒、EDS則均有血凝活性。對分離病毒還可采用RT-PCR、血清中和試驗、免疫熒光等技術進行鑒定。

圖1 鴨坦布蘇病毒感染引起的卵巢、肝臟、脾臟病變

4.2RT-PCR技術 聚合酶鏈式反應(PCR)是一種體外基因擴增技術，該技術具有高度敏感性和特異性，為鴨坦布蘇病毒的快速診斷提供了敏感、快速、直觀的檢測方法，是目前最為實用的一種檢測方法。實驗室診斷可根據鴨坦布蘇病毒E基因設計的一對引物，目的片段大小為450 bp,應用該法可對臨床病例進行檢測，發(fā)現該法具有很好的特異性和敏感性。

Yan L等(2011)[10]針對鴨坦布蘇病毒Fengxian株E基因序列設計引物與TaqMan熒光探針，建立了鴨坦布蘇病毒的一種快速，準確和定量的TaqMan熒光探針實時定量PCR檢測方法，該法比常規(guī)PCR的靈敏度高100倍。Yun T(2012)[11]針對3 端非編碼區(qū)設計的MGB探針，建立了單步實時RT-PCR檢測方法，該法能檢測出20拷貝/μL的核酸，且與其他病原無交叉反應，檢測只需2 h左右,該法具有快速、敏感、特異的特點。

4.3酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)診斷技術 采用鴨坦布蘇病毒的全病毒和E基因原核表達蛋白作為包被抗原，建立檢測鴨坦布蘇病毒血清抗體的間接 ELISA 檢測方法。

筆者采用該法對寧波地區(qū)的多個發(fā)病鴨場發(fā)病后15～60 d的患鴨進行檢測，發(fā)現發(fā)病后15 d開始各鴨場患鴨的血清陽性率均達100%。經大量臨床檢測應用表明該法具有較好的特異性、敏感性和穩(wěn)定性。

5 鑒別診斷

5.1鴨流感的鑒別 鴨流感是由正粘病毒科的A型流感病毒引起的一種急性傳染病。該病可引起不同品種、不同日齡鴨群感染發(fā)病，但不同毒株的致病力差異較大，有的毒株自然感染時發(fā)病率和死亡率高達100%。患鴨主要表現為食欲減退或廢絕，喜飲水，排白色或帶淡黃色水樣稀糞?；鉴喚癯劣簦荒苷玖?，迅速脫水、消瘦，發(fā)病后2～3 d鴨群大批死亡，蛋鴨產蛋率大幅下降。急性死亡患鴨全身皮膚充血、出血，腹部皮下脂肪有散在性出血點。肝臟腫大，呈淡黃色，有出血斑，脾臟腫大、出血，表面有灰白色壞死點。胰充血、出血，且有點狀壞死、液化，心冠脂肪出血等特征性病變。

對鴨流感病毒分離后進行血凝試驗和血凝抑制試驗，有血凝活性，可被陽性血清抑制，據此可作出初步鑒別診斷，采用禽流感通用引物對分離病毒進行RT-PCR擴增[12]，可確診鴨流感。

5.2鴨產蛋下降綜合征的鑒別 鴨產蛋下降綜合征是由鴨腺病毒感染引起的一種疾病，該病主要引起蛋(種)鴨發(fā)病，一般病鴨無明顯癥狀，采食量稍有減少，主要表現為產蛋下降，蛋鴨產蛋率可降至產蛋高峰期的50%左右，期間軟殼蛋、薄殼蛋和畸形蛋大量增加，一般不引起患鴨死亡。病鴨主要病變在卵巢，表現為卵泡充血、出血、萎縮、壞死，其他組織臟器則無明顯病變。

對鴨腺病毒的鑒別診斷可采集病鴨血清進行血凝抑制試驗或采集病料進行病毒分離試驗，發(fā)病鴨血清抗體效價很高，分離的鴨腺病毒有血凝活性；鴨坦布蘇病毒則無血凝活性，據此可作出鑒別診斷，也可直接提取發(fā)病鴨病變卵巢或分離病毒的DNA，用產蛋下降綜合征引物進行PCR擴增，鑒定出鴨腺病毒。

5.3禽霍亂的鑒別 禽霍亂是由禽多殺性巴氏桿菌引起的一種細菌性傳染疾病，多發(fā)于青年鴨及成年鴨，發(fā)病率較低，但死亡率較高?；鉴喍喑市募〕鲅?，肝臟腫大，表面散布灰白色、針尖大小的壞死點等特征性病變，為禽霍亂與其他疾病的主要鑒別要點。

實驗室診斷，可采集患鴨肝臟涂片，進行瑞氏染色，鏡檢可見兩極著色的藍色桿菌，對患鴨用敏感抗生素治療有較好療效。

5.4鴨卵黃性腹膜炎的鑒別 鴨卵黃性腹膜炎是由大腸桿菌引起的一種細菌性疾病，是產蛋鴨群特別是高產期蛋鴨的一種常見多發(fā)性疾病。該病發(fā)病率較低，病鴨臨床表現為排綠色稀糞，嚴重者腳軟不能站立而伏臥于地面，驅動時能勉強爬動，常廢食死亡。

主要病變?yōu)楦鼓ぴ龊?，有大量黃白色滲出物附著于腹膜，卵泡充血、出血，絕大部分病例輸卵管中有大小不一、像煮熟樣的蛋白團塊滯留，部分卵泡破裂充滿整個腹腔。卵黃性腹膜炎引起的產蛋率較低，用敏感的抗菌藥物治療有較好的療效。

鴨坦布蘇病毒病是我國近年來出現的一種新發(fā)鴨病，目前通過臨床癥狀、剖檢病變和實驗室診斷能基本確診該病，基層獸醫(yī)工作者在家禽門診診斷時，應注意與鴨流感、產蛋下降綜合征等進行鑒別診斷，以有效制定合理的防控方案。

目前對該病尚無有效的防治措施。對發(fā)病鴨主要通過加強飼養(yǎng)管理，減少應激，合理應用抗生素防止繼發(fā)感染，鴨群可在發(fā)病后20～30 d左右自行恢復產蛋，產蛋率可恢復到原來的90%左右。

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