小檗堿抗炎活性研究

李宇馨，李瑞海

炎癥是機體對各種損害的防御性反應，炎癥過程中的細胞組織損傷對機體也可造成損害，許多常見病如慢性支氣管炎、肺炎、腸炎、腎炎、風濕病、外傷感染及各種傳染病等都是炎癥性疾病，具有炎癥病變的共同規(guī)律［1］。因此，研究抗炎作用的藥物，為預防及治療各種炎癥性疾病，具有重要的意義。

小檗堿(Berberine)又名黃連素，是由黃連、黃柏、三棵針等植物中提取的生物堿，其抗菌譜較廣、毒性和副作用較小，廣泛用于臨床治療細菌性痢疾和腸炎等。目前，研究發(fā)現(xiàn)小檗堿還具有抗心律失常和降壓、降血脂的作用，臨床上用于治療高血壓、糖尿病、心功能不全，調(diào)血脂，抗心律失常等［2］。

本實驗采用甲醛致小鼠足腫脹法觀察其對炎癥局部組織中前列腺素(PGE2)的影響，研究了小檗堿的抗炎作用，現(xiàn)報道如下［3］。

1 實驗材料

1.1 儀器 4孔恒溫水浴鍋(天津泰斯特儀器有限公司)、分光光度計(上海分析儀器廠)、電子天平 MettlerAE240、紫外掃描儀 ShimaduzuUV265FW。

1.2 藥品與試劑 生理鹽水、甲醇、甲醛、氫氧化鉀等為分析純(國藥集團);PGE2對照品(中國藥品生物制品檢定所);吲哚美辛、黃柏藥材(購自大連開發(fā)區(qū)保健大藥房);鹽酸小檗堿(實驗室分離純化，純度92%)。

1.3 實驗動物 昆明種小鼠，雌雄兼用，普通，體質(zhì)量18～22 g;由大連大學實驗動物中心提供。動物分性別飼養(yǎng)于室內(nèi)，室溫20～24℃，濕度55%～65%，喂標準顆粒飼料，自由飲水和攝食。

2 方法與結(jié)果

2.1 PGE2含量測定方法

2.1.1 標準曲線的繪制 精密稱取PGE2對照品0.2 mg，置100 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，充分振搖，得濃度為0.002 0 mg/mL的儲備液，備用。精密吸取 PGE2溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL于10 mL量瓶中，各精密加1.0 mol/L氫氧化鉀-甲醇液2 mL，置50℃水浴中加熱20 min，取出，放冷至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。同法做一空白，在278 nm波長處測定吸收度，見表1。得線性回歸方程:A=94.585 C+0.004 42，r=0.999 0。結(jié)果表明，PGE2在0.002 0～0.010 0 mg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

表1 線性范圍試驗結(jié)果

2.1.2 PGE2含量方法學考察試驗 ①精密度試驗:按照標準曲線制作方法，配制樣品溶液，分別于1d內(nèi)(n=5)和1周內(nèi)(n=5)進行測定，計算日內(nèi)、日間RSD分別為1.23%、0.30%，符合相關(guān)規(guī)定。②回收率試驗:按照標準曲線制作方法，采用3個濃度的樣品處理后測定吸收度，將測得的吸收度代入標準回歸方程，計錄測得量與加入量，計算回收率，結(jié)果見表2。

表2 回收率試驗(%)

2.2 對甲醛致小鼠足腫脹組織中PGE2含量的影響 取昆明種小鼠40只，雌雄各半，體質(zhì)量18～22 g，隨機分成5組，即生理鹽水組，吲哚美辛陽性對照組，小檗堿低、中、高劑量組。給藥容積為20 mL/mg，對照組給予等量的生理鹽水，1次/d，連續(xù)5d。末次給藥后1 h，各小鼠右后足跖皮下注射2.5%甲醛生理鹽水溶液50 μL/只，24 h后處死小鼠，距右踝關(guān)節(jié)上1 cm處剪下右足，剝皮后浸泡于5 mL生理鹽水中1 h，以1 500 r/min離心10 min，吸取上清液0.5 mL，加入0.5 mol/L氫氧化鉀-甲醇溶液2 mL，在50℃水浴箱中水浴異構(gòu)化20 min，加甲醇稀釋至20 mL，于紫外分光光度計278 nm處測定吸收值，并按下列公式計算PGE2含量:PGE2含量(μg/g)=(E278×0.01×V×D)/W［注:V=PGE2浸泡液總體積，D=稀釋倍數(shù)，W=右下肢重量(g)，E278=278 nm 處的吸收值］［3-5］。比較各組間差異。見表3。

表3 小鼠足腫脹組織中PGE2含量(μg/g)

2.3 結(jié)果 見表4。由表4可見，吲哚美辛組及小檗堿中、高劑量組PGE2含量較低，而低劑量組差異無統(tǒng)計學意義。

表4 小檗堿對小鼠足腫脹組織中PGE2含量的影響(n=8，)

表4 小檗堿對小鼠足腫脹組織中PGE2含量的影響(n=8，)

注:與生理鹽水組比較，*P＜0.05

組別 劑量(mg/kg)動物(只) PGE2含量(μg/g)8 60.43±16.44吲哚美辛組 20 8 30.64±9.19*小檗堿低劑量組 10 8 61.86±9.41小檗堿中劑量組 20 8 39.60±13.68*小檗堿高劑量組 30 8 33.22±10.34生理鹽水組-*

3 討論

炎癥介質(zhì)PGE2等會使血管擴張和組織水腫，并使機體痛覺增敏。本實驗采用甲醛致小鼠足腫脹法測定炎癥組織中PGE2，結(jié)果表明，小檗堿中、高劑量組抑制小鼠PGE2的產(chǎn)生，提示小檗堿的抗炎作用機制與減少炎癥組織中PGE2含量有關(guān)。

［1］鐘祥，李應東.小檗堿藥理作用研究進展［J］.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2012，8(3):185-186.

［2］吳迪，范明松，李志雄，等.小檗堿對心血管藥理作用的研究進展［J］.中國醫(yī)藥指南，2012，1(10):61-62.

［3］李林，高自立，屈愛桃，等.蒙藥忠倫阿湯的抗炎鎮(zhèn)痛作用及對膠原誘導關(guān)節(jié)炎大鼠足腫脹的影響［J］.中國實驗方劑學雜志，2011，17(3):184-186.

［4］王本祥，馬金凱，鄧文龍，等.現(xiàn)代中藥藥理學［M］.天津:天津科學技術(shù)出版社，1997:303.

［5］王燕燕，陳超，楊洪發(fā).虎參痛風膠囊對大鼠足腫的抗炎作用［J］.中國醫(yī)院藥學雜志，2005，25(3):206-208.