溶血和脂濁標(biāo)本對負(fù)相速率反應(yīng)生化檢測項(xiàng)目干擾的消除方法探討

費(fèi)月平，邢建明

(湖州市婦幼保健院，浙江 湖州 313000)

·基礎(chǔ)與臨床研究·

溶血和脂濁標(biāo)本對負(fù)相速率反應(yīng)生化檢測項(xiàng)目干擾的消除方法探討

費(fèi)月平，邢建明

(湖州市婦幼保健院，浙江 湖州 313000)

目的：探討速率法檢測結(jié)果出現(xiàn)負(fù)值的原因及其消除干擾措施。方法應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀設(shè)置380nm和410nm 2種副波長，同時(shí)對日常標(biāo)本中溶血和脂濁標(biāo)本進(jìn)行ALT、AST、HBDH、BUN、CO2等5項(xiàng)生化實(shí)驗(yàn)進(jìn)行對比檢測。結(jié)果副波長設(shè)置為380nm時(shí)，Hb>2.5g/L產(chǎn)生干擾，設(shè)置為410nm時(shí)，Hb>5.0g/L有顯著干擾，2組干擾值間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；TG>9.8mmol/L對ALT、AST、BUN、CO2結(jié)果產(chǎn)生干擾，TG>14.6mmol/L對HBDH結(jié)果產(chǎn)生干擾，TG2組干擾值間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；隨著溶血、脂濁的加深干擾逐漸加大，經(jīng)稀釋后的血清標(biāo)本或10000r/min離心后的下清液血清標(biāo)本檢測結(jié)果相近。結(jié)論對于溶血標(biāo)本進(jìn)行以上5項(xiàng)檢測時(shí)，副波長設(shè)置為410nm可以較好地消除輕度溶血的干擾，對于脂濁標(biāo)本通過樣本稀釋或提高離心速度，在一定程度上可以消除脂濁的干擾。

速率法；降反應(yīng)；輔助波長；溶血；脂濁

Abstract: [Objective] To investigate reasons for negative value results from five biochemical tests of rate assay and take measures to eliminate interference. [Method] Set two different secondary wavelengths for Auto Biochemical Analyzer, 380nm and 410nm respectively. Meanwhile, use different rates of centrifugal speed and dilution to detect ALT, AST, HBDH, BUN, CO2in daily heamolysed or turbid samples. [Result] Interference emerges in samlpes with Hb>2.5g/L when secondary wavelength is 380nm, and a marked interference emerges in samlpes with Hb>5.0g/L when secondary wavelength is 410nm. Difference between interference in two Hb group is statistically significant (P<0.05). AST , ALT, BUN , CO2results could be interfered in samples with TG>9.8 mmol/L and HBDH results could be interfered in samples with TG>14.6 mmol/L. No statistical difference of interference was found in two TG groups (P>0.05). Interference was strongly related with heamolysed and turbid intensity. For five biochemical tests, similar results were found in serum samples diluted with 0.9% NaCl and centrifuged with 10000 r/min. [Conclusion] When Detecting ALT, AST, HBDH, BUN, CO2in mild heamolysed samples, interence can be better eliminated with 410nm secondary wavelength, which shows better anti-interference than 380nm. For turbid samples, to some extent, interference can be eliminated by sample dilution or centrfuge speeding up.

Keywords：rate；down； secondary wavelength； hemolysis；lipid turbidity

血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)和α-羥丁酸脫氫酶(HBDH)、尿素氮(BUN)、二氧化碳(CO2)檢測是生化檢驗(yàn)中最常見的項(xiàng)目，通過檢測反應(yīng)下降速率(-△A/min)計(jì)算結(jié)果，主波長均為340nm，輔波長有380nm或410nm 2種可供選擇[1]。由于溶血和脂濁會(huì)導(dǎo)致這5項(xiàng)檢測結(jié)果嚴(yán)重偏差甚至出現(xiàn)負(fù)值等現(xiàn)象。為此，我們將自動(dòng)生化分析儀設(shè)置380nm和410nm 2種副波長進(jìn)行檢測對比觀察，并對脂濁、溶血標(biāo)本采用高速離心或稀釋等方法進(jìn)行測定比較，探索如何消除溶血和脂濁對檢測結(jié)果產(chǎn)生的干擾現(xiàn)象，現(xiàn)總結(jié)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 儀器

美國Abbott Aeroset型全自動(dòng)生化分析儀，測定前按要求對儀器例行保養(yǎng)、校正和質(zhì)控。LDZ5-2型自動(dòng)平衡離心機(jī)，北京醫(yī)用離心機(jī)廠生產(chǎn)；TGL-16H型臺(tái)式高速離心機(jī)，珠海黑馬醫(yī)學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)。

1.2 試劑

ALT、AST試劑由德賽診斷系統(tǒng)(上海)有限公司生產(chǎn)；BUN試劑由上?？迫A東菱診斷用品有限公司生產(chǎn)，HBDH、CO2試劑由浙江寧波瑞源生物科技股份有限公司生產(chǎn)。

1.3 測定樣本

高值濃度多項(xiàng)凍干質(zhì)控血清(批號(hào)551UN)，由RANDOX公司提供。溶血和脂濁血清取自我院門診和住院患者的日常生化檢測標(biāo)本。

1.4 干擾物質(zhì)

高濃度脂濁TG校準(zhǔn)品(39.0mmol/L)及Hb液(40.0g/L)，由RANDOX公司提供。制備如下：(1)Hb干擾液，將濃度為40g/L的Hb液按比例稀釋成40.0、20.0、10.0、5.0、2.5g/L；(2)TG干擾液，將濃度為39.0mmol/L的TG校準(zhǔn)液按比例稀釋成39.0、29.2、19.5、9.8、6.6mmol/L。

1.5 操作方法

(1)設(shè)置副波長為380nm或410nm；在RANDOX質(zhì)控血清中加入上述干擾物，同時(shí)用生理鹽水做平行管對照；進(jìn)行ALT、AST、HBDH、BUN、CO2檢測，各測5次求均值；(2)選取外觀正常、溶血、脂濁的日常標(biāo)本各30份，進(jìn)行 ALT、AST、HBDH、BUN、CO2檢測，每個(gè)標(biāo)本各測3次取均值。將常規(guī)離心后的脂濁標(biāo)本以10000r/min離心10分鐘后吸下清液再同法進(jìn)行 ALT、AST、HBDH、BUN、CO2檢測[2]，同時(shí)，用生理鹽水5倍稀釋進(jìn)行ALT、AST、HBDH、BUN、CO2檢測，每個(gè)樣本各測3次取均值。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 溶血和高脂血標(biāo)本5項(xiàng)生化項(xiàng)目在不同副波長下檢測結(jié)果

檢測結(jié)果顯示：溶血時(shí)，ALT、CO2隨Hb濃度增加產(chǎn)生負(fù)干擾，其他產(chǎn)生正干擾；副波長設(shè)置為380nm時(shí)，除HBDH外，Hb>2.5g/L就產(chǎn)生干擾；設(shè)置為410nm時(shí)，Hb>5.0g/L才有干擾；除HBDH外，副波長設(shè)置為410nm能消除輕度溶血的干擾，2種副波長間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。脂濁時(shí)，BUN隨TG濃度增加產(chǎn)生正干擾，其他產(chǎn)生負(fù)干擾；TG>9.8mmol/L對ALT、AST、BUN、CO2結(jié)果產(chǎn)生干擾，TG>14.6mmol/L對HBDH結(jié)果產(chǎn)生干擾，副波長設(shè)置為380nm或410nm均不能消除脂濁(TG>9.8mmol/L)的干擾，2種副波長間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，詳見表1、表2。

表1 Hb(g/L)在2種副波長時(shí)5項(xiàng)生化實(shí)驗(yàn)的檢測比較

注：★不同濃度干擾物在不同波長和“0”干擾比較ALT、AST、HBDH、BUN、CO2項(xiàng)目P均<0.05;△副波長為380nm和410nm比較ALT、AST、BUN、CO2項(xiàng)目P均<0.05 ；HBDH項(xiàng)目P>0.05。

表2 TG(mmol/L)在2種副波長時(shí)5項(xiàng)生化實(shí)驗(yàn)的檢測比較

注：★不同濃度干擾物在不同波長和“0”干擾比較ALT、AST、HBDH、BUN、CO2項(xiàng)目P均<0.05;△副波長為380nm和410nm比較ALT、AST、HBDH、BUN、CO2項(xiàng)目,P均>0.05。

2.2 正常及溶血標(biāo)本稀釋前后生化測定結(jié)果

選取外觀正常及溶血標(biāo)本各30份,結(jié)果顯示, 正常標(biāo)本常規(guī)處理和經(jīng)5倍稀釋后檢測結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。溶血標(biāo)本常規(guī)處理和經(jīng)5倍稀釋后檢測結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見表3。

表3 正常及溶血標(biāo)本稀釋前后生化測定結(jié)果對照表

注：★正常標(biāo)本常規(guī)處理和經(jīng)生理鹽水5倍稀釋比較ALT、AST、HBDH、BUN、CO2項(xiàng)目P均>0.05;△ 溶血標(biāo)本常規(guī)處理和經(jīng)生理鹽水5倍稀釋比較ALT、AST、HBDH、BUN、CO2項(xiàng)目P均<0.05。

2.3 嚴(yán)重脂濁標(biāo)本經(jīng)稀釋或高速離心前后生化測定結(jié)果

選取外觀嚴(yán)重脂濁的標(biāo)本30份, 常規(guī)離心制成3份血清, 共3組。將其中一組再用高速離心法, 取下清液； 一組生理鹽水稀釋5倍，同時(shí)上機(jī)測定。結(jié)果表明, 經(jīng)5倍稀釋和高速離心法的2組結(jié)果基本一致，與常規(guī)處理結(jié)果有明顯差異(P<0.05)。詳見表4。

表4 嚴(yán)重脂濁標(biāo)本經(jīng)稀釋或高速離心前后生化測定結(jié)果對照表

注：★嚴(yán)重脂濁標(biāo)本常規(guī)處理和經(jīng)高速離心后下清液或生理鹽水5倍稀釋比較 ALT、AST、HBDH、BUN、CO2項(xiàng)目P均<0.05; △高速離心后下清液和經(jīng)生理鹽水5倍稀釋比較 ALT、AST、HBDH、BUN、CO2項(xiàng)目P均>0.05。

3 討 論

溶血和脂濁對臨床化學(xué)測定干擾的機(jī)制涉及光譜和化學(xué)兩個(gè)方面，雙波長的作用主要是消除內(nèi)源性的干擾，如脂血、溶血等，以達(dá)到測定結(jié)果的真實(shí)性和可靠性。從我們的檢測結(jié)果顯示，副波長設(shè)置380nm時(shí)，Hb>2.5g/L就對此5項(xiàng)生化檢測結(jié)果產(chǎn)生干擾，并隨溶血、脂濁的加深干擾逐漸加大；副波長設(shè)置410nm時(shí)，Hb>5g/L才會(huì)對檢測結(jié)果有顯著干擾，能消除Hb<5.0g/L的干擾，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。表明對于溶血標(biāo)本進(jìn)行此5項(xiàng)檢測時(shí)，副波長為410nm可以消除輕度溶血的干擾。本文檢測結(jié)果還顯示：溶血時(shí)ALT、CO2隨Hb濃度增加產(chǎn)生負(fù)干擾，其他產(chǎn)生正干擾，原因可能是血細(xì)胞中高濃度組分逸出使測定結(jié)果增高，或某些物質(zhì)的血細(xì)胞內(nèi)濃度低于血清濃度時(shí)溶血相當(dāng)于血清被稀釋；也可能與儀器的線性和溶血使試驗(yàn)方法受影響有關(guān)。本文檢測30例溶血標(biāo)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，將溶血標(biāo)本稀釋后可在一定程度上起到消除干擾的作用，使測定結(jié)果更接近真實(shí)性和可靠性。

近年來，糖尿病血脂代謝紊亂、家族性高脂血癥患者不斷增多[2]，日常標(biāo)本中TG在10～20mmol/L已屢見不鮮，血清似奶油狀，無法報(bào)告結(jié)果。另一方面臨床上患者靜脈注射脂肪乳也出現(xiàn)同樣的情況。從我們的檢測結(jié)果顯示：副波長設(shè)置為380nm或410nm時(shí)，TG干擾情況相同，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；TG>9.8mmol/L時(shí)，對ALT、AST、BUN、CO2檢測結(jié)果產(chǎn)生明顯干擾，TG>14.6mmol/L時(shí)，對HBDH檢測結(jié)果明顯干擾，且隨著TG濃度加大干擾逐漸加大，BUN產(chǎn)生正干擾，其他產(chǎn)生負(fù)干擾。原因可能是由于脂濁血清中水份被不溶性的乳糜微粒(CM)所取代，隨著濁度的加深對光線有一定的散射作用，使空白吸光度值升高，直接影響比色測定，從而導(dǎo)致扣除的空白過高，扣除空白與脂血對測定的干擾逐漸不成比例[3-4]，也可能與儀器的線性和試驗(yàn)方法有關(guān)。本文30例脂濁標(biāo)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，ALT、AST、HBDH、CO2檢測結(jié)果明顯偏低，BUN檢測結(jié)果明顯增高；特別是ALT和AST部分結(jié)果為負(fù)值。將脂濁標(biāo)本進(jìn)行稀釋或經(jīng)10000r/min離心，進(jìn)行此5項(xiàng)生化檢測時(shí)結(jié)果明顯改變?？梢?，將脂濁標(biāo)本進(jìn)行稀釋或提高離心速度可以消除脂濁對測定的干擾。

溶血和脂濁是生化檢驗(yàn)中常見的干擾和影響因素，為了消除干擾，在進(jìn)行上述5項(xiàng)生化檢測時(shí)，副波長設(shè)置以410nm為宜，同時(shí)將標(biāo)本稀釋后進(jìn)行測定也可以降低溶血和脂血的干擾。必要時(shí)，對脂血標(biāo)本也可采用高速離心，降低其干擾。

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Themethodofdenoisingtheinterferencecausedbyhemolysisandlipidturbidityinnegativephasevelocityresponseofbiochemistryexamination

FEIYueping，XINGJianming

(The Maternity and Child Health Care Hospital of Huzhou, Zhejiang 313000, China)

費(fèi)月平(1965-)，女，浙江湖州人，中專，主管技師。研究方向：生物化學(xué)檢驗(yàn)

R446.1

A

0672-0024(2013)04-0047-04