兩種不同工藝制備的芪茵顆粒對(duì)大鼠高脂血癥治療作用的研究

薛清方 聶繼紅

1.新疆醫(yī)科大學(xué)33期研究生，新疆 烏魯木齊 830011;2.新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院，新疆 烏魯木齊 830011

高脂血癥是體內(nèi)脂類代謝紊亂導(dǎo)致血脂水平增高的一種疾病，并由此引發(fā)一系列的臨床病理表現(xiàn)。大量研究表明高脂血癥是冠心病、粥樣動(dòng)脈硬化形成的主要因素。隨著人們生活水平的不斷提高，高血脂的發(fā)病率有明顯增高的趨勢(shì)。

芪茵顆粒是我院曾斌芳主任醫(yī)師多年來的經(jīng)驗(yàn)方，臨床療效顯著。其功效為疏肝扶脾補(bǔ)腎，消導(dǎo)化痰，活血消積，用于肝郁脾虛脂肪性肝病。本實(shí)驗(yàn)通過研究?jī)煞N不同工藝制備的芪茵顆粒對(duì)大鼠高脂血癥治療作用的效果，從而為芪茵工藝的制定提供科學(xué)依據(jù)［1－3］。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 Wistar大鼠50只，體重180～220g，雌雄各半，由新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(新)2003－0002。

1.1.2 高脂飼料的制備 高脂飼料由膽固醇3kg(2%)、膽鹽1.5kg(1%)、丙硫氧嘧啶0.3kg(0.2%)、豬油15kg(10%)、蛋黃粉7.5kg(5%)、基礎(chǔ)飼料122.7kg(81.8%)配制而成。其中豬油為市售豬油加熱，濾過，去渣而成。蛋黃粉是將雞蛋煮熟后，將蛋黃剝出、過篩、60℃烘干。飼料的混勻壓制由新疆實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心代為加工。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 TC測(cè)定試劑盒 (批號(hào):141611102)，TG測(cè)定試劑盒 (批號(hào):141711022)，LDL－C測(cè)定試劑盒(批號(hào):142010027)。全自動(dòng)生化分析儀 (深圳 邁瑞B(yǎng)S320)，低溫離心機(jī) (THERMO MULTIFUGE H32)。

1.1.4 藥物 血脂康膠囊，由北京北大維信生物科技有限公司提供 (批號(hào):20110803)。

工藝1(水提工藝):將茵黃顆粒的全部藥材進(jìn)行水提，加10倍量水提取2次，每次1小時(shí)，合并藥液，濾過，濾液濃縮至1.20～1.30(60℃)的稠膏，60℃以下干燥，粉碎成細(xì)粉。

工藝2(水醇提工藝):將茵黃顆粒中部分藥材進(jìn)行水提，加10倍量水提取2次，每次提取1小時(shí)，合并藥液，濾過，濾液濃縮至1.20～1.30(60℃)的稠膏，60℃以下干燥，部分藥材加10倍量80%乙醇醇提2次，每次1小時(shí)，合并藥液，濾過，濾液濃縮至1.20～1.30(60℃)的稠膏，60℃以下干燥，混合后，粉碎成細(xì)粉。

藥物配置:上述兩種工藝制備的浸膏配置成1g/4.4g(每克藥物相當(dāng)4.4g原生藥)的溶液。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 高脂血癥動(dòng)物模型的建立 選用Wistar大鼠50只，雌雄各半，除正常對(duì)照組10只外，其余大鼠采用高脂飼料喂養(yǎng)6周復(fù)制高脂血癥大鼠模型。

1.2.2 動(dòng)物分組及給藥方法 除正常大鼠 (給予1.0ml/100g生理鹽水)外，將40只造模大鼠隨機(jī)分為4組:模型對(duì)照組 (給予1.0ml/100g生理鹽水)、血脂康膠囊陽(yáng)性對(duì)照組 (給予1.0ml/100g血脂康藥液)、芪茵顆粒水提組(2ml/100水提溶液)、芪茵顆粒水醇提組 (2ml/100g水醇提溶液)。模型動(dòng)物均用高脂飼料飼養(yǎng)，正常對(duì)照組用基礎(chǔ)飼料飼養(yǎng)，用藥共計(jì)8周。

1.2.3 樣本取材及處理 高脂血癥大鼠模型建立前50只大鼠尾部取血測(cè)定相關(guān)血清學(xué)指標(biāo)，高脂飼料常規(guī)喂養(yǎng)6周后尾部取血測(cè)定相關(guān)血清學(xué)指標(biāo) (確定模型是否成功);給藥8周后于末次給藥1小時(shí)后，10%水合氯醛腹腔麻醉，腹主動(dòng)脈采血，于4000rpm離心15min，取上層血清，－20℃保存待測(cè);并取肝臟組織放入中性福爾馬林溶液固定。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn) 本實(shí)驗(yàn)中所有計(jì)量資料均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 (χ±s)表示。采用PEMS3.1統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間比較采用方差分析。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

通過表1可以看出，模型組大鼠血脂較正常組明顯升高。各治療組組大鼠經(jīng)過治療后TC、TG、HDL－C和LDL－C值及ALT與模型組比較有顯著性差異 (p＜0.05或p＜0.01);芪茵顆粒水醇提組比芪茵顆粒水提組療效好;

通過表2可以看出，模型組大鼠血脂較正常組明顯升高。各治療組組大鼠經(jīng)過治療后TC、TG、HDL－C和LDL－C值及ALT與模型組比較有顯著性差異 (p＜0.05或p＜0.01);芪茵顆粒水醇提組比芪茵顆粒水提組療效好，及其作用機(jī)制可能與肝臟保護(hù)，免疫及炎性細(xì)胞因子調(diào)節(jié)，載脂蛋白表達(dá)有關(guān)，其作用機(jī)制需進(jìn)一步研究。

表1 芪茵顆粒對(duì)高脂血癥大鼠各指標(biāo)的影響♂ (±s)

表1 芪茵顆粒對(duì)高脂血癥大鼠各指標(biāo)的影響♂ (±s)

注:正常組比較，*p＜0.05，＊＊p＜0.01;與模型組比較，#p＜0.05，##p＜0.01

模型組 6 1陽(yáng)性對(duì)照組 6 芪茵顆粒水提組 6 9.26±3.93# 1.11±0.79 3.16±0.75# 7.82±3.05# 124.04±57.91##芪茵顆粒水醇組 6 4.49±1.50## 0.61±0.60 5.31±1.56 2.50±1.15## 54.14±10.66正常組對(duì)照組 6 實(shí)驗(yàn)分組n##

表2 芪茵顆粒對(duì)高脂血癥大鼠各指標(biāo)的影響♀ (±s)

表2 芪茵顆粒對(duì)高脂血癥大鼠各指標(biāo)的影響♀ (±s)

注:正常組比較，*p＜0.05，＊＊p＜0.01;與模型組比較，#p＜0.05，##p＜0.01

.20±8.79模型組 6 12.50±2.29＊＊ 0.52±0.08 5.81±0.82＊＊ 11.76±2.63＊＊ 65.95±18.84陽(yáng)性對(duì)照組 6 9.83±3.69# 0.45±0.29# 5.01±1.50# 14.00±2.87# 56.28±28.82##芪茵顆粒水提組 6 7.30±3.35# 0.46±0.16# 4.08±0.76# 5.53±3.07 44.78±19.29##芪茵顆粒水醇組 6 4.64±0.70## 0.32±0.13# 4.93±1.66# 2.74±0.82 46.07±43.10 TC TG HDL－C LDL－C ALT正常組對(duì)照組 6 1.34±0.36 0.47±0.28 2.46±0.66 0.31±0.12 41實(shí)驗(yàn)分組n##

3 討論

3.1 高脂血癥模型的建立 現(xiàn)在常用于形成高脂血癥的動(dòng)物有小鼠、大鼠、家兔、豚鼠等［4］。目前采用較多的動(dòng)物模型，有高脂飼料喂養(yǎng)法建立的模型和腹腔注射建立的急性高脂血癥模型，前者與臨床較接近。動(dòng)物多選用大鼠、家兔，其中大鼠由于造模方法簡(jiǎn)單，成本適中，血量較小鼠多，易飼喂，食性與人相近等優(yōu)點(diǎn)，為首選動(dòng)物。高脂飼料配方大同小異，均有豬油、膽固醇、蛋黃等，其中豬油的比例較重要，脂類含量越高，模型成立所需的天數(shù)越少，配方中加用膽鹽可加強(qiáng)外源性膽固醇的吸收。甲狀腺抑制藥丙基硫氧嘧啶，可抑制體內(nèi)膽固醇分解，使血液中的膽固醇和甘油三脂升高。綜合文獻(xiàn)方法，確定本次實(shí)驗(yàn)高脂飼料組方。從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出:模型組 (水提組和水醇提組)與正常組比較TC，TG，LDL－C明顯升高，HDL－C明顯降低，均有非常顯著的差異 (P＜0.01)，表明本實(shí)驗(yàn)所造模型成功。

3.2 對(duì)調(diào)脂療效的評(píng)價(jià) 從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果看出:雌雄組大鼠的TC、TG和LDL－C與模型組比較，均呈下降趨勢(shì)，說明芪茵顆粒提取物對(duì)高脂血癥大鼠的血脂有降低作用。而水醇提組較水提組下降趨勢(shì)明顯，可能原因?yàn)檐我痤w粒經(jīng)水醇提取后，提取物中黃酮、蒽醌類極性較小的化合物含量增加，有文獻(xiàn)報(bào)道［5－7］黃酮類成分通過提高肝臟SOD活性，減少自由基產(chǎn)生，能夠降低血清和肝臟MDA含量，抑制脂質(zhì)過氧化，從而防止脂質(zhì)代謝紊亂，降低血脂。故在后續(xù)試驗(yàn)中將選用工藝2(水醇提工藝)進(jìn)行進(jìn)一步研究。

本實(shí)驗(yàn)對(duì)芪茵顆粒降血脂作用的研究?jī)H僅是個(gè)開端，僅得出了其對(duì)高血脂癥大鼠有一定治療作用的結(jié)果，還需進(jìn)行大量相關(guān)研究，使芪茵顆粒能夠進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段，有望成為治療或預(yù)防心腦血管疾病的藥品。

［1］方圻，王鐘林.血脂異常防治建議［J］.中華心血管病雜志，1997，(3):10－13.

［2］諸駿仁.血脂異常防治研究的現(xiàn)狀與展望［J］.中華心血管病雜志，2002，(11):4－5.

［3］寇文镕.血脂異常的防治［J］.中華醫(yī)學(xué)信息導(dǎo)報(bào)，2003， (9):19－20.

［4］李儀奎.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.第二版.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2006:38.

［5］李楚華，李續(xù)娥，方昆陽(yáng)，等.決明子蒽醌在細(xì)胞內(nèi)膽固醇的合成中的作用［J］.中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)，200 8，1 2(33):6593－6596.

［6］Mo ln ar P，Kawas e M，Satoh K，et al.Biological act ivi ty of carotenoids in red paprika，vnlencia orange and go lden delicious apple［J］.Phytother Res，2005，19(8):700－707.

［7］李貴海，孫敬勇，張希林，等.山楂降血脂有效成分的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中草藥，2002，33(1):51－52.