基因foxl2的結(jié)構(gòu)及表達(dá)調(diào)控＊

劉曉玲，劉建國，張志峰＊＊

（1.中國海洋大學(xué)海洋生物遺傳育種教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 青島266003；2.煙臺大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山東 煙臺264005）

FOX（Forkhead box）是叉頭框轉(zhuǎn)錄因子家族，該家族成員參與脊椎動物的胚胎發(fā)育、細(xì)胞周期調(diào)控、糖類和脂類代謝、生物老化、免疫調(diào)節(jié)等多種生物學(xué)過程［1］。FOXL2 （Forkhead box L2）是 FOX 家族成員之一，該基因最早由Crisponi作為瞼裂狹小綜合癥（Blepharophimosis－ptosis－epicanthus inversus syndrome，BPES）及卵巢早衰的候選基因被克隆［2］，迄今，已在多種脊椎動物及數(shù)種無脊椎動物中獲得了foxl2基因［3－8］，然而，較深入和系統(tǒng)的研究僅在高等哺乳動物中進(jìn)行，并確定其具有參與哺乳動物卵巢早期發(fā)育和分化、維持成體卵巢的功能等作用［1］。各種研究發(fā)現(xiàn)該基因在生物體中作用的發(fā)揮受到其自身表達(dá)調(diào)控的影響，對其表達(dá)調(diào)控的研究和探索將為其作用的分子機(jī)制查明奠定基礎(chǔ)。而作為一個發(fā)現(xiàn)相對較晚的性別相關(guān)基因，foxl2在無脊椎動物中的相關(guān)研究較少，并且不夠深入。本文對foxl2基因的表達(dá)調(diào)控以及在不同動物中的研究進(jìn)展進(jìn)行概述，為深入了解該基因的進(jìn)化路徑及探討其在動物中的功能研究提供基礎(chǔ)資料。

1 Foxl2的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)

FOX家族成員都具有1個叉頭樣的DNA結(jié)合區(qū)，由此而得名。該叉頭結(jié)構(gòu)由約100個氨基酸組成，其核心部分有3個α螺旋，在兩側(cè)包含有2個β鏈而成的翼狀結(jié)構(gòu)（見圖1），故又稱為翼狀螺旋蛋白［1，7，9］。作為反式作用因子，F(xiàn)OX通過其α螺旋與靶基因DNA雙螺旋大溝結(jié)合，其β折疊則與小溝結(jié)合。根據(jù)氨基酸的同源性可以將它們劃分為不同的亞家族［1］，近期研究已發(fā)現(xiàn)FOX家族包含了從FOXA到FOXS以及FOXAB共20個亞族，亞族中又有不同的成員，其中小鼠Mus musculus基因組中已發(fā)現(xiàn)46個fox基因［10］。

FOXL2是叉頭框（FOX）轉(zhuǎn)錄因子家族成員之一，該亞家族通過6個位點(diǎn)的特殊氨基酸得以與其它亞家族成員區(qū)別開（見圖2）。2011年Fan等報道了人的FOXL2第114位賴氨酸一旦被谷氨酸替代將會影響FOXL2功能，導(dǎo)致BPES發(fā)生［9］，因此認(rèn)為該位點(diǎn)是其結(jié)構(gòu)中的一個重要功能位點(diǎn)（見圖1A）。Cocquet通過序列分析發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)OXL2通常在N端的氨基酸序列相對不保守，并提出這與生物進(jìn)化相關(guān)［3］。在哺乳動物中，F(xiàn)OXL2的氨基酸序列通常含有多聚甘氨酸區(qū)以及脯氨酸和丙氨酸重復(fù)區(qū)，并且叉頭框的C端還包含一段精氨酸和賴氨酸區(qū)（RRRRRMKR），后者可能是一個細(xì)胞核定位信號，參與FOXL2蛋白由細(xì)胞質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞核的調(diào)控［11］。Moumne等用 FOXL2／GFP （Green fluorescent protein）融合蛋白轉(zhuǎn)染了 COS－7細(xì)胞，熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，具有正常丙氨酸重復(fù)區(qū)的FOXL2蛋白在細(xì)胞核中呈彌散分布，但當(dāng)高度保守的丙氨酸重復(fù)區(qū)發(fā)生變化（如長度改變）時，將引發(fā)FOXL2蛋白在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)形成聚集，導(dǎo)致活性改變［12］。進(jìn)一步還發(fā)現(xiàn)，由該基因polyA區(qū)域的延長而造成的突變會導(dǎo)致產(chǎn)生的FOXL2蛋白大部分被限制在細(xì)胞質(zhì)中而不能進(jìn)入細(xì)胞核發(fā)揮正常的功能［13］。在非哺乳動物中，迄今沒有發(fā)現(xiàn)多聚甘氨酸區(qū)以及脯氨酸和丙氨酸重復(fù)區(qū)的存在［3－8］。除此外，張晶晶等報道該基因的終止密碼子常表現(xiàn)為多態(tài)性，幾乎所有哺乳動物該基因的終止密碼子都是TGA，而其他物種的終止密碼子則為 TAA 或者 TAG［7］。按蚊Anopheles gambiae［16］、玻璃海鞘Ciona intestinalis［16］、海 葵 Nematostella vectensis［17］、皮 海 綿Suberites domuncula［5］、太 平 洋 牡 蠣 Crassostrea gigas［6］、海 膽 Strongylocentrotus purpuratus［8］和 櫛孔扇 貝Chlamys farreri 的foxl2 基 因［18］。研 究 發(fā)現(xiàn)，這些序列均具有與脊椎動物一致的保守叉頭框序列，也有細(xì)胞核定位信號，但不具有哺乳動物FOXL2

圖1 FOXL2叉頭保守區(qū)序列推測的三維結(jié)構(gòu)Fig.1 Schematic structure of FOXL2forkhead domain

圖2 FOXL2亞家族蛋白的叉頭框Fig.2 Forkhead box of FOXL2protein from different species

在魚類中發(fā)現(xiàn)foxl2存在基因重復(fù)現(xiàn)象，基因重復(fù)指某些基因會存在旁系同源（Paralogous）的異構(gòu)形式［14］。Jiang等利用數(shù)據(jù)庫比對發(fā)現(xiàn)斑馬魚Danio rerio、青鳉Oryzias latipes等魚類中，foxl2基因可能存在2種不同序列，其中趨異進(jìn)化的命名為foxl2b［15］。

無脊椎foxl2序列及結(jié)構(gòu)的研究較少。目前為止，通過已知基因組序列比對或克隆的方法，僅獲得了所含的多聚甘氨酸區(qū)以及脯氨酸和丙氨酸重復(fù)區(qū)［16－17］。在進(jìn)化上，無脊椎動物的FOXL2蛋白C端的氨基酸序列相對保守，而N端相對不保守，Cocquet認(rèn)為FOXL2蛋白C端的氨基酸序列的相對保守可能與其保守的功能有關(guān)［3］

2 Foxl2基因的表達(dá)調(diào)控

在細(xì)胞分化或某種生理活動中，基因的表達(dá)可在多個水平被調(diào)控。目前關(guān)于foxl2基因自身表達(dá)調(diào)控的研究主要集中在轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控。

2.1 Foxl2基因轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控

2.1.1 基因上游的調(diào)控元件 Foxl2基因上游調(diào)控元件的研究，目前僅限于哺乳動物中的幾個報道。Pailhoux在研究山羊（Capra hircus）的無角間性綜合征（Polled intersex syndrome，PIS）的發(fā)生時提出，山羊foxl2基因轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游約200kb處的部分序列為該基因的順式作用元件，該序列的缺失會導(dǎo)致山羊foxl2基因轉(zhuǎn)錄活動的停止［19］。該序列在山羊、老鼠和人（Homo sapiens）的對應(yīng)基因座位中是保守的，當(dāng)人的該同源序列缺失或斷裂時將造成BPES的發(fā)生［20］，已知人的FOXL2是BPES的候選基因，故推測這一同源序列也是人FOXL2基因的順式作用元件。

進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，人FOXL2還參與了該基因轉(zhuǎn)錄水平的自我激活，但這種調(diào)節(jié)會被體內(nèi)NAD（Nicotinamide adenine dinucleotide）依賴的去乙酰化酶所阻止［21］。

2.1.2 雌激素對foxl2基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié) 芳香化酶（Aromatase enzyme，P450arom）是雌激素生成的重要酶類，已證明在很多物種中廣泛存在。研究發(fā)現(xiàn)foxl2與P450arom基因的表達(dá)在時空上高度相關(guān)，foxl2能激活P450arom表達(dá)，被認(rèn)為是芳香化酶的上游基因，二者共同參與調(diào)節(jié)雌激素的合成［4，22］。

最近的研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)用雌激素處理虹鱒Oncorhynchus mykiss、南方鲇Silurus meridionnalis、稀有鮈鯽Gobiocypris rarus時，其體內(nèi)foxl2 mRNA呈上調(diào)表達(dá)，而用芳香化酶抑制劑（能降低體內(nèi)雌激素合成）或雄激素處理虹鱒、南方鲇發(fā)現(xiàn)，foxl2 mRNA表達(dá)出現(xiàn)下調(diào)［15，23－24］。Guiguen等對魚類的這種雌激素與foxl2之間的相互調(diào)節(jié)進(jìn)行了總結(jié)（見圖3）［25］。同樣在雞Gallus gallus胚中，用芳香化酶抑制劑處理后，雞胚卵巢組織的foxl2表達(dá)被抑制，由此研究者提出這種雌激素對foxl2表達(dá)的調(diào)控是一種反饋調(diào)節(jié)［22］。

2.2 Foxl2基因轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控

在山羊、雞和小鼠的睪丸中可以檢測到foxl2 mRNA的表達(dá)，但在同樣的組織中卻沒有檢測到相應(yīng)的蛋白產(chǎn)物，類似的現(xiàn)象也在小鼠和雞的卵母細(xì)胞中發(fā)生［3，26－27］，推測在這些組織細(xì)胞中foxl2 存在著轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控，但這一調(diào)控的機(jī)制尚不清楚。

2.2.1 3′末端存在不同的polyA位點(diǎn) 大部分真核生物mRNA的加工涉及到mRNA前體的分裂／多聚腺苷化，即在mRNA 3′末端有一個特異性酶識別切點(diǎn)上游13～20bp的加尾識別信號AAUAAA以及切點(diǎn)下游的保守序列GUGUGUG，把切點(diǎn)下游的一段切除，然后再由ploy A聚合酶催化，加上多聚腺苷酸（poly A）尾巴，以此增強(qiáng)mRNA的穩(wěn)定性并有助于mRNA從細(xì)胞核到細(xì)胞質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)，從而調(diào)控蛋白質(zhì)的產(chǎn)生。某些基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物中存在2個以上poly A聚合酶識別位點(diǎn)，如降鈣素和降鈣素基因相關(guān)肽便是同一個基因產(chǎn)生的不同產(chǎn)物，在甲狀腺C細(xì)胞中產(chǎn)生降鈣素、在神經(jīng)組織產(chǎn)生降鈣素基因相關(guān)肽，其中造成這一現(xiàn)象的一個原因就是由于轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物在不同細(xì)胞中poly A位點(diǎn)不同，從而影響mRNA的剪切加工，致使成熟的mRNA產(chǎn)生差異而生成2種不同功能的產(chǎn)物［28］。Cocquet等報道小鼠的Foxl2基因存在著2種截然不同的polyA位點(diǎn)，一種polyA在轉(zhuǎn)錄本的第2433bp處起始，具有典型的多聚A信號（AAUAAA），另一種在2864bp處起始，具有非典型的多聚A信號（UAUAAA）［29］。但小鼠Foxl2 polyA 位點(diǎn)的不同是否也會參與基因調(diào)控，目前尚缺乏實(shí)驗(yàn)依據(jù)，有待進(jìn)一步研究驗(yàn)證。

2.2.2 反義RNA的存在 內(nèi)源性的反義RNA在很多物種（動物、植物和真菌）中已有報道，它們通過影響RNA的編輯或直接通過轉(zhuǎn)錄碰撞等方式對正義RNA的表達(dá)水平產(chǎn)生調(diào)控作用［30］。Cocquet等采用熒光原位雜交技術(shù)首次在小鼠卵巢粒層細(xì)胞系中檢測到了反義和正義的Foxl2 RNA［29］。進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)該反義轉(zhuǎn)錄本與正義轉(zhuǎn)錄本序列有部分互補(bǔ)，但前者不具有閱讀框，推測其可能對Foxl2的表達(dá)產(chǎn)生調(diào)控作用［29］。在太平洋牡蠣［6］及櫛孔扇貝［18］成體性腺中也檢測到這種foxl2反義RNA，但其是否以及怎樣發(fā)揮調(diào)控作用還有待于進(jìn)一步的研究。

圖3 魚類foxl2與芳香化酶基因之間的互相調(diào)節(jié)關(guān)系［25］Fig.3 Feedback loop between foxl2 gene and P450arom gene in fish［25］

2.3 翻譯后調(diào)控

雙向電泳和免疫印跡技術(shù)發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)OXL2在人的KGN細(xì)胞（粒層細(xì)胞樣腫瘤細(xì)胞系）和小鼠的卵巢內(nèi)存在幾種不同等電點(diǎn)的蛋白亞型［31］；生物信息學(xué)分析（http：／／www.cbs.dtu.dk／services／NetPhosk／和http：／／www.cbs.dtu.dk／services／NetPhos／）發(fā)現(xiàn)，這種不同等電點(diǎn)的蛋白形式主要是由于不同的翻譯后修飾造成的，如小鼠、紅原雞、非洲爪蟾Xenopus tropicalis、斑馬魚等物種中的FOXL2中存在大量的乙?；土姿峄Ｊ匚稽c(diǎn)；進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)（http：／／medgen.ugent.belfoxI2／）這些位點(diǎn)的部分氨基酸殘基發(fā)生變化，將影響FOXL2蛋白活化或者細(xì)胞定位［11，31］。由此認(rèn)為，翻譯后的調(diào)控對FOXL2功能的實(shí)施和細(xì)胞定位具有重要的意義。

3 Foxl2的空間表達(dá)特征及其功能研究

迄今已報道了多個物種的foxl2基因空間表達(dá)特征，這些研究主要集中在脊椎動物中［3－4］，在無脊椎動物中報道較少，且其表達(dá)特征與高等動物之間存在差異［5－6，8］。有關(guān)該蛋白的功能研究則主要來自哺乳動物，其他物種尚未見報道。

3.1 脊椎動物

對于哺乳動物的foxl2研究相對深入。在大多數(shù)的哺乳動物中，該基因呈性腺性別二態(tài)性表達(dá)特征，但在mRNA和蛋白水平的表達(dá)存在空間差異。其中mRNA主要在卵巢的顆粒細(xì)胞中表達(dá)［32］，但在小鼠卵母細(xì)胞中也定位到該基因的mRNA［27］，并在山羊和小鼠的睪丸中檢測到了該mRNA的弱表達(dá)［3，26］。比較而言，哺乳動物的FOXL2蛋白在性腺中的表達(dá)相對受限，其僅在卵巢顆粒細(xì)胞中表達(dá)，而在卵母細(xì)胞和精巢中均未檢測到該蛋白的存在［27］。除此之外，研究者還發(fā)現(xiàn)該基因在哺乳動物的腦垂體及眼瞼中均存在mRNA和蛋白水平的表達(dá)［32］。

哺乳動物中foxl2基因在性別分化時期的卵巢中特異表達(dá)，確定其可作為哺乳動物卵巢分化的早期標(biāo)記分子開展相關(guān)的研究［27］。長期以來，對哺乳動物foxl2基因功能的研究主要集中在卵巢發(fā)育及功能維持方面，認(rèn)為該基因可以調(diào)節(jié)顆粒細(xì)胞的增殖分化，是卵泡發(fā)育必須的細(xì)胞因子［34］，并且根據(jù)該基因在小鼠胚胎發(fā)育中后期及成體腦垂體前葉表達(dá)的特征，推測可能與“腦垂體性腺軸”有關(guān)［32］。Batista等在研究FOXL2對卵巢生理病理機(jī)制時發(fā)現(xiàn)，KGN細(xì)胞中過表達(dá) FOXL2能激活參與 ROS （Reactive oxygen species）新陳代謝相關(guān)基因的表達(dá)，表明其參與氧自由基代謝［37］。Uda等研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)oxl2－／－突變體小鼠的卵巢中濾泡細(xì)胞閉鎖，表明該基因在某種程度上有抗細(xì)胞凋亡的作用［38］。Guiguen等認(rèn)為foxl2參與類固醇雌激素的生成［38］。在哺乳動物中，還有一些foxl2突變造成的功能缺失研究，這些研究大多集中在突變表型分析上，有研究表明小鼠中該基因可能通過與Sox9的相互抑制發(fā)揮其性別維持功能［39］。2011年Caburet等概述了已有的研究成果認(rèn)為，卵巢中FOXL2參與調(diào)節(jié)膽固醇和類固醇代謝以及細(xì)胞凋亡和細(xì)胞增殖活性氧解毒，并阻止卵巢顆粒細(xì)胞轉(zhuǎn)分化為類支持細(xì)胞，這些功能分析顯示了該基因是卵巢發(fā)育和功能維持的重要因子［40］。

在雞中foxl2基因在mRNA與蛋白水平的表達(dá)規(guī)律與小鼠中的類似［26］。

兩棲類foxl2基因的研究主要來自皺皮蛙（Rana rugosa），研究發(fā)現(xiàn)蛙foxl2 mRNA表達(dá)模式與哺乳動物類似；免疫組化結(jié)果顯示FOXL2蛋白存在于卵母細(xì)胞周圍的體細(xì)胞中，但未見腦和精巢中蛋白水平的研究報道［33］。同其它哺乳動物一樣，蛙foxl2基因?yàn)槌Ｈ旧w基因，在卵巢分化早期起關(guān)鍵作用［33－34］。

魚類該基因研究多集中在mRNA表達(dá)水平，且發(fā)現(xiàn)其主要在卵巢中表達(dá)［15，35－36］，Wang等對羅非魚的研究發(fā)現(xiàn)：50dah（days after hatching）發(fā)育時期的羅非魚處于卵巢的分化期，此時用原位雜交技術(shù)檢測到了foxl2的表達(dá)，并將其定位在卵母細(xì)胞周圍的顆粒細(xì)胞中，研究者認(rèn)為foxl2在羅非魚卵巢分化早期的表達(dá)暗示了該基因參與羅非魚的卵巢分化［35］。Nakamoto等對青鳉的mRNA表達(dá)研究發(fā)現(xiàn)：foxl2基因在青鳉性別決定關(guān)鍵時期不表達(dá)，表明其不參與性別決定，但推測其在卵巢分化早期發(fā)揮作用，可能與該基因在哺乳動物中的作用一樣，都與粒層細(xì)胞的分化相關(guān)［36］。類似于哺乳動物，在虹鱒和羅非魚的精巢中也檢測到該基因mRNA的弱表達(dá)［35］。進(jìn)一步在許多魚類中發(fā)現(xiàn)，該基因mRNA除了在腦和垂體中表達(dá)外，還在魚的鰓中表達(dá)，研究者認(rèn)為這種在水生硬骨魚類中的獨(dú)特表達(dá)模式尚需更深入的研究［35］。

3.2 無脊椎動物

雖然目前已有幾種無脊椎動物的foxl2基因序列已知，但其表達(dá)研究卻很少，迄今僅在海膽、太平洋牡蠣、櫛孔扇貝和皮海綿中有相關(guān)研究，且其功能相關(guān)研究未見實(shí)驗(yàn)性報道。

Tu等采用定量PCR技術(shù)，對海膽foxl2基因在胚胎期的mRNA表達(dá)進(jìn)行了研究，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果僅得出其為合子基因的結(jié)論，未見進(jìn)一步的深入研究［8］。

Naimi等研究發(fā)現(xiàn)太平洋牡蠣foxl2 mRNA主要在唇瓣和性腺中表達(dá)，其在兩性性腺中的表達(dá)未見如脊椎動物所表現(xiàn)出的明顯性別二態(tài)性，即除了在生長期有差別（卵巢是精巢的8倍）外，其他各時期無顯著差別［6］，由此認(rèn)為foxl2是牡蠣性腺發(fā)育相關(guān)基因而不能確定其與性別相關(guān)。分析牡蠣與脊椎動物之間這一差別的原因認(rèn)為，太平洋牡蠣的性別極易受外界環(huán)境影響，在自然條件下容易發(fā)生性逆轉(zhuǎn)，是一種性別不穩(wěn)定貝類［41－42］，其性別的決定和性腺的發(fā)育受體內(nèi)基因與外界環(huán)境的共同影響。在這種性別不穩(wěn)定的無脊椎貝類中，foxl2的作用強(qiáng)度可能會受到許多外界環(huán)境因子的影響。進(jìn)一步的原位雜交結(jié)果顯示，太平洋牡蠣foxl2 mRNA在卵巢中僅定位在性細(xì)胞中，與脊椎動物性別穩(wěn)定物種的表達(dá)存在差異，這樣的差異是否代表了性不穩(wěn)定物種的表達(dá)特征以及其在牡蠣中相關(guān)的功能如何，有待于深入研究。

與太平洋牡蠣不同，櫛孔扇貝的性別相對穩(wěn)定，是一種典型的單性別貝類［43］。其foxl2 mRNA在性腺中的表達(dá)特征［18］也有別于太平洋牡蠣，但與脊椎動物中的類似，即呈現(xiàn)出顯著的性別二態(tài)性，是雌性相關(guān)基因［18］。櫛孔扇貝中的這一表達(dá)特點(diǎn)暗示了該基因在性別穩(wěn)定的無脊椎動物卵巢中的保守作用。

有關(guān)FOXL2蛋白水平的表達(dá)目前僅在海綿中有報道，免疫組化結(jié)果顯示海綿的FOXL2蛋白在其各類細(xì)胞中都有所表達(dá)，被認(rèn)為是一種發(fā)揮基礎(chǔ)功能的轉(zhuǎn)錄因子［5］。這一結(jié)果或許與海綿尚無組織器官的分化有關(guān)。

4 結(jié)語

對于foxl2基因的研究長期以來主要集中在基因克隆、mRNA或蛋白水平的表達(dá)及定位上，其功能方面的研究相對較少，并僅有哺乳動物的相關(guān)報道。在哺乳動物以下的低等動物中的功能研究數(shù)據(jù)有限，而通過對已有的幾種無脊椎動物的研究發(fā)現(xiàn)，該基因的表達(dá)具有多樣性，這一特點(diǎn)是否暗示了該基因在功能上的多樣性？有待進(jìn)一步研究。因此探討該基因在低等動物中的功能及相關(guān)進(jìn)化分析將是下一步的研究重點(diǎn)。此外，為了更好地研究該基因作用的分子機(jī)理，其自身各水平的表達(dá)調(diào)控以及在動物中的組織表達(dá)特點(diǎn)的綜合研究顯得尤為重要。相關(guān)結(jié)果的積累將為系統(tǒng)理解該基因在動物中的作用提供科學(xué)數(shù)據(jù)。

［1］ 曹冬梅，盧建.叉頭框 （FOX）轉(zhuǎn)錄因子家族的結(jié)構(gòu)與功能 ［J］.生命科學(xué)，2006，5：491－496.

［2］ Crisponi L，Deiana M，Loi A，et al.The putative forkhead transcription factor FOXL2is mutated in blepharophimosis／ptosis／epicanthus inversus syndrome［J］.Nat Genet，2001，27：159－166.

［3］ Cocquet J，Pailhoux E，Jaubert F，et al.Evolution and expression of Foxl2［J］.J Med Genet，2002，39：916－921.

［4］ Nagahama Y.Molecular mechanisms of sex determination and gonadal sex differentiation in fish ［J］.Fish Physiol Biochem，2005（31）：105－109.

［5］ Adell T，Muller W E G.Isolation and characterization of five Fox（Forkhead）genes from the sponge Suberites domuncula ［J］.Gene，2004，334：35－46.

［6］ Naimi A，Martinez A S，Specq M L，et al.Molecular cloning and gene expression of Cg－Foxl2during the development and the adult gametogenetic cycle in the oyster Crassostrea gigas ［J］.Comp Biochem Physiol B，2009，154：134－142.

［7］ 張晶晶，李祥龍，周榮艷，等.不同物種FOXL2基因的生物信息學(xué)分析 ［J］.黑龍江畜牧獸醫(yī)：科技版，2009，21：7－9.

［8］ Tu Q，Brown C T，Davidson E H，et al.Sea urchin Forkhead genefamily：phylogeny and embryonic expression ［J］.Dev Biol，2006，300（1）：49－62.

［9］ Fan J Y，Han B，Qiao J，et al.Functional study on a novel missense mutation of the transcription factor FOXL2causes blepharophimosis－ptosis－epicanthus inversus syndrome（BPES）［J］.Mutagenesis，2011，26（2）：283－289.

［10］ Shimeld S M，Degnan B，Luke G N.Evolutionary genomics of the Fox genes：Origin of gene families and the ancestry of gene clusters［J］.Genomics，2010，95：256－260.

［11］ Beysen D，Moumne L，Veitia R，et al.Missense mutations in the forkhead domain of FOXL2lead to subcellular mislocalisation，protein aggregation and impaired transactivarion ［J］.Hum Mol Genet，2008，17（13）：2030－2038.

［12］ Moumne L，F(xiàn)ellous M，Veitia R A.Deletions in the polyAlanine－containing transcription factor FOXL2lead to intranuclear aggregation［J］.Hum Mol Genet，2005，14：3557－3564.

［13］ Moumne L，Batista F，Benayoun B A，et al.The mutations and potential targets of the forkhead transcription factor FOXL2［J］.Mol Cell Endocrinol，2008（282）：2－11.

［14］ Meyer A，Schartl M.Gene and genome duplications in vertebrates：the one－to－Four（－to－eight in fish）rule and the evolution of novel gene functions［J］.Curr Opin Cell Biol，1999，11：699－704.

［15］ Jiang W B，Yang Y H，Zhao D M，et al.Effects of sexual steroids on the expression of foxl2 in Gobiocypris rarus ［J］.Comp Biochem Physiol B，2011，160（4）：187－193.

［16］ Mazet F，Yu J K，Liberles D A，et al.Phylogenetic relationships of the Fox （Forkhead）gene family in the Bilateria ［J］.Gene，2003，316：79－89.

［17］ Magie C R，Pang K，Martindale M Q.Genomic inventory and expression of Sox and Fox genes in the cnidarian Nematostella vectensis［J］.Dev Genes Evol，2005，215：618－630.

［18］ Liu X L，Zhang Z F，Shao M Y，et al.Sexually dimorphic expression of foxl2 during gametogenesis in scallop Chlamys farreri，conserved with vertebrates ［J］.Dev Genes Evol，2012，（222）：279－286.

［19］ Pailhoux E，Vigier B，Chaffaux S，et al.A 11.7－kb deletion triggers intersexuality and polledness in goats［J］.Nat Genet，2001，29（4）：453－458.

［20］ Beysen D，Raes J，Leroy B P，et al.Deletions involving longrange conserved nongenic sequences upstream and downstream of FOXL2as a novel disease－causing mechanism in blepharophimosis syndrome［J］.Am J Hum Genet，2005，77（2）：205－218.

［21］ Benayoun B A，Batista F，Auer J，et al.Positive and negative feedback regulates the transcription factor FOXL2in response to cell stress：evidence for a regulatory imbalance induced by disease－causing mutations ［J］.Hum Mol Genet，2009，18 （4）：632－644.

［22］ Hudson Q J，Smith C A，Sinclair A H.Aromatase inhibition re

duces expression of FOXL2in the embryonic chicken ovary［J］.Dev Dynam，2005，3：1052－1055.

［23］ Baron D，Cocquet J，Xia X，et al.An evolutionary and functional analysis of FoxL2in rainbow trout gonad differentiation ［J］.J Mol Endocrinol，2004，33：705－715.

［24］ Liu Z，Wu F，Jiao B.Molecular cloning of doublesex and mab－3－related transcription factor 1，forkhead transcription factor gene 2，and two types of cytochrome P450aromatase in Southern catfish and their possible roles in sex differentiation［J］.J Endocrinol，2007，194：223－241.

［25］ Guiguen Y，F(xiàn)ostier A，Piferrer F，et al.Ovarian aromatase and estrogens：Apivotal role for gonadal sex differentiation and sex change in fish［J］.Gen Comp Endocr，2010，165：352－366.

［26］ Govoroun M S，Pannetier M，Pailhoux E，et al.Isolation of chicken homolog of the FOXL2gene and comparison of its expression patterns with those of aromatase duing ovarian development［J］.Dev Dyn，2004，231：859－870.

［27］ Loffler K A，Zarkower D，Koopman P.Etiology of ovarian failure in blepharophimosis ptosis epicanthus inversus syndrome：FOXL2is a conserved，early－acting gene in vertebrate ovarian development［J］.Endocrinoloy，2003，144：3237－3243.

［28］ 劉深基，陳松森.降鈣素、降鈣素基因相關(guān)肽基因前體RNA的加工 ［J］.國外醫(yī)學(xué)分析生物學(xué)分冊，1999，21（4）：196－201.

［29］ Cocquet J，Pannerier M，F(xiàn)ellous M，et al.Sense and antisense Foxl2transcripts in mouse［J］.Genomics，2005，85（5）：531－541.

［30］ 畢延震，黃捷，姜黎.天然反義RNA（NATs）：基因表達(dá)的重要調(diào)控分子 ［J］.中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報，2010，26（9）：788－795.

［31］ Benayoun B A，Auer J，Caburet S，et al.The posttranslational modification profile of the forkhead transcription factor FOXL2 suggests the existence of parallel processive／concerted modification parhways［J］.Proteomics，2008，8（15）：3118－3123.

［32］ Ellsworth B S，Egashira N，Haller J L，et al.FOXL2in the Pi－tuitary：Molecular，Genetic，and Developmental Analysis［J］.Mol Endocrinol，2006，20（11）：2796－2805.

［33］ Oshima Y，Uno Y，Matsuda Y，et al.Molecular cloning and gene expression of Foxl2in the frog Rana rugosa ［J］.Gen Comp Endocri，2008（159）：170－177.

［34］ 曲中玉，陳子江.FOXL2—不孕有關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子 ［J］.生殖與避孕，2006，1：40－43.

［35］ Wang D S，Kobayashi T，Zhou L Y，et al.Molecular cloning and gene expression of Foxl2in the Nile tilapia，Oreochromis niloticus［J］.Biochem Bioph Res Co，2004（320）：83－89.

［36］ Nakamoto M，Mastsuda M，Wang D S，et al.Molecular cloning and analysis of gonadal expression of Foxl2in the medaka，Oryzias latipes［J］.Biochem Bioph Res Co，2006，344：353－361.

［37］ Batista F，Vaiman D，Dausset J，et al.Potential targets of FOXL2，a transcription factor involved in cranipfacial and follicular development，indentified by transcriptomics ［J］.Pro Natl Acad Sci USA，2007，104：3330－3335.

［38］ Uda M，Ottolenghi C，Crisponi L，et al.Foxl2disruption causes mouse ovarian failure by pervasive blockage of follicle development［J］.Hum Mol Genet，2004，13：1171－1181.

［39］ Uhlenhaut N H，Jakob S，Anlag K，et al.Somatic Sex Reprogramming of Adult Ovaries to Testes by FOXL2Ablation ［J］.Cell，2009，139：1130－1142.

［40］ Caburet S，Georges A，L′hote D，et al.The transcription factor FOXL2：At the crossroads of ovarian physiology and pathology［J］.Mol Cell Endocrinol，2012，356（1－2）：55－64.

［41］ 姜波，王昭萍，于瑞海，等.多倍體貝類的繁殖生物學(xué)研究進(jìn)展［J］.海洋湖沼通報，2004（2）：73－79.

［42］ 吳仲慶.水產(chǎn)生物遺傳育種 ［M］.第三版.廈門：廈門大學(xué)出版社，1991：44－45.

［43］ 廖承義，徐應(yīng)馥，王遠(yuǎn)隆.櫛孔扇貝的生殖周期 ［J］.水產(chǎn)學(xué)報，1983，7（1）：1－13.