乙肝病毒大蛋白陽(yáng)性患者血清中HBV DNA及HBV血清學(xué)標(biāo)志物的檢測(cè)及意義

羅文明，陳 琳

（江蘇省南通市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 226006）

乙型肝炎病毒（HBV）感染是一個(gè)全球性的公共衛(wèi)生問題，它的發(fā)病率較高，且易慢性化，進(jìn)而發(fā)展為肝硬化甚至原發(fā)性肝癌。我國(guó)屬HBV感染高流行區(qū)，一般人群的乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）陽(yáng)性率為9.75%。2005年，我國(guó)將乙型肝炎首次列為當(dāng)今我國(guó)危害最嚴(yán)重的四大傳染病之一［1］。乙型肝炎病毒大蛋白（hepatitis B virus large surface protein，HBV-LP）是HBV包膜蛋白組成成分之一，存在于感染性Dane顆粒和亞病毒顆粒上，具有雙重跨膜拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)。不同狀態(tài)下HBV感染者血清中病毒顆粒HBV-LP含量不同，非復(fù)制期間不含病毒DNA的小球形顆粒和管形顆粒中HBV-LP含量極低，而含病毒DNA的Dane顆粒中HBV-LP的含量可達(dá)20%，因而提示 HBV-LP水平可能與 HBV含量密切相關(guān)［2］。本文對(duì)213例HBV-LP陽(yáng)性的乙型肝炎患者樣本進(jìn)行HBV DNA及HBV-M的檢測(cè)，旨在探討HBV-LP與HBV DNA及HBV-M間相關(guān)性及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 213例HBV-LP陽(yáng)性樣本均為本院2010年12月2日至2012年5月31日傳染病區(qū)住院患者，其中男154例，女59例，年齡16～86歲，平均年齡42.3歲。

1.2 試劑與方法 HBV-LP與HBV-M采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法，HBV DNA采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）法，其中HBV-M和HBV DNA試劑由上?？迫A生物有限公司提供，HBV-LP為北京貝爾生物工程公司產(chǎn)品。

2 結(jié) 果

2.1 213例HBV-LP陽(yáng)性患者各類HBV血清學(xué)陽(yáng)性模式中HBV DNA總陽(yáng)性率為86.38%，血清學(xué)模式中以HBsAg、乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）、乙型肝炎病毒核心抗體（抗－HBc）三者均為陽(yáng)性（大三陽(yáng)）的DNA陽(yáng)性患者數(shù)量最多，比例也很高（95.16%），其次為 HBsAg、乙型肝炎病毒e抗體（抗－HBe）、抗-HBc三者陽(yáng)性（小三陽(yáng)）33例（73.33%）和 HBsAg、抗-HBc二者陽(yáng)性25例（69.44%）。HBV-LP陽(yáng)性患者 HBV感染各種模式的HBV DNA檢測(cè)情況見表1。

表1 HBV-LP陽(yáng)性患者各類HBV血清學(xué)陽(yáng)性模式與HBV DNA檢測(cè)的相關(guān)性

2.2 213例HBV-LP陽(yáng)性樣本吸光度（A）值與HBV DNA之間的關(guān)系 測(cè)定HBV-LP陽(yáng)性吸光度（A）值與HBV DNA拷貝數(shù)存在正相關(guān)，即HBV DNA拷貝數(shù)越大，HBV-LP測(cè)定的吸光度（A）值越大（表2）。

表2 213例HBV-LP陽(yáng)性樣本吸光度（A）值與HBV DNA陽(yáng)性拷貝數(shù)的相關(guān)性

3 討 論

HBV DNA是HBV感染與復(fù)制的直接證明，但DNA檢測(cè)不出并不意味著已經(jīng)清除了病毒，因?yàn)樽鳛椴《緩?fù)制重要指標(biāo)的肝內(nèi)cccDNA的降低遠(yuǎn)低于血清HBV DNA的水平，血清HBV DNA不能真實(shí)準(zhǔn)確地反映肝組織內(nèi)HBV感染及復(fù)制的情況，尤其在DNA低水平時(shí)，肝內(nèi)DNA仍可維持一定水平。有動(dòng)物模型證實(shí)HBV感染者血清的感染性不僅依賴于Dane顆粒的多少，還依賴于富含大蛋白的亞病毒顆粒的數(shù)量［3］。大蛋白HBV-LP是 HBV Dane顆粒和亞病毒顆粒（管狀顆粒）的主要包膜成分，與HBV復(fù)制程度密切相關(guān)，在感染早期，它與細(xì)胞受體結(jié)合并介導(dǎo)病毒的細(xì)胞內(nèi)攝入，在感染晚期是病毒組裝和分泌的關(guān)鍵［4］。因此檢測(cè)HBV-LP作為臨床判定體內(nèi)HBV復(fù)制和治療及預(yù)后判斷具有重要意義。

本研究結(jié)果顯示，213例HBV-LP陽(yáng)性患者中共有184例（86.32%）血清 HBV DNA陽(yáng)性，表明二者具有良好的相關(guān)性。另仍有29例（13.68%）HBV DNA測(cè)定陰性，其原因可能為：（1）含有HBV-LP的亞病毒顆粒（管狀顆粒）的數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于完整病毒顆粒的數(shù)量，血液中消退時(shí)間也晚于HBV DNA。（2）HBV基因的變異頻繁和PCR引物局限性導(dǎo)致一定的漏檢率，而HBV-LP采用單克隆抗體，特異性識(shí)別，受基因變異影響小。（3）抗病毒藥物的廣泛使用，最大限度地抑制已經(jīng)形成的病毒繼續(xù)表達(dá)蛋白，以病毒DNA為模板的轉(zhuǎn)錄和病毒蛋白的轉(zhuǎn)譯表達(dá)不受影響。因此HBV DNA陰性并不意味病毒的完全清除，其亞病毒顆粒在細(xì)胞內(nèi)積累使細(xì)胞毛玻璃化，產(chǎn)生直接毒性作用，導(dǎo)致肝細(xì)胞液泡化和細(xì)胞凋亡。提示HBV-LP檢測(cè)可作為彌補(bǔ)HBV DNA的某些不足，亦可作為HBV復(fù)制活躍的可靠指標(biāo)。

表2結(jié)果顯示，HBV-LP檢測(cè)的吸光度（A）值與 HBV DNA拷貝數(shù)存在正相關(guān)，即A值越大，HBV DNA拷貝數(shù)亦越大，證實(shí)HBV-LP的檢測(cè)能有效地反映HBV復(fù)制的狀況，對(duì)臨床診斷和治療具有重要的參考價(jià)值。

［1］ 中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì).慢性乙型肝炎防治指南［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2005：7-8.

［2］ 秦峰，黃旭東.乙肝患者血清中乙肝病毒大蛋白含量及其與病毒復(fù)制的關(guān)系［J］.常州實(shí)用醫(yī)學(xué)，2011，27（6）：353.

［3］ 羅志勤，周欣，樂愛平，等.乙肝病毒大蛋白與 HBeAg、HBV-DNA相關(guān)性的臨床意義［J］.江西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)，2006，24（6）：512.

［4］ 王連躍，張岱，葛顏文，等.血清乙型肝炎病毒大蛋白檢測(cè)及其臨床意義［J］.中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志，2010，24（5）：349-351.