標(biāo)本溶血對(duì)生化檢驗(yàn)結(jié)果的影響

李明宏

（甘肅省靖遠(yuǎn)縣中醫(yī)院檢驗(yàn)科 730600）

筆者在日常工作中經(jīng)常會(huì)遇到各種原因?qū)е碌臉?biāo)本溶血，了解標(biāo)本溶血對(duì)部分檢驗(yàn)結(jié)果的影響，可以更好地預(yù)防標(biāo)本溶血，并提高檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可信性。為了能及時(shí)客觀地分析生化指標(biāo)的變化是否具有臨床意義，應(yīng)當(dāng)詳細(xì)了解標(biāo)本溶血對(duì)各項(xiàng)血液生化指標(biāo)的影響。本文觀察了部分常用生化指標(biāo)在標(biāo)本溶血前后檢測(cè)結(jié)果的變化，目的在于為標(biāo)本溶血時(shí)血液生化結(jié)果分析提供一定的參考依據(jù)，盡量增加生化測(cè)定數(shù)據(jù)的可靠性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 儀器與試劑 邁瑞B(yǎng)S-400全自動(dòng)生化分析儀。

1.2 生化指標(biāo)的測(cè)定 分別測(cè)定總蛋白（TP）、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、乳酸脫氫酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、α-HBD、γ-谷胺 酰 轉(zhuǎn) 肽 酶 （γ-GT）、總 膽 紅 素 （TBIL）、直 接 膽 紅 素（DBIL）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、清蛋白（ALB）、總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）生化分析試劑盒，試劑全部用邁瑞原裝試劑。

1.3 溶血的血清標(biāo)本的制備 健康體檢者50例，禁食不禁水12h，各抽取靜脈血4mL，分別注入兩支干燥試管各2mL。其中一支讓其自然凝固，另一支在血液凝固前用金屬棒攪拌使其溶血，然后以3 000r／min離心10min，去上清液分別為未溶血和溶血的血清標(biāo)本。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)均采用SPSS14.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

研究結(jié)果顯示，由于標(biāo)本出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，會(huì)使得TP、AST、ALT、LDH、CK、γ-GT幾項(xiàng)指標(biāo)發(fā)生顯著的改變，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。而 TBIL、DBIL、ALB、TC、TG、HDL、LDL幾項(xiàng)指標(biāo)無(wú)顯著改變，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具體生化檢驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1、2。

表1 溶血前后有明顯變化的生化檢驗(yàn)結(jié)果比較（x±s）

表2 溶血前后無(wú)明顯變化的生化檢驗(yàn)結(jié)果比較（x±s）

3 討 論

3.1 AST 人紅細(xì)胞中AST活性約為血漿中的40倍。當(dāng)標(biāo)本溶血時(shí)，勢(shì)必引起血清中AST活性的升高，從而使溶血標(biāo)本的結(jié)果明顯高于未溶血標(biāo)本［1］。AST主要是作為肝損傷的敏感指標(biāo)，測(cè)定結(jié)果的偏高會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性的產(chǎn)生。故出現(xiàn)溶血標(biāo)本應(yīng)當(dāng)在報(bào)告中注明。

3.2 ALT 細(xì)胞內(nèi)ALT含量比血漿中高約7倍，因此溶血后ALT含量的增高主要來(lái)源于細(xì)胞內(nèi)ALT的大量釋放?？梢?jiàn)與AST相比，ALT受溶血影響小些，故對(duì)標(biāo)本的要求低一些，但在分析結(jié)果時(shí)要注意考慮溶血的影響。

3.3 TBIL 筆者使用的試劑盒是用重氮法測(cè)定總膽紅素的，最后生成紫紅色的耦氮膽紅素，主要在波長(zhǎng)540～560nm處有光吸收。而血紅蛋白在波長(zhǎng)540～550nm處有光吸收［2］，恰與耦氮膽紅素的比色波長(zhǎng)相近。因此溶血后紅細(xì)胞破裂時(shí)大量血紅蛋白進(jìn)入血清，勢(shì)必造成總膽紅素測(cè)定值的升高，是總膽紅素的正向干擾因素。此外，由于血紅蛋白與重氮試劑反應(yīng)形成的產(chǎn)物可破壞耦氮膽紅素，溶血對(duì)重氮法測(cè)定膽紅素同時(shí)存在負(fù)向干擾，使測(cè)定結(jié)果偏低，但該作用較輕微［3］，因此溶血后由于血紅蛋白對(duì)測(cè)定結(jié)果的干擾，膽紅素的測(cè)定結(jié)果往往偏高。

3.4 TP 用雙縮脲法進(jìn)行TP的測(cè)定，其測(cè)量的主波長(zhǎng)是540nm。在555nm處血紅蛋白會(huì)出現(xiàn)吸收峰，紅細(xì)胞溶血破裂以后，大量血紅蛋白會(huì)釋放到血清導(dǎo)致測(cè)量結(jié)果偏高［4］。

3.5 α-HBDH、LDHE LDHE在紅細(xì)胞內(nèi)的濃度是紅細(xì)胞外的160倍，輕微的溶血會(huì)引起結(jié)果偏高。LDHE的活力主要由α-HBDH來(lái)進(jìn)行反映，他們產(chǎn)生差異的原理一樣。

3.6 CK 采用連續(xù)監(jiān)測(cè)速率法對(duì)CK進(jìn)行測(cè)定。在紅細(xì)胞內(nèi)以及幾乎全部組織中都含有腺苷酸激醇（AK），對(duì)三磷酸肌酸和二磷酸腺苷（ADP）生成肌酸和三磷酸腺苷（ATP）的反應(yīng)產(chǎn)生催化作用，反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的ATP會(huì)引起CK的活性增加致使結(jié)果偏高。

3.7 γ-GT 其溶血標(biāo)本 Hb在500mg／L以上會(huì)導(dǎo)致γ-GT的活性降低，致使結(jié)果降低。

3.8 對(duì)肝炎病毒檢測(cè)結(jié)果的影響 溶血可造成假陽(yáng)性的檢測(cè)結(jié)果。有作者報(bào)道，當(dāng)濃度大于25%的紅細(xì)胞發(fā)生破裂溶血，即可導(dǎo)致乙型肝炎病毒表面抗原檢測(cè)的假陽(yáng)性。

3.9 對(duì)人類免疫缺陷病毒（HIV）抗體檢測(cè)的影響 據(jù)朱同華對(duì)100份標(biāo)本抗-HIV的檢測(cè)結(jié)果（OD值）的研究，發(fā)現(xiàn)92%的溶血標(biāo)本的OD值高于對(duì)應(yīng)的非溶血標(biāo)本的OD值，溶血可以使抗-HIV檢測(cè)結(jié)果的OD值平均升高0.011，可能造成假陽(yáng)性的檢測(cè)結(jié)果。

3.10 防范對(duì)策 標(biāo)本溶血是指在采集、運(yùn)送、分離和保存血液的過(guò)程中，由于各種原因，尤其是操作不當(dāng)引起的紅細(xì)胞在體外破裂，紅細(xì)胞的破裂會(huì)造成大量的細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)進(jìn)入血漿以及血清稀釋等系列變化，而造成的溶血現(xiàn)象。造成標(biāo)本溶血的因素有：（1）現(xiàn)在大部分醫(yī)院都采用真空管采血，有時(shí)因真空采血管負(fù)壓太大，血液進(jìn)入采血管后由于血細(xì)胞之間的激烈碰撞，導(dǎo)致細(xì)胞破裂發(fā)生溶血［5］。（2）因?yàn)樵嚬苜|(zhì)量不過(guò)關(guān)，真空采血管在制造過(guò)程中，試管內(nèi)壁處理不好導(dǎo)致血細(xì)胞掛壁而造成血細(xì)胞破裂導(dǎo)致溶血。（3）現(xiàn)在的真空采血管多由于硅化或加入促凝劑后，殘留的有機(jī)溶液對(duì)血細(xì)胞的破壞作用，導(dǎo)致血細(xì)胞破裂造成溶血［6］。（4）采血器具不合格，臨床所用采血器具均為一次性塑料制品，某些產(chǎn)品的增型穩(wěn)定劑不合格，并因聚合不完全而有毒性，可引起血液標(biāo)本溶血。（5）另外塑料材質(zhì)的促凝管促凝劑的配方跟血液標(biāo)本的質(zhì)量有很大關(guān)系。由于塑料管的凝血功能不如玻璃管理想，在正常情況下，血液標(biāo)本放置在無(wú)促凝劑的塑料管中，血液徹底凝固需要2h以上，如此漫長(zhǎng)的時(shí)間已無(wú)法滿足臨床檢測(cè)的需要，所以必須在塑料管內(nèi)加入適量的促凝劑。除某些促凝劑配方不當(dāng)，影響檢測(cè)結(jié)果外，血液與促凝劑快速接觸導(dǎo)致血液急劇凝固也可引起血細(xì)胞破裂而產(chǎn)生溶血現(xiàn)象。（6）分離操作不當(dāng)，用破裂的玻璃管盛放血標(biāo)本，離心時(shí)細(xì)胞破裂，標(biāo)本溶血；離心時(shí)提速太快，離心管和套管底部有硬物，使紅細(xì)胞過(guò)度擠壓，產(chǎn)生溶血。文獻(xiàn)報(bào)道因分離操作不當(dāng)導(dǎo)致標(biāo)本溶血占41.2%［7－8］。（7）護(hù)士采血不規(guī)范也容易造成標(biāo)本溶血，如：操作者采血時(shí)將止血帶扎得太緊，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，采血時(shí)負(fù)壓過(guò)大，將血液從注射器中推到試管中，紅細(xì)胞受外力而溶血；采血時(shí)定位進(jìn)針不準(zhǔn)針尖在靜脈中探來(lái)探去，造成血腫和血樣溶血；血液與抗凝劑混勻時(shí)，試管用力過(guò)猛或運(yùn)輸時(shí)動(dòng)作過(guò)大；相對(duì)試管中的抗凝劑來(lái)說(shuō)采血量不足，由于滲透壓的改變發(fā)生溶血；靜脈穿刺處用乙醇消毒，乙醇未干即開(kāi)始采血也會(huì)發(fā)生溶血；注射器和針頭連接不緊，采血時(shí)空氣進(jìn)入，產(chǎn)生泡沫，發(fā)生溶血；皮膚穿刺時(shí)，為增加血流而擠壓穿刺部位或從皮膚上直接吸血，都可以造成溶血。

以上諸多原因都會(huì)造成標(biāo)本溶血，提示必須做好檢驗(yàn)前工作，具體到護(hù)士的規(guī)范采血、采血管的選擇以及檢驗(yàn)工作者做血液分離等等。溶血后AST、TBIL、ALT比溶血前高；CRE比溶血前低。血液標(biāo)本檢驗(yàn)前的諸多因素均可使紅細(xì)胞成分遭到破壞產(chǎn)生溶血，從而使檢驗(yàn)結(jié)果失去真實(shí)性和準(zhǔn)確性，影響疾病的診斷和治療。（1）應(yīng)掌握采集血液標(biāo)本的正確方法：臨床采血多選用肘正中靜脈或貴要靜脈，嬰幼兒多選用頸外靜脈或股靜脈，避免選擇過(guò)細(xì)的靜脈，更不要從輸液管處采血；遇到采血困難的患者，扎止血帶時(shí)間不可過(guò)長(zhǎng)，亦不要反復(fù)拍打穿刺部位，以防機(jī)械刺激造成溶血。正確的靜脈采血方法是熱敷穿刺部位，等血管充盈后再采血，無(wú)法采集合格標(biāo)本時(shí)，將采集的帶泡沫的血液標(biāo)本立即送檢，不要使其干燥而影響檢測(cè)。（2）嚴(yán)格按照操作規(guī)程辦事：采血時(shí)要選擇好穿刺部位，常規(guī)消毒待消毒液干燥后，找準(zhǔn)血管，爭(zhēng)取一針見(jiàn)血，并徐徐轉(zhuǎn)動(dòng)針?biāo)ú杉?，向試管注血時(shí)，要沿著試管壁緩慢注入，不得將泡沫注入試管。（3）妥善保存標(biāo)本：標(biāo)本送入檢驗(yàn)科后，應(yīng)放在室溫下保存，以防止發(fā)生溶血。在血液標(biāo)本的運(yùn)輸過(guò)程中，防止過(guò)度振蕩而發(fā)生溶血。（4）嚴(yán)把注射器及試管的質(zhì)量關(guān)：嚴(yán)格把握一次性注射器、一次性試管的進(jìn)貨渠道，保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，減少患者不必要的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和痛苦。因此，在采血、檢驗(yàn)過(guò)程中必須注意細(xì)心操作，并注意注射器、針頭和試管的質(zhì)量。在報(bào)告檢測(cè)結(jié)果時(shí)要注意溶血的影響，并在數(shù)據(jù)中加以標(biāo)注。

綜上所述，造成標(biāo)本溶血的原因是多方面的，為了避免標(biāo)本溶血對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果造成的影響，應(yīng)做好從選擇采血器械到護(hù)士采血規(guī)范各方面工作。標(biāo)本溶血會(huì)對(duì)部分檢驗(yàn)結(jié)果造成嚴(yán)重影響，在測(cè)定中應(yīng)盡量避免標(biāo)本溶血，如標(biāo)本溶血應(yīng)充分考慮對(duì)部分檢驗(yàn)項(xiàng)目的影響，并報(bào)告臨床醫(yī)生，如果必要建議重新采集樣本。

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