血清肌酸激酶活性檢測的分析測量范圍建立與評(píng)價(jià)

潘錫龍

（廣東省中山市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 528451）

血清肌酸激酶（CK）活性與精神病發(fā)病期的陽性癥狀及病情關(guān)系密切且平行，特別在發(fā)病期會(huì)異常升高；在協(xié)助精神疾病診斷、療效監(jiān)測和預(yù)后判斷中有重要作用［1－3］。現(xiàn)結(jié)合臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（CLSI）EP6-A 文件要求及相關(guān)文獻(xiàn)［4－6］，針對(duì)其活性檢測分析測量范圍的建立展開相關(guān)試驗(yàn)與分析討論。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本準(zhǔn)備 收集足夠量來自中山市第三人民醫(yī)院就診患者高值CK血清混合標(biāo)本，要求超過廠家提供的線性范圍，離心后取上清液作為高值標(biāo)本（H）；以同樣方法收集CK盡可能低的低值標(biāo)本（L）；要求標(biāo)本新鮮、無黃疸、無脂濁和無溶血。

1.2 儀器與試劑 日立7020全自動(dòng)生化分析儀；上?？迫A公司生產(chǎn)的CK試劑（批號(hào)20120112）；英國朗道的質(zhì)控品（批號(hào)714UN、608UE）；eppendorf精度移液槍。

1.3 方法

1.3.1 一系列試驗(yàn)標(biāo)本配制 將標(biāo)本 H和L按9L，8L＋1H，7L＋2H，6L＋3H，5L＋4H，4L＋5H，3L＋6H，2L＋7H，1L＋8H，9H的配比關(guān)系進(jìn)行配制，得到10個(gè)試驗(yàn)標(biāo)本（S1～S10）。

1.3.2 試驗(yàn)標(biāo)本檢測 使用7020生化儀配合科華試劑對(duì)10個(gè)試驗(yàn)標(biāo)本進(jìn)行檢測，每個(gè)標(biāo)本重復(fù)測定2次。7020生化儀經(jīng)過校準(zhǔn)并且質(zhì)控在控，記錄檢測結(jié)果。各種操作應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行相應(yīng)操作規(guī)程，要求在當(dāng)天內(nèi)完成檢測。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 對(duì)試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行多項(xiàng)回歸分析。設(shè)定本實(shí)驗(yàn)室重復(fù)性和線性允許誤差分別為3%和5%。

2 結(jié) 果

2.1 一系列試驗(yàn)標(biāo)本檢測結(jié)果，見表1。

表1 10個(gè)不同濃度試驗(yàn)標(biāo)本檢測結(jié)果（U／L）

i＝S1，S2，…S10，Ri1為第i個(gè)試驗(yàn)標(biāo)本測量結(jié)果1與測量均值的百分比，Ri2為第i個(gè)試驗(yàn)標(biāo)本測量結(jié)果2與測量均值的百分比，L為試驗(yàn)標(biāo)本總數(shù)，2為重復(fù)測定2次。計(jì)算得誤差CVr＝1.784%，小于3%的設(shè)定目標(biāo)，不精密度符合要求，可直接用于多項(xiàng)回歸分析。

2.2 下面將對(duì)表1數(shù)據(jù)進(jìn)行多項(xiàng)式回歸分析，結(jié)果見表2。

表2 多項(xiàng)式線性回歸分析結(jié)果

在表2中，二次回歸多項(xiàng)式非線性系數(shù)b2（t＝－0.097，P＝0.926＞0.05）不具顯著性，三次回歸多項(xiàng)式b2（t＝3.080，P＝0.022＜0.05）與b3（t＝－3.156，P＝0.020＜0.05）均具顯著性，且有較小的回歸標(biāo)準(zhǔn)誤，所以，最適多項(xiàng)式為三次。

2.3 線性偏倚分析 從表2可知，一次多項(xiàng)式為Y＝396.255 X＋1.955，三次多項(xiàng)式為Y＝－0.492 X3＋6.584 X2＋374.079 X＋13.687。三次多項(xiàng)式與一次多項(xiàng)式預(yù)期值及線性偏離結(jié)果見表3。

表3 三次多項(xiàng)式與一次多項(xiàng)式預(yù)期值及線性偏離結(jié)果

由表3可見，第一個(gè)濃度點(diǎn)大大超過實(shí)驗(yàn)室設(shè)定的5%允許偏差，因而判斷CK在13.5～3 554.0U／L呈非線性，且其引入的誤差不能被接受。故必須進(jìn)行修正重新分析。

2.4 多項(xiàng)式回歸修正 以加入H相對(duì)量為X軸，標(biāo)本實(shí)測均值為Y軸繪制散點(diǎn)圖，見圖1。從圖1可以看出，最后一個(gè)濃度點(diǎn)可能存在較大偏差，試圖去掉此點(diǎn)后，重新作多項(xiàng)式回歸修正分析，結(jié)果見表4。從表4可知，二次回歸多項(xiàng)式非線性系數(shù)b2（t＝1.213，P＝0.271＞0.05）和三次回歸多項(xiàng)式b2（t＝1.974，P＝0.105＞0.05）、b3（t＝－1.753，P＝0.140＞0.05）均不具顯著性。一次多項(xiàng)式b1（t＝273.253，P＝0.000＜0.05）具顯著性，可直接判斷為線性，其一次多項(xiàng)式為Y＝397.442 X－1.211。

圖1 H相對(duì)加入量與實(shí)測均值散點(diǎn)圖

表4 多項(xiàng)式回歸修正分析結(jié)果

3 討 論

分析測量范圍是反映實(shí)驗(yàn)方法學(xué)性能的重要指標(biāo)之一。在日常檢測過程中標(biāo)本真實(shí)濃度只有在分析測量范圍內(nèi)才能保證其檢測結(jié)果的可靠性，否則，可能會(huì)導(dǎo)致分析結(jié)果的假性偏高或偏低。故分析測量范圍的建立有助于獲得準(zhǔn)確可靠的檢測結(jié)果。分析測量范圍的評(píng)價(jià)主要有平均斜率法、EP6-A方法和CAP-IRC方法，但相對(duì)最好的為 EP6-A方法［7］。為了盡量避免由于基質(zhì)效應(yīng)帶來的影響，試驗(yàn)使用了低值混合血清（L）作為稀釋介質(zhì)［7］。

應(yīng)用科華試劑在日立7020生化儀上檢測CK有理想的精密度，得到誤差CVr＝1.784%，小于3%的設(shè)定目標(biāo)，可直接用于對(duì)精密度要求較高的多項(xiàng)式回歸分析。從表2和圖1可以看出，三次多項(xiàng)式非線性系數(shù)b2、b3與0之間的差異性顯著（P＜0.05），存在非線性關(guān)系；且有最小的回歸標(biāo)準(zhǔn)誤，故，最適多項(xiàng)式為三次。接著進(jìn)行線性偏倚分析，即每個(gè)試驗(yàn)樣本濃度處線性偏倚與設(shè)定誤差的比較。如果偏倚小于設(shè)定誤差說明非線性只是在統(tǒng)計(jì)學(xué)上的結(jié)論，但在臨床工作中是可以接受的，否則就不可接受。經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)第一個(gè)濃度點(diǎn)處的偏倚為86.90%大于設(shè)定的5%，并由圖1觀察到可能由于最后一個(gè)濃度點(diǎn)存在較大偏差引起。故去掉該濃度點(diǎn)重新分析，得到二次和三次多項(xiàng)式非線性系數(shù)與0之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），直接判斷為線性，最適模型為一次多項(xiàng)式Y(jié)＝397.442 X－1.211，其檢測在13.5～3 178.5U／L范圍內(nèi)呈線性，比試劑說明書規(guī)定的（0～2 000U／L）要寬得多。也包含CK參考范圍25～200U／L在內(nèi)。故可確定13.5～3 178.5 U／L為其分析測量范圍。由表4中一次多項(xiàng)或b0（t＝－0.175，P＞0.05）與0的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明截距只是由統(tǒng)計(jì)引入的，而實(shí)際的曲線通過原點(diǎn)。

通過本次研究可知，應(yīng)用科華試劑配合日立7020生化儀檢測CK可得到比較理想的分析測量范圍，能夠滿足大部分精神臨床常規(guī)檢測。對(duì)高于3 178.5U／L的標(biāo)本應(yīng)使用低值或滅活血清進(jìn)行稀釋，使得稀釋后濃度在13.5～3 178.5U／L內(nèi)，然后重測，以保證檢測結(jié)果的可靠性。

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