象拔蚌人工育苗技術(shù)研究

劉明坤, 王昌勃, 孔令鋒, 李 琪

(中國海洋大學(xué) 海水養(yǎng)殖教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 山東 青島 266003)

象拔蚌(Panopea generosa)隸屬瓣鰓綱, 海螂目,縫棲蛤科, 海神蛤?qū)? 是一種大型埋棲型貝類, 成體主要生活在潮下帶至 110 m的水下底質(zhì)中, 埋棲深度因底質(zhì)性質(zhì)而異, 通常為 0.6～1.0 m, 是北美洲太平洋沿岸的重要經(jīng)濟(jì)貝類[1]。象拔蚌肉味鮮美, 營養(yǎng)價(jià)值高,深受消費(fèi)者喜愛。近年來, 由于北美洲捕撈配額制度的實(shí)施[2], 加之棲息地破壞等原因, 象拔蚌的漁獲量正逐年下降。從20世紀(jì)70年代開始, 國外水產(chǎn)科研機(jī)構(gòu)已相繼開展了象拔蚌的人工育苗和養(yǎng)成技術(shù)的研究工作[3]。

目前, 中國市場上的象拔蚌完全依賴進(jìn)口, 美國和加拿大的象拔蚌年產(chǎn)量在3000 t左右, 年收入達(dá)3～4億美元, 其中, 每年有 1000～1200 t銷往中國, 價(jià)值為1～1.5億美元[4]。山東、遼寧等地沿海灘涂面積廣闊, 開展象拔蚌的人工繁殖及增養(yǎng)殖技術(shù)研究, 對于增加養(yǎng)殖新品種具有重要意義。國內(nèi)學(xué)者雖然在 20世紀(jì) 90年代對象拔蚌的引種、育苗和養(yǎng)成技術(shù)進(jìn)行過探索[4-7],但是由于育苗和養(yǎng)成周期長, 死亡率高等原因, 始終沒有建立起成熟的規(guī)?；绶N培育和養(yǎng)成技術(shù)。本文對從美國和加拿大引進(jìn)的象拔蚌親貝的促熟、人工催產(chǎn)和幼蟲培育等人工繁育關(guān)鍵技術(shù)進(jìn)行了研究。

1 材料與方法

1.1 親貝促熟

人工育苗試驗(yàn)在山東省威海南洋生物技術(shù)有限公司進(jìn)行。試驗(yàn)用親貝于2012年3月采捕于美國西雅圖和加拿大哥倫比亞海域。親貝洗刷干凈后, 放入20 m3水泥池中促熟。促熟密度1～2個(gè)/m3, 初始溫度6℃, 暫養(yǎng)3～4 d后, 每天升溫0.5℃, 升至11～12℃恒溫待產(chǎn)。促熟期間日投餌2次, 餌料以三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)為主, 餌料細(xì)胞密度為2～3萬個(gè)/mL, 輔以人工配合餌料螺旋藻粉和蛋黃。每日倒池1次, 連續(xù)充氣。

1.2 親貝的誘導(dǎo)排放與孵化

種貝促熟 20～23 d, 積溫達(dá)到 220℃以上時(shí), 配子發(fā)育成熟, 可進(jìn)行人工催產(chǎn)。采用升溫和藻液刺激相結(jié)合的方法, 誘導(dǎo)溫度為16℃, 藻液細(xì)胞濃度3～4萬個(gè)/mL。受精卵孵化密度為30個(gè)/mL, 孵化期間每30 min攪池1次。

1.3 幼蟲培育

胚胎發(fā)育至D形幼蟲階段后, 用300目篩絹選優(yōu)至30 m3水泥池中進(jìn)行幼體培育。幼蟲培育密度4個(gè)/mL,附著時(shí)減少至1～2個(gè)/mL。培育用水經(jīng)二級沙濾、鍋爐升溫、500目網(wǎng)袋過濾后入池使用。幼蟲培育水溫16～18℃, 鹽度28～30, 連續(xù)微量充氣。日換水2次, 每次1/2水體, 7 d倒池1次。附后不再倒池, 每次換水量增至培育水體的 2/3～1。餌料以金藻(Isochrysis zhanjiangensis)為主, 輔以扁藻(Platymonas subcordiformis)和海洋紅酵母, 日投餌 6次, 浮游期餌料細(xì)胞密度為0.3～0.6萬個(gè)/mL, 附著后增加至0.8～1.2萬個(gè)/mL。

1.4 附著變態(tài)

幼蟲生長至350～380 μm, 出現(xiàn)足和水管原基時(shí)進(jìn)入附著變態(tài)階段。分別以細(xì)砂(粒徑: 0.30～0.45 mm)、聚乙烯網(wǎng)片、波紋板和卵石(粒徑: 2～3 cm)為附著基, 研究不同附著基對幼體附著變態(tài)誘導(dǎo)效果的影響。幼體培育密度為1個(gè)/mL, 每組試驗(yàn)設(shè)3個(gè)重復(fù)。投放附著基5 d后統(tǒng)計(jì)各附著基的單位面積(cm2)附苗量。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

利用SPSS16.0對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析, 用單因素方差分析(ANOVA)比較不同附著基的附苗效果, 并進(jìn)行Duncan多重比較, 差異顯著性水平設(shè)為P＜0.05。

2 結(jié)果

2.1 受精與孵化

親貝經(jīng)誘導(dǎo)刺激后, 水管充盈挺直, 進(jìn)出水管變紅、擴(kuò)大。雄性先排, 精子呈煙霧狀, 雌性產(chǎn)卵呈顆粒狀或扁平塊狀。雌貝排卵可持續(xù)2 h, 成熟卵子呈圓形、淡紅色, 排出后即分散, 不粘連, 卵徑82 μm。受精卵在不同水溫下孵化時(shí)間不同, 水溫11℃時(shí)需83 h發(fā)育至D形幼蟲, 16℃時(shí)僅需46 h(表1)。

2.2 幼蟲培育

浮游幼蟲的生長曲線如圖1所示。浮游幼蟲在D形幼蟲階段生長緩慢, 殼長平均日增長6.2 μm(1～5 d)。在達(dá)到殼長180 μm的殼頂期幼蟲之后, 生長明顯加快, 殼長平均日增長 16.8 μm(6～20 d)。

表1 水溫對象拔蚌受精卵孵化時(shí)間的影響Tab. 1 The hatching time of the larvae of P. generosa at different temperatures

圖1 象拔蚌浮游幼蟲的生長Fig. 1 Growth of larval of P. generosa

幼蟲各階段的發(fā)生時(shí)間和特征描述見表2, 選幼時(shí)D形幼蟲殼長120 μm, 經(jīng)過18～20 d的培育, 殼長達(dá)到 340～380 μm, 可以清晰地看到鰓弓和平衡囊,足能伸出殼外, 面盤發(fā)達(dá), 仍具有浮游能力, 此時(shí)適合投放附著基。在以細(xì)砂為附著基時(shí), 幼蟲發(fā)育至27～35 d可觀察到單管稚貝, 稚貝身體后端有一出水管, 38～45 d發(fā)育至雙管稚貝, 出水管下部發(fā)育出進(jìn)水管, 此時(shí)進(jìn)出水管較短, 能自由縮入殼中。投放附著基 47 d后, 可觀察到具備成貝外形特征的幼貝,進(jìn)出水管紅褐色, 不能縮入殼中。

2.3 附著基對幼體附著變態(tài)的影響

投放附著基5 d后, 細(xì)砂、聚乙烯網(wǎng)片、波紋板和卵石 4種附著基的單位面積平均附苗量分別為(4.57±0.75)個(gè)/cm2, (0.42±0.09)個(gè)/cm2, (0.06±0.04)個(gè)/cm2和(2.19±0.61)個(gè)/cm2。不同附著基的采苗率依次為:細(xì)砂＞卵石＞聚乙烯網(wǎng)片＞波紋板, 各組之間差異性顯著(P＜0.05)。

表2 象拔蚌幼蟲發(fā)育階段的特征描述Tab. 2 The developmental timetable and characters of larvae of P. generosa

圖2 象拔蚌幼體不同附著基附苗量Fig. 2 The settling rates of P. generosa for four substrates

3 討論

在貝類人工育苗過程中, 親貝性腺發(fā)育的好壞決定著人工育苗的成敗, 因而親貝的促熟環(huán)節(jié)十分重要。本研究所用親貝從國外引進(jìn), 經(jīng)過長途運(yùn)輸,需要暫養(yǎng)恢復(fù)[8]。孔寧等[9]在庫頁島厚蛤蜊(Pseudocardium sachalinense)親貝促熟培育中, 將從國外引進(jìn)的親貝暫養(yǎng)5～7 d, 保證了親貝的成活率。本試驗(yàn)中象拔蚌親貝入池后暫養(yǎng)3～4 d, 不進(jìn)行升溫,有效避免了因環(huán)境變化劇烈導(dǎo)致親貝大量死亡的情況發(fā)生。親貝促熟培育期間, 合適地投放活餌料及人工餌料, 既能保證親貝的攝食, 滿足性腺發(fā)育所需要的營養(yǎng)物質(zhì), 又能保持水質(zhì)新鮮, 是育肥催熟的關(guān)鍵。鄧陳茂等[10]在珠母貝(Pinctada margaritifeta)親貝人工促熟培育中, 混合投喂三角褐指藻、鴨蛋黃、活酵母取得了滿意的效果。魏振華等[6]在象拔蚌親貝促熟時(shí)投喂硅藻, 親貝也能成熟產(chǎn)卵、排精。本試驗(yàn)中不僅投喂活餌料硅藻, 而且輔以螺旋藻粉、蛋黃等人工配合餌料, 使?fàn)I養(yǎng)更加均衡, 達(dá)到了良好的促熟效果。

貝類的人工催產(chǎn)有升溫刺激、流水刺激、陰干刺激、化學(xué)藥物刺激等多種方法, 一般來說, 多種方法結(jié)合誘導(dǎo)比單一方法效果要好。本試驗(yàn)中, 采用升溫和藻液刺激誘導(dǎo)相結(jié)合的方法成功進(jìn)行了催產(chǎn)。關(guān)于藻液刺激親貝產(chǎn)卵的報(bào)道并不多見, 鄧陳茂[10]]、符韶等[11]]在珠母貝的親貝人工催產(chǎn)中采用升溫與濃扁藻液相結(jié)合的方法均取得了滿意的效果。象拔蚌卵子的平均卵徑為82 μm, 比同屬其他物種的卵徑要大, 如新西蘭象拔蚌(P. zelandica)的平均卵徑為77 μm[12], 墨西哥象拔蚌(P. globosa)的平均卵徑為52 μm[13]。溫度是影響海洋貝類受精卵孵化的重要因素, 即在一定范圍內(nèi), 提高溫度可以縮短孵化時(shí)間。尖紫蛤(Soletellina acutaCai et Zhuang)的受精卵在26、29和32℃下的孵化時(shí)間分別是990、940和910 min[14]。象拔蚌的受精卵在11℃ 時(shí)需83 h完成孵化, 而在16℃時(shí)只需要46 h。

育苗周期長是象拔蚌人工育苗的一大特點(diǎn)。在象拔蚌的幼蟲培育過程中, 有 20 d的浮游期, 投放附著基后需繼續(xù)培育70 d左右才能達(dá)到5 mm的出池規(guī)格,整個(gè)育苗周期約90 d。這比新西蘭象拔蚌和其他一些雙殼貝類的育苗周期都要長, 新西蘭象拔蚌幼蟲的浮游期為16 d[11]。中國紫蛤(Hiatula chinensis)的幼蟲浮游期為17 d, 育苗周期67 d[15]。泥蚶(Tegillarca granosa Linnaeus)幼蟲的浮游期為 10 d左右, 育苗周期30～40 d[16]。長的育苗周期對培育條件, 特別是對附著后水質(zhì)的要求更為嚴(yán)格, 這也是影響育苗成敗的重要因素。象拔蚌幼蟲發(fā)育依次經(jīng)過擔(dān)輪幼蟲、D形幼蟲、殼頂幼蟲、匍匐幼蟲, 幼蟲發(fā)育階段無眼點(diǎn)出現(xiàn), 足和水管原基的出現(xiàn)是幼蟲附著變態(tài)的標(biāo)志。附著后經(jīng)過單管稚貝、雙管稚貝, 進(jìn)而發(fā)育成幼貝。浮游幼蟲變態(tài)前攝食量小, 生長緩慢, 附著變態(tài)后攝食量加大, 生長速度加快, 殼長明顯拉長, 貝苗已具備成體象拔蚌形態(tài)。

海洋環(huán)境中, 物理因子、化學(xué)因子和生物因子在不同的時(shí)間和空間尺度上都會(huì)影響貝類幼體的附著變態(tài)[17]。在水體條件不適合附著時(shí), 織紋螺(Nassarius)的面盤幼蟲可推遲變態(tài)達(dá)14 d之久, 而船蛆(Teredo)的面盤幼蟲找不到木頭便停止變態(tài), 海膽(Melita)的長腕幼蟲找不到合適的底質(zhì)也會(huì)推遲變態(tài)[18]。本研究中不同附著基的采苗率依次為: 細(xì)砂＞卵石＞聚乙烯網(wǎng)片＞波紋板, 各組之間差異顯著(P＜0.05)。這與魏振華[6]的研究結(jié)果基本相同。細(xì)砂附苗效果好, 幼苗生長快, 但殼體附著物較多, 且容易滋生纖毛蟲、聚縮蟲等原生動(dòng)物, 使死亡率升高。定期倒池?fù)Q砂可以有效清除池底殘留物, 保持水體清潔, 為象拔蚌稚貝生長提供穩(wěn)定良好的水質(zhì)環(huán)境。使用卵石和聚乙烯網(wǎng)片附著基, 苗體清潔, 但附苗較少, 生長緩慢。波紋板基本無幼蟲附著,這可能與附著基的粗糙程度有關(guān)[15]。鑒于自然條件下象拔蚌多棲息于細(xì)砂底質(zhì)的生活習(xí)性, 在今后的育苗生產(chǎn)中可采用細(xì)砂作為采苗和稚貝培育的基質(zhì), 在稚貝培育期間定時(shí)倒池?fù)Q砂, 防止原生動(dòng)物滋生及底質(zhì)環(huán)境的惡化, 從而達(dá)到良好的育苗生產(chǎn)效果。

[1]Feldman K, Vadopalas B, Armstrong D, et al. Comprehensive literature review and synopsis of issues relating to geoduck (Panopea abrupta)ecology and aquaculture production[R]. Seattle, WA: Washington State Department of Natural Resources, 2004.

[2]樊旭兵.可持續(xù)漁業(yè)的典范:加拿大象拔蚌漁業(yè)管理[J]. 海洋與漁業(yè), 2012(12): 78-87.

[3]Andersen A M. Spawning, growth, and spatial distribution of the geoduck clam,Panope generosaGould, in Hood Canal, Washington [D]. Washington: University of Washington, 1971.

[4]劉慶營.具有養(yǎng)殖前景的海產(chǎn)貝類品種—象拔蚌[J].廣東農(nóng)村實(shí)用技術(shù), 2007, (9): 35.

[5]張澎, 馬廣良. 貝類養(yǎng)殖技術(shù)之四-象拔蚌人工育苗技術(shù)[J]. 中國水產(chǎn), 2003, 9: 60-61.

[6]魏振華, 魏利平. 象拔蚌引種及人工育苗技術(shù)[J]. 齊魯漁業(yè), 2004, 21(8): 4-7.

[7]魏振華, 魏利平. 象拔蚌養(yǎng)殖技術(shù)的研究[J]. 齊魯漁業(yè), 2005, 21(12): 4-6.

[8]杜濤, 羅杰, 梁飛龍. 華貴櫛孔扇貝的人工育苗[J].湛江海洋大學(xué)學(xué)報(bào), 2004, 24(4): 69-71.

[9]孔寧, 李琪, 叢日浩, 等. 庫頁島厚蛤蜊的人工繁殖和胚胎發(fā)育[J]. 海洋科學(xué), 2011, 35(10): 6-10.

[10]鄧陳茂, 尹國榮, 符韶, 等. 珠母貝親貝人工促熟培育與催產(chǎn)的研究[J]. 湛江海洋大學(xué)學(xué)報(bào), 2005, 25 (1):14-16.

[11]符韶, 梁盛, 鄧陳茂, 等. 珠母貝人工育苗技術(shù)的初步研究 [J]. 海洋科學(xué), 2003(1): 11-13.

[12]Gribben P E, Hay B E. Larval development of the New Zealand geoduckPanopea zelandica(Bivalvia: Hiatellidae)[J]. New Zealand Journal of Marine and Freshwater Research, 2003, 37(2): 231-239.

[13]Aragon-Noriega E A, Chavez-Villalba J, Gribben P E, et al.Morphometric relationships, gametogenic development and spawning of the geoduck clamPanopea globosa(Bivalvia: Hiatellidae)in the central Gulf of California[J].Journal of Shellfish Research, 2007, 26(2): 423-431.

[14]黃洋, 黃海立, 呂廣煊, 等. 溫度和鹽度分別對尖紫蛤胚胎發(fā)育的影響[J]. 海洋科學(xué), 2011, 35(10): 117-122.

[15]吳進(jìn)鋒, 陳素文, 陳利雄, 等. 中國紫蛤的人工育苗[J]. 南方水產(chǎn), 2009, 5(4): 22-25.

[16]謝起浪, 張炯明, 柴雪良, 等. 泥蚶人工育苗技術(shù)探討[J]. 浙江海洋學(xué)院學(xué)報(bào), 2001, 20(3): 199-201.

[17]柯才煥, 馮丹青. 海洋底棲動(dòng)物浮游幼體附著和變態(tài)的研究[J]. 廈門大學(xué)學(xué)報(bào), 2006, 45(2): 77-82.

[18]鄭重. 海洋浮游幼蟲附著和變態(tài)的生態(tài)研究[J]. 生態(tài)學(xué)雜志, 1993, 12(3): 36-38.