食管癌組織中ERK與VEGF-C、CD44v6表達(dá)的相關(guān)性研究

慶琳琳 胡繼春 趙曉志

腫瘤的發(fā)生與多種因素有關(guān)，但“基因調(diào)控失衡”學(xué)說備受關(guān)注，因?yàn)樵S多研究已經(jīng)表明腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程與多種基因變化密切相關(guān)［1］。細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(extracellular-signal protein kinase，ERK)參與體內(nèi)多種生理與病理過程，調(diào)控多種信號(hào)傳遞蛋白的表達(dá)，但ERK對(duì)VEGF-C、CD44v6的調(diào)控作用研究則較少。因此，我們以免疫組化法研究食管癌組織中ERK、VEGF-C、CD44v6變化，探討三者之間的相關(guān)性及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2002年1月至2009年6月食管癌手術(shù)切除標(biāo)本50例，均經(jīng)病理切片證實(shí)為鱗狀細(xì)胞癌。其中男39例，女11例;年齡38～75歲。依據(jù)1999年WHO腫瘤國(guó)際組織學(xué)臨床病理分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期8例，Ⅱ期20例，Ⅲ期12例，Ⅳ期10例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移31例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移19例。所有患者術(shù)前均未行放、化療。另取術(shù)中切取的正常食管組織19例作為正常研究對(duì)照。

1.2 免疫組織化學(xué)法研究 即用型鼠抗人CD44v6單克隆抗體，兔抗人ERK、VEGF-C多克隆抗體均購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。免疫組化法依照試劑盒操作說明書進(jìn)行，用已知陽性切片作為陽性對(duì)照組，磷酸鹽緩沖液(PBS)替代一抗作為陽性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)以染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞數(shù)之和表示。具體為：(1)染色強(qiáng)度：0分為陰性，1分為弱陽性，2分為陽性，3分為強(qiáng)陽性;(2)陽性細(xì)胞數(shù)：0分為陽性細(xì)胞數(shù)＜5%，1分為陽性細(xì)胞數(shù)5% ～25%，2分為陽性細(xì)胞數(shù)25～50%，4分為陽性細(xì)胞數(shù)≥75%。以上兩者之和≤3為陰性，兩者之和＞3為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)和spearman等級(jí)相關(guān)分析兩者相關(guān)性，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ERK、VEGF-C、CD44v6表達(dá)結(jié)果 ERK、VEGF-C、CD44v6在正常食管組織表達(dá)率為10.5%、15.7%、21.1%，食管癌組織中表達(dá)率為54.0%、78.0%、74.0%，相互對(duì)比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P ＜0.05)。見表1。

2.2 ERK、VEGF-C、CD44v6表達(dá)與食管癌臨床病理特征的關(guān)系 ERK、VEGF-C、CD44v6表達(dá)與性別、年齡、臨床病理分期差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，而與淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)。見表2。

2.3 ERK與 VEGF-C、CD44v6的相關(guān)性分析結(jié)果 ERK與VEGF-C表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.653，P=0.005)，ERK與CD44v6表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.603，P=0.006)。

表1 ERK、VEGF-C、CD44v6在正常食管及食管癌組織中表達(dá)的陽性率 例(%)

表2 ERK、VEGF-C、CD44v6表達(dá)與臨床特征的關(guān)系

3 討論

現(xiàn)在大量研究認(rèn)為，腫瘤的發(fā)生與多種因素有關(guān)，但“信號(hào)傳導(dǎo)通路調(diào)控失衡”學(xué)說近年來備受關(guān)注，因?yàn)闄C(jī)體各種生理過程都需要精密的調(diào)節(jié)才能完成，形成一個(gè)復(fù)雜的信號(hào)傳導(dǎo)與調(diào)控網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)，某些信號(hào)傳導(dǎo)蛋白的改變可能引起受控“靶蛋白”表達(dá)異常，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。在眾多信號(hào)傳導(dǎo)途徑中，絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-associated protein kinase，MAPK)信號(hào)傳導(dǎo)途徑經(jīng)研究證明是一條很重要的傳導(dǎo)途徑，而其中 Raf-MEKERK通路尤其重要［2］。ERK是一個(gè)重要的調(diào)節(jié)蛋白酶，可以介導(dǎo)細(xì)胞外周期蛋白的表達(dá)，而后者又參與了機(jī)體內(nèi)多種蛋白表達(dá)，是機(jī)體內(nèi)生理反應(yīng)調(diào)控的關(guān)鍵位點(diǎn)。最新研究表明，ERK在多種腫瘤疾患中表達(dá)增高，例如肝癌、大腸癌、乳腺癌組織中均可見高表達(dá)［3］，所以推測(cè)其與腫瘤的發(fā)生可能有密切關(guān)系。

食管癌同其它惡性腫瘤一樣，具有浸潤(rùn)性生長(zhǎng)的特點(diǎn)，并可以發(fā)生遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移，這些行為與腫瘤細(xì)胞表面黏附分子表達(dá)變化有關(guān)，CD44v6是CD44的一種變型體，也具有黏附分子的特性，可以引起腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)中多種結(jié)構(gòu)蛋白發(fā)生反應(yīng)，過量表達(dá)可以引起細(xì)胞外基質(zhì)構(gòu)形發(fā)生變化，腫瘤細(xì)胞隨后發(fā)生位移，使其具備轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)能力，因此CD44v6蛋白可能參與腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移過程。已有研究表明，CD44v6與大腸癌，胃癌等腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移有關(guān)［4］，我們研究也顯示了CD44v6蛋白在食管癌組織中有高表達(dá)，并與腫瘤的淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)聯(lián)，這與近期的另一項(xiàng)關(guān)于食管癌的研究結(jié)果相似［5］，該研究也顯示CD44v6、VEGF-C與食管癌的發(fā)生存在相關(guān)性。腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移除自身運(yùn)動(dòng)能力增強(qiáng)外，腫瘤組織中微血管與淋巴管過量生長(zhǎng)也是為其轉(zhuǎn)移提供必需的條件之一。研究表明，腫瘤組織不斷增大與新生血管和淋巴管密切相關(guān)，沒有血管及淋巴管循環(huán)，腫瘤組織不可能增大，腫瘤細(xì)胞也不會(huì)發(fā)生轉(zhuǎn)移［6］。但這一過程有需要相關(guān)因子參加，VEGF-C是VEGF家族蛋白的一種重要蛋白，可以促進(jìn)血管及淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)，對(duì)腫瘤組織中血管淋巴管網(wǎng)絡(luò)形成具有重要意義。VEGF-C在多種腫瘤中有高表達(dá)，并且與腫瘤的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中也觀察到了VEGF-C在食管癌生長(zhǎng)到轉(zhuǎn)移過程中變化較大，即腫瘤組織表達(dá)高于正常組織，發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移組高于未發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移組，表明了VEGF-C是食管癌疾患中發(fā)生與發(fā)展的重要調(diào)節(jié)因子。

綜上所述，CD44v6和VEGF-C均可能參與了食管癌中癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移過程，更有意義的發(fā)現(xiàn)在于對(duì) ERK與 CD44v6和VEGF-C的相關(guān)性分析后所得的結(jié)果，因?yàn)榻Y(jié)果提示了ERK的表達(dá)與CD44v6和VEGF-C的表達(dá)呈正相關(guān)，所以ERK可能參與了CD44v6和VEGF-C的調(diào)控，可以設(shè)想ERK是一條信號(hào)傳導(dǎo)通路中一個(gè)上游調(diào)控蛋白，它的變化對(duì)下游蛋白CD44v6和VEGF-C有直接的影響，如能控制ERK高表達(dá)是否會(huì)對(duì)CD44v6和VEGF-C的表達(dá)產(chǎn)生影響則需要進(jìn)一步研究，而且機(jī)體內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)通路存在復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)性，所以確切的機(jī)制還需要大量的研究。

我們對(duì)食管癌中ERK、VEGF-C、CD44v6三者表達(dá)及相互關(guān)系研究中，可以得出初步結(jié)論：ERK、VEGF-C、CD44v6不但參與了食管癌的轉(zhuǎn)移過程，而且三者之間存在相互調(diào)節(jié)機(jī)制，所以它們可能成為以后進(jìn)一步研究的重要靶點(diǎn)。

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