復(fù)方穿蛭透皮貼醇提工藝研究

王麗娜，王冬梅，宋紅敏，齊佳悅，王新成 (吉林醫(yī)藥學(xué)院，吉林吉林 132013)

骨質(zhì)增生癥是中老年的常見病、多發(fā)病，中醫(yī)藥在治療骨質(zhì)增生癥方面獨具優(yōu)勢。復(fù)方穿蛭透皮貼是在傳統(tǒng)中醫(yī)驗方的基礎(chǔ)上，采用現(xiàn)代制劑技術(shù)研制開發(fā)的新型透皮給藥制劑，該方主要由阿魏、甲珠、水蛭、三七、乳香、沒藥、徐長卿等十余味中藥材組成，臨床用于骨質(zhì)增生的治療具有良好的效果。本研究采用乙醇提取處方中藥材有效成分，通過正交試驗考察了不同提取條件對主要有效成分三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1的影響，優(yōu)選出適合本制劑的最佳提取工藝，為該制劑的進一步研究提供實驗基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

日本島津LC-20AT高效液相色譜儀;LC-20AT泵;LC-solution色譜工作站。FA1104N電子分析天平;EYELA OSB-2000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(日本);SHZ-D(Ⅲ)循環(huán)水真空泵;KQ-250DE型數(shù)控超聲波清洗器。

三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1對照品均由中國藥品生物制品檢定所提供，批號依次為:110745-200516、110703-200424、110704-200318。

2 方法與結(jié)果

2.1 因素水平設(shè)計

根據(jù)工藝要求，確定乙醇濃度、乙醇倍量、提取時間、提取次數(shù)作為考察因素，每個因素選擇3個水平，用L9(34)正交表安排試驗見表1。以浸出物得率，三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1三種皂苷總含量為評價指標，采用綜合評分法進行數(shù)據(jù)分析，各指標權(quán)重系數(shù)依次為0.3、0.7。綜合評分值等于每項評價指標評分之和，其中每項評價指標評分的計算方法以浸出物得率為例:浸出物得率評分=浸出物得率/最大浸出物得率×權(quán)重系數(shù)(0.3)×100。

2.2 樣品中皂苷含量測定

2.2.1色譜條件

色譜柱:導(dǎo)津 C18-ODS柱(150 mm×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈-0.1%磷酸溶液梯度洗脫，洗脫時間分別為0、15、40 min，乙腈比率分別為 19%、19%、35%;流速:1.0 mL/min;檢測波長:203 nm;柱溫:35 ℃［1-4］。

表1 醇提工藝因素水平表

2.2.2標準曲線的制備

精密稱取三七皂苷R1對照品3.4 mg、人參皂苷Rg1對照品8.3 mg、人參皂苷Rb1對照品8.0 mg，用甲醇溶解于10 mL量瓶中，并定容至刻度作為對照品溶液，其中三七皂苷R1濃度為0.34 mg/mL，人參皂苷Rg1濃度為0.83 mg/mL，人參皂苷 Rb1濃度為0.80 mg/mL。精密吸取對照品溶液 2、4、6、8、10 μL分別注入液相色譜儀，以峰面積為縱坐標，進樣量(μg)為橫坐標繪制標準曲線。三七皂苷R1的回歸方程分別為Y=291 717X+62 432(r=0.999 8)，線性范圍0.68～3.40 μg;人參皂苷Rg1的回歸方程分別為Y=545 996X-26 701(r=0.999 9)，線性范圍1.66～8.30 μg;人參皂苷 Rb1的回歸方程分別為Y=374 464X+59 304(r=0.999 9)，線性范圍1.60 ～8.00 μg。

2.2.3供試品溶液的制備

按正交試驗提取各藥材，濃縮定容至100 mL量瓶中。精密量取濃縮液1 mL，加水10 mL稀釋，通過D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5 cm，柱高10 cm)，用水100 mL洗脫，棄去洗脫液，再用0.1%氫氧化鈉溶液80 mL洗脫，棄去洗脫液，用水100 mL洗至中性，最后以70%乙醇100 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加水20 mL使溶解，用水飽和正丁醇提取3次(30 mL，30 mL，20 mL)，合并正丁醇液，蒸干，殘渣用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，定容，即得。

2.2.4樣品的含量測定

將9份樣品按上述方法處理，采用高效液相色譜法測定三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1的含量，并計算三種皂苷總含量。結(jié)果見表2，方差分析見表3。

2.3 結(jié)果分析

根據(jù)以上試驗結(jié)果和方差分析可知，4因素中乙醇濃度對試驗具有顯著性影響，4因素對結(jié)果的影響順序為A＞C＞B＞D，即乙醇濃度＞提取時間＞乙醇倍量＞提取次數(shù)。根據(jù)各因素均值比較結(jié)果，兼顧工藝生產(chǎn)節(jié)約能源的要求，確定以A2B2C2D2為最佳提取工藝，即70%乙醇，8倍量，提取2次，每次1.5 h。

2.4 驗證試驗

稱取處方量藥材，按確立的最佳提取條件提取、干燥，計算浸出物得率，測定指標性成分含量，結(jié)果見表4。試驗結(jié)果表明，指標性成分處于較高水平，表明工藝優(yōu)選設(shè)計合理、穩(wěn)定、可行。

表2 醇提工藝正交試驗結(jié)果

表3 醇提工藝方差分析

表4 驗證試驗結(jié)果

3 討論

中藥復(fù)方中化學(xué)成分復(fù)雜，因此其工藝制劑研究應(yīng)以多指標控制和評價，這樣才更具全面性和科學(xué)性。復(fù)方穿蛭透皮貼是由阿魏、乳香、三七、徐長卿等多味藥材組成的復(fù)方制劑，因此本研究以浸出物得率，三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1三種皂苷總含量為評價指標，采用綜合評分法優(yōu)選提取工藝。根據(jù)兩指標成分在控制制劑質(zhì)量中的影響作用大小，設(shè)定其權(quán)重依次為0.3、0.7，這樣經(jīng)過方差分析優(yōu)選出的工藝條件更加合理。

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