高效液相色譜法檢測中藥制劑中的消炎成分

胡巧愛

(永康市食品藥品檢驗(yàn)所，浙江永康321300)

中藥制劑往往有一藥多用的效果，這是由于重要的成分錯綜復(fù)雜，很難提取和分離。如小兒雙解止瀉顆粒，除止瀉作用外還有解毒清熱即西醫(yī)所說的消炎作用;又例如復(fù)方腫節(jié)風(fēng)噴霧劑除利咽抗菌作用外也具有清熱抗菌消腫之效，這都屬于中藥成分的消炎作用。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法，分別以黃芩苷和異秦皮靛為指標(biāo)，來建立小兒雙解止瀉顆粒和復(fù)方腫節(jié)風(fēng)噴霧劑的成分含量檢測方法。

1 檢測儀器與藥劑

1.1 儀器

(1)儀器組一:日本島津產(chǎn)高效液相色譜儀，SPD－10AVP檢測器，SCL－AVP色譜工作站，LC－10AVP泵，KQ－400DB型超聲波清洗器，ALl04型梅特勒電子分析天平。(2)儀器組二:Agilentl100型高效液相色譜儀，VWD紫外檢測器，;G131lA四元泵，;G1313A手動進(jìn)樣閥，HypersilC18不銹鋼填充柱為色譜柱。

1.2 藥劑

(1)藥劑組一:小兒雙解止瀉顆粒供試品(批號030404，030405，030406，);黃芩苷對照品;色譜純?yōu)榱姿帷⒓状?、四氫呋?其他分析純。(2)藥劑組二:復(fù)方腫節(jié)風(fēng)噴霧劑供試品(批號083712，083713，083714);異秦皮靛對照品;色譜純?yōu)橐译?，雙蒸水;其他分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 條件

(1)組一:美國PhenomenexC18柱;流動相為甲醇－水－四氫呋喃 － 磷酸(100:150:25:0.1);流速為 1.0mL·min－1;檢測波長為287nm;進(jìn)樣量 20μL;理論塔板系數(shù) ＞2500[1]。(2)組二:美國PhenomenexC18柱;流動相為乙腈－0.1%磷酸水溶液(20:85);流速為1.0mL·min－1;檢測波長為346nm;進(jìn)樣量 10μL;理論塔板系數(shù) ＞1200[2]。

2.2 實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1 供試品藥液的制備

(1)組一:量取供試品10g并將其研細(xì)，準(zhǔn)確稱取0.1g放置在5mL量器內(nèi)，加水1.5mL后使用超聲融化，再加入6mol/L的HCl，充分混合后用水浴加熱6min，靜置20min后離心，去上清液，沉淀后用50%的乙醇溶解再置于50mL的量瓶中，再用50%的乙醇補(bǔ)液至刻度處，充分混合后過濾，續(xù)濾液為供試品溶液。(2)組二:精確量取復(fù)方腫節(jié)風(fēng)噴霧劑供試品溶液每次10mL，經(jīng)三氯甲烷萃取共5次，將萃取液合并后蒸干，將析出品加入甲醇溶解，所得液體即供試品溶液，置于25mL的量瓶中。

2.2.2 線性關(guān)系考查

(1)組一:準(zhǔn)確量取乙醇黃芩苷對照品溶液，用50%溶液稀釋至對照品溶液，然后以進(jìn)樣量 0.035、0.070、0.105、0.140、0.175、0.210μg 在上述條件下進(jìn)行峰面積測定，以黃芩苷量(μg)作為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，測繪標(biāo)準(zhǔn)曲線并得到回歸方程[3]為 Y=453379.5X －42669.1，r=0.996，黃芩苷進(jìn)樣與鋒面積線性關(guān)系良好的范圍為0.031～0.21μg。好的范圍在2.24～71.14μg。(2)組二:準(zhǔn)確量取異秦皮靛對照品，加甲醇稀釋至對照品溶液，充分搖勻后，分別精確量取0.05，1.00，2.00，2.00，2.00，4.00mL，分別置于容積為 100，100，100，50，25，25mL 的量瓶中，用甲醇稀釋補(bǔ)液至刻度[4]，充分混合后精確量取各10μL，滴入高效液相色譜儀中進(jìn)行峰面積測定，同組一的方法得到回歸方程為Y=421.582X+4.569，r=0.998，異秦皮靛進(jìn)樣與峰面積線性關(guān)系良好的范圍在 2.24～71.14μg·mL－1。

2.2.3 精密度試驗(yàn)

(1)組一:準(zhǔn)確量取對照品溶液20μL，連續(xù)5次進(jìn)樣進(jìn)行峰面積測定，統(tǒng)計(jì)結(jié)果得到RSD=0.71%(n=5)。(2)組二:同組一的做法，得到RSD=1.17%(n=5)。

2.2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

(1)組一:準(zhǔn)確量取 20μL 供試品溶液，在 0、2、4、8、12h時進(jìn)行同樣的測定，得到的結(jié)論為黃芩苷的峰值基本沒有變化，統(tǒng)計(jì)得到RSD=0.73%。(2)組二:同組一法得到RSD=0.81%。

2.2.5 重現(xiàn)性試驗(yàn)

(1)組一:精確稱取5 份0.1g的樣品，按 2.2.1(1)的步驟方法再次制備試劑，同法進(jìn)行提取測定，得到的結(jié)果為RSD=0.84%(n=5)。(2)組二:與組一同樣原理進(jìn)行組二的重復(fù)性試驗(yàn)，得到的結(jié)果為RSD=1.77%(n=5)。

2.2.6 回收率實(shí)驗(yàn)

(1)組一:準(zhǔn)確量取已經(jīng)實(shí)驗(yàn)過的5份供試品各0.1g，分別加入適量的對照品，重復(fù)2.2.1(1)步驟，對溶液進(jìn)行提取制備和測定，得到的平均回收率[5]為 101.35%，RSD=1.11%(n=5)。

(2)組二:與組一同樣原理對組二的實(shí)驗(yàn)用品進(jìn)行處理，進(jìn)行組二回收率試驗(yàn)，得到的處理結(jié)果為平均回收率為92.46%，RSD=2 .27%。

2.2.7 測定樣品

(1)組一:分別取不同批次的樣品精確量取試液5μg，將其注入到高效液相色譜儀中[6]，測定峰面積并計(jì)算含量，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表1。

表1 小兒雙解止瀉顆粒中黃芩苷的含量測定結(jié)果(mg/g，%)

(2)組二:同組一相同原理測定峰面積并計(jì)算藥物含量，得到的結(jié)果見表2。

表2 復(fù)方腫節(jié)風(fēng)噴霧劑中異秦皮靛的含量測定結(jié)果(mg·mL－1，%)

3 結(jié)論

筆者參考相關(guān)文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)其他的藥品檢測方法對中藥制劑復(fù)雜的藥物成分無法有效的分離提取[7]，就更不能對其藥物成分進(jìn)行分析測算精確，而使用高效液相色譜法對小兒雙解止瀉顆粒中黃芩苷的含量測定及對復(fù)方腫節(jié)風(fēng)噴霧劑中異秦皮靛的含量測定實(shí)驗(yàn)的操作步驟簡單、方便快捷，不需要對藥物成分進(jìn)行分離，可以直接檢測成分含量，而且檢測過程中通過精密度試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)、重現(xiàn)性試驗(yàn)、回收率實(shí)驗(yàn)、測定樣品等重重篩查，反復(fù)精確驗(yàn)證，保證了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。高效液相色譜法確實(shí)是檢測中藥制劑中藥品成分的有效方法。

4 討論

近年來，由于抗生素的濫用導(dǎo)致細(xì)菌耐藥性逐年增強(qiáng)，消炎藥物的療效越來越不理想，這就使得中藥制劑的消炎效果日益為醫(yī)療工作者所重視。中藥制劑的抗炎效果理想且使細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性的比率明顯偏低，但是，由于其本身成分復(fù)雜的原因致使中藥制劑無法在臨床上大量推廣。采用高效液相色譜法檢測中藥制劑中的消炎成分，高效、便捷、回收率高、可以較高精度地為中藥制劑檢測藥物成分的含量，是中藥制劑質(zhì)量控制的可靠依據(jù)。

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[3]高紅梅，張嘯環(huán).高效液相色譜法測定解郁安神顆粒中梔子苷的含量[J].長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，27(1):12-13

[4]井偉，唐熙，呂水源，等.高效液相色譜法檢測食品接觸產(chǎn)品中的三聚氰胺及其衍生物的遷移量[J].分析測試學(xué)報(bào)，2011，30(3):269-273

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