腎茶聯(lián)合潑尼松對多柔比星腎病大鼠核因子－KB、白介素－8水平的干預(yù)研究

王麗敏，穆斯塔凡，王 蕾

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院兒科，黑龍江佳木斯154003)

微小病變型腎病是小兒腎病綜合征最常見的類型之一，以大量蛋白尿(＞3.5g/d)、低蛋白血癥(＜30g/L)、高脂血癥及全身不同程度的水腫為主要臨床表現(xiàn)，大量蛋白尿及低蛋白血癥為最主要指標(biāo)。其中尿蛋白的產(chǎn)生與腎小球濾過膜的分子及電荷屏障受損有關(guān)。目前臨床對腎病綜合征主要采取糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑、抗凝等對癥治療，其中以糖皮質(zhì)激素為主要治療藥物，但長期單獨用藥會導(dǎo)致骨質(zhì)疏松等一系列副作用，給家庭帶來沉重的經(jīng)濟和心理負擔(dān)。核因子－KB(nuclear factor－KB)是一種具有多向性調(diào)節(jié)作用的核轉(zhuǎn)錄因子，與許多基因特別是免疫相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)密切相關(guān)，腎病綜合征患兒存在免疫功能紊亂，故可以通過調(diào)節(jié)NF－KB糾正其免疫失衡[1]。具相關(guān)研究表明[2]，核因子－KB與白介素－8具有直線正相關(guān)關(guān)系，而白介素－8在腎病綜合征的早期發(fā)病過程中發(fā)揮重要的作用，可通過激活中性粒細胞損傷足突細胞和基底膜，從而引起蛋白尿。腎茶具有顯著的免疫調(diào)節(jié)功能，抗炎[3]等作用。因此，我們通過多柔比星制備腎病綜合征大鼠模型，觀察探討腎茶和潑尼松聯(lián)合治療對多柔比星腎病大鼠核因子－KB、白介素－8水平的影響及其可能機制。

1 材料和方法

1.1 實驗動物及分組

6周齡雄性Wistar大鼠50只，體重100～120g，由大連醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心提供，兩次尿蛋白定性試驗均陰性。將50只大鼠隨機分為兩組:正常組(n=10)注射0.5mL生理鹽水，腎病組(n=40)按照王崢等[4]尾靜脈單次注射多柔比星(浙江省海正藥業(yè)有限股份公司)5mg/kg制備腎病綜合征模型。注射后第6天收集所有大鼠24h尿液，尿蛋白＞30mg/24h者為腎病綜合征模型成功。期間死亡5只，不合格者5只予以剔除。剩余腎病組再隨機分為3組:模型組(n=10)、腎茶組(n=10)、腎茶和強的松聯(lián)合治療組(n=10)。

1.2 研究方法

1.2.1 給藥方法:腎茶組和聯(lián)合治療組在造模成功后第7天開始給予腎茶(泉州市醫(yī)藥公司)灌胃給藥5mL/kg，正常組和模型組給予等量生理鹽水灌胃。聯(lián)合治療組在腎茶灌胃后1h給予潑尼松[5]，即在造模成功后第1～7天每天給藥13.5mL/kg(6.3mg/kg)第8～15天，每天減量10%，第16～28 天每天給藥 2.7mL/kg(1.25mg/kg)。

1.2.2 各組大鼠24h尿蛋白的測定:在多柔比星注射后第6、20、41天收集24h尿液，用全自動生化分析儀檢測24h尿蛋白定量。

1.2.3 各組大鼠核因子－KB、白介素－8的檢測:以下嚴格按照說明書進行操作，在第7、21、42天大鼠清晨空腹采靜脈抗凝血2mL，用淋巴細胞分離液分離出單個核細胞并用PBS液制成2×106/mL細胞懸液，同時采集非抗凝血1mL，分離血清置于－80℃冰箱保存?zhèn)溆茫肐L－8試劑盒、NF－KB試劑盒(美國Activemotif公司)分別檢測白介素－8和核因子－KB。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 尿蛋白的變化

模型組、腎茶組及聯(lián)合治療組的24h尿蛋白較正常組明顯升高，差別具有顯著性 (F=2564.88，319.59，1824.50，P均 ＜0.01)，但聯(lián)合治療組與腎茶組比較，尿蛋白明顯減少，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。見表1。

表1 各組大鼠尿蛋白定量(±s，mg/24h，n=10)

表1 各組大鼠尿蛋白定量(±s，mg/24h，n=10)

注:△與正常組比較P＜0.01，★與腎病組比較P＞0.05;●與腎病組比較P＜0.01;□與腎茶組比較P＜0.01。

7d 21d 42d正常組組別6.59±0.31 6.86±0.31 7.18±0.33模型組 40.89±1.15△ 101.67±11.13△ 209.1±6.21△腎茶組 38.49±1.21△ 92.67±7.88△★ 100±5.93△●聯(lián)合組 38.03±1.13△ 88.6±7.55△★ 56.4±9.42△●□

2.2 核因子－KB的變化

模型組、腎茶組及聯(lián)合治療組的核因子－KB水平較正常組明顯升高，差別具有顯著性 (F=118.97，98.41，218.33，P＜0.01)，但聯(lián)合治療組與腎茶組比較，核因子－KB水平明顯減少，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。見表2。

表2 各組大鼠核因子－KB(±s，OD 值，n=10)

表2 各組大鼠核因子－KB(±s，OD 值，n=10)

注:△與正常組比較P＜0.01;★與腎病組比較P＞0.05;●與腎病組比較P＜0.01;□與腎茶組比較P＜0.01。

7d 21d 42d正常組組別0.167±0.031 0.288±0.034 0.301±0.021模型組 0.405±0.012△ 0.507±0.041△ 0.713±0.030△腎茶組 0.349±0.028△ 0.484±0.022△★ 0.614±0.055△●聯(lián)合組 0.29±0.04△ 0.459±0.027△★ 0.359±0.053△●□

2.3 白介素－8的變化

模型組、腎茶組及聯(lián)合治療組的白介素－8水平較正常組明顯升高，差別具有顯著性(F=177.91，24.18，506.80，P均 ＜0.01)，但聯(lián)合治療組與腎茶組比較，白介素－8水平明顯減少，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。見表3。

表3 各組大鼠白介素－8(±s，pg/mL，n=10)

表3 各組大鼠白介素－8(±s，pg/mL，n=10)

注:△與正常組比較P＜0.01;★與腎病組比較P＞0.05;●與腎病組比較P＜0.01;□與腎茶組比較P＜0.01。

7d 21d 42d正常組組別2820±95 3184±69 3420±103模型組 3762±82△ 3957±228△ 4602±67△腎茶組 3504±74△ 3755±242△★ 3888±46△●聯(lián)合組 3340±72△ 3575±252△★ 3694±53△●□

2.4 相關(guān)性分析

腎病組、腎茶組及腎茶與潑尼松聯(lián)合治療組各組的NF－KB 與 IL－8具有相關(guān)關(guān)系 (r=0.963，0.979，0.916，P 均＜0.01);正常組 NF－KB與 IL－8不具有相關(guān)關(guān)系(r=0.106，P＞0.05)。腎病組、腎茶組及腎茶與潑尼松聯(lián)合治療組各組的尿蛋白與IL－8具有相關(guān)關(guān)系(r=0.980，0.881，0.908，P均 ＜0.01);正常組尿蛋白與IL－8不具有相關(guān)關(guān)系(r=0.099，P ＞0.05)。

3 討論

腎病綜合征在兒童其患病率為16/100000[6]，其發(fā)病機制極其復(fù)雜。有的學(xué)者認為[7]腎病綜合征可為抗體對腎小球基底膜的損傷所致，從而引起腎小球濾過膜結(jié)構(gòu)及電荷屏障變化，致使腎小球濾過膜通透性增加，產(chǎn)生蛋白尿，這與Pighetti[2]等研究一致，且認為IL－8在腎小球足細胞和基底膜的早期損傷發(fā)揮著重要的作用。也有的學(xué)者認為[8]，循環(huán)免疫復(fù)合物可通過多種途徑活化補體系統(tǒng)，產(chǎn)生多種具有炎性遞質(zhì)作用的活性片段，進而介導(dǎo)腎臟組織的損傷。近年來細胞免疫在腎病綜合征的致病機制也有所研究[9]，患兒可出現(xiàn)T細胞免疫功能紊亂，而抑制核因子－KB可發(fā)揮免疫抑制作用[1]。本實驗通過抑制核因子－KB、白介素－8而使治療組大鼠尿蛋白較腎病組明顯減少，差別具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，從而進一步證實了，核因子－KB及白介素－8在腎病綜合征的致病機制中發(fā)揮著一定的作用。降低核因子－KB及白介素－8水平，減少尿蛋白，可為治療腎病綜合征提供了一個新的治療途徑。

曾有學(xué)者試用潑尼松沖擊療法治療腎病綜合征[10]以期盡快緩解病情，但單獨激素沖擊療法的有效性及安全性尚待定論。本實驗以腎茶組及腎茶、潑尼松聯(lián)合組為治療組，腎茶為單味中藥，較為安全可靠，與潑尼松聯(lián)合使用，可減少單用激素的不良反應(yīng)，且激素可快速直接地作用于效應(yīng)細胞，誘導(dǎo)肝藥酶系統(tǒng)[11]，這與本實驗研究一致，腎茶和潑尼松聯(lián)合治療組的尿蛋白比單用腎茶組尿蛋白明顯減少，差別具有顯著性(P ＜0.01)。據(jù)相關(guān)文獻報道[12]，NF－KB是糖皮質(zhì)激素抗炎效應(yīng)最基本的調(diào)節(jié)因子，且激素能夠部分抑制核因子－KB的活性和白介素－8的分泌。這與本實驗研究一致，激素可通過以上機制減少尿蛋白，從而緩解腎病綜合征病情。本實驗中腎茶組及聯(lián)合治療組的核因子－KB及白介素－8水平較同期腎病組的水平低，差別具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。這為治療腎病綜合征的治療開辟了新的途徑。但由于腎病綜合征的發(fā)病機制復(fù)雜，影響核因子－KB通路的因素眾多，且本實驗周期較短，觀測指標(biāo)有限，僅限于初步研究，還需要進一步的研究及探討，以便更好的應(yīng)用于臨床。

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