sB7-H3與原發(fā)性高血壓患者尿微量白蛋白的關(guān)系

張小民 趙楚敏 劉春榮 宋月霞 張光波

B7-H3是新發(fā)現(xiàn)的免疫分子，該分子在腫瘤免疫及自身免疫病方面具有重要作用［1］。在項(xiàng)研究中，我們利用sB7-H3酶聯(lián)檢測(cè)方法，通過對(duì)96例高血壓合并蛋白尿患者血清標(biāo)本的檢測(cè)，對(duì)sB7-H3的表達(dá)與疾病的關(guān)系進(jìn)行了分析。我們發(fā)現(xiàn)sB7-H3可能與高血壓腎損害病變程度密切相關(guān)。報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2009年6月至2010年12月唐山市人民醫(yī)院收治的原發(fā)高血壓病患者96例，根據(jù)MAU分為觀察組(n=48)，30≤UAE(尿白蛋白排泄量) ＜300 mg/24 h和對(duì)照組(n=48)，UAE＜30 mg/24 h。選擇同期健康體檢者40例作為健康組。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 所有病例均符合“2005年高血壓診斷治療指南”判定標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：惡性腫瘤、繼發(fā)性高血壓、外周血管病及合并心、肝、腎功能不全、瓣膜病、糖尿病、甲亢、結(jié)締組織病及自身免疫性疾病。

1.3 方法

1.3.1 鼠抗人B7-H3單克隆抗體(克隆號(hào)為4H7和21D4)來源于蘇州大學(xué)生物技術(shù)研究所;sB7-H3酶聯(lián)檢測(cè)試劑盒來自蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院臨床免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室。

1.3.2 生化指標(biāo)及sB7-H3蛋白的檢測(cè)：觀察組和對(duì)照組分別與住院后次日清晨6∶00～7∶00，健康組體檢當(dāng)日清晨空腹抽取外周靜脈血5 ml，2 500～3 000 r/min離心3～5 min分離血清6 h內(nèi)完成，-70℃凍存待測(cè)。采用免疫透射比濁法測(cè)定血漿C-反應(yīng)蛋白(CRP)，試劑盒由Beckman公司提供，常規(guī)生化測(cè)定血漿總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDLC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、肌酐(Cr)。血清中sB7-H32蛋白的檢測(cè)嚴(yán)格按照臨床免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。簡言之：以鼠抗人B7-H3單抗4H7為包被抗體，4℃過夜;次日用1%BSA封閉，4℃過夜;洗板后，加入B7-H3融合蛋白作為標(biāo)準(zhǔn)品，和1∶10稀釋的血清樣本作為待檢測(cè)標(biāo)本，同時(shí)加入生物素標(biāo)記的21D4單抗(bio-21D4)，室溫孵育3 h，洗板后加入avtin-HRP室溫反應(yīng)30 min，洗板后加入TMB顯色，以O(shè)D450 nm為檢測(cè)波長，在Bio-Rad 550酶標(biāo)儀上讀取OD值。以軟件Curve-Expert 1.3進(jìn)行結(jié)果分析。

1.3.3 血壓測(cè)定：采用袖帶汞柱式血壓計(jì)測(cè)右上臂血壓，取Korotkoff第一音和第五音為收縮壓和舒張壓，測(cè)量3次，各間隔1 min，取其平均值。均在安靜休息15 min后測(cè)血壓。

1.3.4 MAU的檢測(cè)：于入院或就診次晨收集24 h尿，甲醛防腐，測(cè)24 h尿量，并充分混勻后取少量離心，取上清液存放在-24℃冰箱動(dòng)存?zhèn)溆?。采用放射免疫?RIA)用北京和儀器廠bh6020型放免計(jì)數(shù)器測(cè)定尿的微量白蛋白濃度。根據(jù)MAU的濃度×尿量，得UAE(mg/24 h)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以±s表示，組間比較采用單因素方差分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性采用直線相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況 3組血脂血糖等一般情況比較基本相同(P＞0.05)，健康組與對(duì)照組、觀察組的血壓比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，對(duì)照組與觀察組血壓比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)。見表1。

表1 3組一般情況比較±s

表1 3組一般情況比較±s

注：與健康組比較，*P ＜0.05;與觀察組比較，#P ＜0.05

?

2.2 2組sB7-H3、CRP比較 檢測(cè)結(jié)果表明觀察組患者體內(nèi)sB7-H3及CRP表達(dá)水平較對(duì)照組相比明顯升高(P＜0.01)。見圖 1、2，表 2。

圖1 sB7-H3在高血壓伴MAU的表達(dá)

圖1 CRP在高血壓伴MAU的表達(dá)

表2 sB7-H3在高血壓合并MAU患者體內(nèi)的表達(dá)分±s

表2 sB7-H3在高血壓合并MAU患者體內(nèi)的表達(dá)分±s

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.01

對(duì)照組(n=48) 23±9 3.9±1.2觀察組(n=48) 35±11* 6.4±1.1*

3 討論

研究證實(shí)共刺激分子免疫球蛋白B7家族及細(xì)胞因子與高血壓、冠心病大動(dòng)脈病變密切相關(guān)［1，2］。但與微動(dòng)脈特別是微循環(huán)的相關(guān)性筆者尚未見報(bào)道。研究顯示hs-CRP水平＞0.77 mg/L時(shí)，尿微量白蛋白的發(fā)生明顯增高，提示炎癥反應(yīng)參與了微量白蛋白尿的發(fā)生。微量白蛋白尿預(yù)示非特異性血管功能失常，特別是內(nèi)皮功能失調(diào)。研究顯示炎性反應(yīng)具有促進(jìn)內(nèi)皮功能損害的作用，并參與了高血壓病及高血壓病腎功能損害的發(fā)生發(fā)展［3-5］?？赡苓€伴隨免疫功能的異常［6］。而微量蛋白尿與內(nèi)皮功能障礙呈明顯負(fù)相關(guān)。為進(jìn)一步探討微量蛋白尿與免疫反應(yīng)的關(guān)系，我們利用酶聯(lián)檢測(cè)試劑藥盒，通過對(duì)96例高血壓患者血清的檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)sB7-H3在高血壓合并微量蛋白尿患者體內(nèi)的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組(P＜0.01)。觀察結(jié)果顯示，CRP、sB7-H3的增高與微量蛋白尿的變化呈相關(guān)性，高血壓微量蛋白尿組的CRP sB7-H3顯著增高。證實(shí)了免疫反應(yīng)及慢性炎癥在高血壓微量白蛋白尿的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用與上述報(bào)道一致也進(jìn)一步證實(shí)高血壓病合并微血管病變與免疫反應(yīng)及慢性炎癥密切相關(guān)。

總之，該項(xiàng)研究從血管免疫炎癥機(jī)理入手，利用sB7-H3酶聯(lián)檢測(cè)方法，通過對(duì)96例高血壓合并微量蛋白尿患者血清中sB7-H3的表達(dá)及分析，首次發(fā)現(xiàn)sB7-H3在高血壓合并微量蛋白尿病人血清中具有遠(yuǎn)較對(duì)照人群為高的表達(dá)水平。鑒于此，B7-H3能協(xié)同刺激CD+4，CD+8T細(xì)胞的增殖，特異性的促進(jìn)干擾素-γ(IFN-γ)分泌表達(dá)，對(duì)白細(xì)胞介素-8(IL-8)，腫瘤壞死因子-α(TNF-α)也有適度的上調(diào)作用［7］。因此，sB7-H3 通過參與血管免疫炎性反應(yīng)，促進(jìn)腎小球損傷的發(fā)生和發(fā)展。本研究提示，通過某種途徑對(duì)sB7-H3介導(dǎo)的免疫炎性反應(yīng)進(jìn)行有效的干預(yù)也許是治療高血壓腎損害的新途徑，這也為我們研究高血壓腎血管病變的免疫學(xué)機(jī)制提供了新的線索與思路。

1 張小民，宋月霞，劉春榮，等.sB7-H3與高血壓合并頸動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)系.中華高血壓雜志，2007，15：76-77.

2 張小民，趙楚敏，宋月霞，等.sB7-H3與急性心肌梗死預(yù)后的關(guān)系.心臟雜志，2010，22：81-83.

3 嚴(yán)江濤，葉輝，江道文.微量白蛋白尿與血漿高敏C反應(yīng)蛋白的關(guān)系.中華心血管病雜志，2005，33：534-535.

4 賴劍波，江勇，姚志軍.苯那普利對(duì)高血壓腎病患者鳥微量白蛋白和C反應(yīng)蛋白的影響.中華高血壓雜志，2009，17：76-77.

5 Liao YH，Wei YM，Wang M，et al.Autoantibodies against AT1-receptor and 1-adrenergic receptor in patients with hypertension.Hyertens Res，2002，25：641.

6 謝秀梅，李志凌，李兢，等.老年原發(fā)性高血壓微量白蛋白尿與血管內(nèi)皮功能及頸總動(dòng)脈粥樣硬化.高血壓雜志，2006，14：94-96.

7 Chapoval AI，Ni J，Lau JS，et al.B7-H3：a costimulatory molecule for T cell activation and IFN-γ production.Nat Immunol，2001，2：269-274.