咳喘順丸止咳化痰作用實(shí)驗(yàn)研究

鄭軼楓，黃萍，吳清和，操紅纓

Tel:020-39358086，18924252556

Email:zyf87109@gmail.com

咳喘順丸由紫蘇子、瓜蔞仁、茯苓、魚腥草、苦杏仁、半夏（制）、款冬花、桑白皮、前胡、紫菀、陳皮、甘草等組成，具有健脾燥濕，宣肺平喘，化痰止咳的功效[1]，用于慢性支氣管炎、支氣管哮喘、肺氣腫所致的氣喘胸悶、咳嗽痰多等癥。臨床觀察結(jié)果表明[2]，咳喘順丸能顯著改善慢性支氣管炎脾肺氣虛、痰濕阻肺的多項(xiàng)臨床癥狀，另外對(duì)喘息型慢性支氣管炎能減少皮質(zhì)激素和茶堿藥的不良反應(yīng)，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，提高生活質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)采用止咳及祛痰相關(guān)藥理實(shí)驗(yàn)對(duì)其止咳化痰作用進(jìn)行初步評(píng)價(jià)。

1 材料

1.1 藥物

咳喘順丸(實(shí)驗(yàn)用不加輔料之藥粉)，由廣州陳李濟(jì)藥廠提供（批號(hào): 08136），每克藥粉相當(dāng)于2.025 g生藥。臨床用法用量為口服，11.11 g/天（相當(dāng)于生藥22.5 g）。按60公斤體重?fù)Q算，得出每日用量（藥粉）為11.11÷60=0.185 g/kg體重（相當(dāng)0.375 g生藥/kg體重），使用時(shí)用研缽研磨，再以蒸餾水配成所需濃度。麻杏止咳片，吉林本草堂制藥有限公司產(chǎn)品（批號(hào)：20080202）；氨酚雙氫可待因片，威海路坦制藥有限公司產(chǎn)品（批號(hào)：080514）；鹽酸氨溴索片，天津赫素有限公司產(chǎn)品（批號(hào)：070972）。

1.2 動(dòng)物

SD系大鼠，SPF級(jí)，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（許可證號(hào)SCXK（粵）2003-0002粵監(jiān)證字2008A020）；NIH系小鼠，SPF級(jí)，分別由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心、廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（許可證號(hào)SCXK（粵）2003-0002粵監(jiān)證字2008A022、SCXK（粵）2003-0020粵監(jiān)證字2008A003）；家鴿由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供；豚鼠，普通級(jí)，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（許可證號(hào)SCXK（粵）2003-0020粵監(jiān)證字2008A027）。

1.3 試劑與儀器

枸櫞酸，天津市大茂化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，批號(hào)：20080917；氯化鈉注射液，太極集團(tuán)西南藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：08060010；苯酚紅，天津市大茂化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，批號(hào)：20071225；氫氧化鈉，廣州化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，批號(hào)：20071004－1；氨水，天津市富宇精細(xì)化工有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：080901；咔唑，上海晶純?cè)噭┯邢薰井a(chǎn)品，批號(hào)：17361；D-葡萄糖醛酸內(nèi)酯，上海晶純?cè)噭┯邢薰井a(chǎn)品，批號(hào)：79721；TD25－WS多管架自動(dòng)平衡離心機(jī)，賽特湘儀離心機(jī)儀器有限公司產(chǎn)品；WFJ7200型可見光分光光度計(jì)，尤尼柯（上海）儀器有限公司產(chǎn)品；402A型超聲霧化器，江蘇魚躍醫(yī)療設(shè)備有限公司產(chǎn)品；JA1203N型電子天平，上海精密儀器有限公司產(chǎn)品。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 止咳試驗(yàn)

2.1.1 小鼠氨水引咳法[3~4]取NIH小鼠，雌雄各半，體重18～22 g，隨機(jī)分為對(duì)照組、咳喘順丸低、中、高劑量組（1.85，3.70，5.55 g.kg-1）、麻杏止咳片組和可待因組，每組10只。各組按0.2 mL/10 g體重灌胃給藥（對(duì)照組給予等量蒸餾水），每日1次，連續(xù)3日。于末次給藥后1 h，將小鼠置于2 L的密閉罩內(nèi)，恒定壓力用霧化器噴霧濃氨水15 s ，記錄小鼠咳嗽潛伏期（從噴霧開始到小鼠出現(xiàn)第一次咳嗽的時(shí)間為潛伏期）和5 min內(nèi)咳嗽次數(shù)，結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

2.1.2 豚鼠枸櫞酸引咳法[3,4]取豚鼠48只，雌雄各半，體重200～220 g，隨機(jī)分為對(duì)照組、咳喘順丸低、中、高劑量（0.925，1.85，3.70 g.kg-1）組、麻杏止咳片組和可待因組，每組8只。各組按1 mL/100 g體重灌胃給藥（對(duì)照組給予等量蒸餾水），每日1次，連續(xù)3日。于末次給藥后1 h，將小鼠至于2 L的密閉罩內(nèi)，然后以恒定壓力噴霧枸櫞酸10 s，記錄豚鼠咳嗽潛伏期（從噴霧開始到豚鼠出現(xiàn)第一次咳嗽的時(shí)間為潛伏期）和5 min內(nèi)咳嗽次數(shù)，記錄結(jié)果并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

2.2 化痰試驗(yàn)

2.2.1 對(duì)正常小鼠的化痰作用試驗(yàn)(氣管段酚紅法)[3,4]取NIH小鼠，雌雄各半，體重18～22 g，隨機(jī)分為對(duì)照組、咳喘順丸低、中、高劑量組（1.85，3.70，5.55 g.kg-1），麻杏止咳片組和鹽酸氨溴索片組，每組10只。各組按0.2 mL/10 g體重灌胃給藥（對(duì)照組給予等量蒸餾水），每日1次，連續(xù)3日。于末次給藥后各組動(dòng)物腹腔注射酚紅0.1 mL（5mg）/10 g體重，注射酚紅0.5 h處死動(dòng)物，剝離氣管周圍組織，剪下自甲狀軟骨下至氣管分支處的一段氣管，放入盛有2 mL生理鹽水的試管中，再加0.1 mL氫氧化鈉，用分光光度計(jì)，波長(zhǎng)546 nm測(cè)OD值。并根據(jù)酚紅的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算酚紅含量（μg.mL-1），記錄結(jié)果并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

2.2.2 對(duì)家鴿的化痰作用試驗(yàn)(氣管纖毛運(yùn)動(dòng)法)[4]取家鴿48只，隨機(jī)分為對(duì)照組、咳喘順丸低、中、高劑量組（0.925，1.85，3.70 g.kg-1），麻杏止咳片組、鹽酸氨溴索片組，每組8只。各組按1 mL/100 g體重灌胃給藥（對(duì)照組給予等量蒸餾水），每日1次，連續(xù)3日。于末次給藥后1 h ，在暗室內(nèi)剪開鴿頸部皮膚，分離氣管，從靠心臟端將5號(hào)針頭輕插入氣管，向氣管內(nèi)壁推入約 0 .02 mL墨汁，在冷光源下觀察1 min內(nèi)墨汁向前運(yùn)動(dòng)的距離。記錄結(jié)果并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

2.2.3 對(duì)大鼠氣管排痰量的影響[4]取SD大鼠，180～220 g，隨機(jī)分為對(duì)照組、咳喘順低、中、高劑量組（0.925，1.85，3.70 g.kg-1），麻杏止咳片組、鹽酸氨溴組，每組10只。各組動(dòng)物按1 mL/100 g體重灌胃給藥（對(duì)照組灌胃等體積蒸餾水），每日1次，連續(xù)3日。末次給藥后1 h，剪開大鼠頸中部皮膚，分離氣管，在甲狀軟骨下緣正中兩軟骨環(huán)之間插入玻璃毛細(xì)管，使毛細(xì)管剛好接觸氣管底部表面，吸取痰液，記錄2h內(nèi)毛細(xì)管內(nèi)的吸痰長(zhǎng)度。

2.2.4 對(duì)大鼠氣管分泌液中黏多糖含量的影響[5]取SD大鼠，180～220 g，隨機(jī)分為對(duì)照組、咳喘順低、中、高劑量組（0.925，1.85，3.70 g.kg-1），麻杏止咳片組、鹽酸氨溴組，每組10只。各組動(dòng)物按1 mL/100 g體重灌胃給藥（對(duì)照組灌胃等體積蒸餾水），每日1次，連續(xù)3日。末次給藥后1 h，處死大鼠從喉頭處行氣管插管，緩慢推注預(yù)溫（37℃）的生理鹽水1 mL并回抽此液，重復(fù)2次，離心取上清液，2 h內(nèi)用咔唑比色法檢測(cè)。每份標(biāo)本分為2個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度測(cè)定 2次，取平均值。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析，所有指標(biāo)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示，采用單因素方差分析分析比較組間差異。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 止咳實(shí)驗(yàn)

3.1.1 對(duì)小鼠氨水引咳實(shí)驗(yàn)的影響 與對(duì)照組比較，咳喘順丸低、高劑量能顯著減少氨水所致小鼠咳嗽次數(shù)（p＜0.01），并能顯著延長(zhǎng)咳嗽潛伏期（p＜0.05）；中劑量能顯著減少氨水所致小鼠咳嗽（p＜0.01），并且具有延長(zhǎng)咳嗽潛伏期的趨勢(shì)。麻杏止咳片和可待因亦具有顯著減少氨水所致小鼠咳嗽次數(shù)和延長(zhǎng)咳嗽潛伏期的作用（p＜0.01）。結(jié)果見表1。

表1 咳喘順丸對(duì)氨水所致小鼠咳嗽的影響（x±S）

3.1.2 對(duì)豚鼠枸櫞酸引咳實(shí)驗(yàn)的影響 與對(duì)照組比較，咳喘順丸低、中、高劑量能顯著減少枸櫞酸引起的豚鼠咳嗽次數(shù)（p＜0.01），并能顯著延長(zhǎng)豚鼠的咳嗽潛伏期（p＜0.01）；麻杏止咳片和可待因亦具有顯著減少氨水所致小鼠咳嗽次數(shù)和延長(zhǎng)咳嗽潛伏期的作用（p＜0.05或p＜0.01）。結(jié)果見表2。

表2 咳喘順丸對(duì)枸櫞酸所致豚鼠咳嗽的影響（x±S）

3.2 化痰實(shí)驗(yàn)

3.2.1 對(duì)正常小鼠的化痰作用的影響（氣管段酚紅法） 與對(duì)照組比較，咳喘順丸中、高劑量能顯著增加小鼠氣管段酚紅排泌量（p＜0.05），低劑量對(duì)小鼠氣管段酚紅排泌量無(wú)明顯影響（p＞0.05）；鹽酸氨溴索和麻杏止咳片亦明顯增加小鼠氣管段酚紅排泌量（p＜0.05或p＜0.01）。結(jié)果見表3。

表3 咳喘順丸對(duì)小鼠氣管酚紅排泌量的影響（x±S）

附：標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.1437x－0.0295（y為OD值，x為酚紅劑量），R2=0.9992。

3.2.2 對(duì)家鴿的化痰作用的影響（氣管纖毛運(yùn)動(dòng)法）

與對(duì)照組比較，咳喘順丸中、高劑量能顯著增加墨汁走距，具有增強(qiáng)家鴿氣管纖毛運(yùn)動(dòng)的作用（p＜0.05或p＜0.01）；鹽酸氨溴索亦明顯增強(qiáng)家鴿氣管纖毛運(yùn)動(dòng)（p＜0.01）；咳喘順低劑量和麻杏止咳片對(duì)家鴿氣管纖毛運(yùn)動(dòng)無(wú)明顯影響（p＞0.05）。結(jié)果見表4。

表4 咳喘順丸對(duì)正常家鴿氣管纖毛運(yùn)動(dòng)的影響（x±S）

3.2.3 對(duì)大鼠氣管排痰量的影響 與對(duì)照組比較，咳喘順丸中、高劑量能夠顯著增加大鼠的氣管排痰量（p＜0.05～0.01）；鹽酸氨溴索與麻杏止咳片亦顯著增加大鼠的氣管排痰量（p＜0.05或p＜0.01）。結(jié)果見表5。

表5 咳喘順丸對(duì)大鼠氣管排痰量的影響（x±S）

3.2.4 對(duì)大鼠氣管分泌液中黏多糖含量的影響 咳喘順丸中、高劑量組能顯著增加大鼠氣管分泌液中黏多糖的含量（p＜0.05）；鹽酸氨溴索與麻杏止咳片亦顯著增加大鼠氣管分泌液中黏多糖的含量（p＜0.01）。結(jié)果見表6。

表6 咳喘順丸對(duì)大鼠氣管分泌液中黏多糖含量的影響（x±S）

附：標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程：y=0.003x-0.0637（x為黏多糖含量，y為OD值），R2=0.9947

4 討論與分析

咳喘順丸具有健脾燥濕、理氣化痰、宣肺止咳平喘的功效。方中魚腥草清肺熱而解毒，茯苓健脾滲濕以制痰源，瓜蔞仁潤(rùn)肺化痰止咳，蘇子降氣化痰平喘，共為君藥；半夏、陳皮乃辛溫性燥之品，功能燥濕化痰，為治濕痰之良藥，紫菀、冬花潤(rùn)肺化痰止咳，杏仁降氣平喘，共用為臣藥；佐以桑白皮、前胡降氣平喘，祛痰止咳；使以甘草調(diào)和諸藥。諸藥合用，使肺氣得宣、痰熱得清、風(fēng)寒得解,則喘咳、痰多、氣急之癥能除。

本實(shí)驗(yàn)在止咳實(shí)驗(yàn)中采用了小鼠氨水引咳法及豚鼠枸櫞酸引咳法，結(jié)果提示，咳喘順丸能顯著減少氨水所致小鼠咳嗽次數(shù)及枸櫞酸引起的豚鼠咳嗽次數(shù)，并能顯著延長(zhǎng)小鼠和豚鼠咳嗽潛伏期，表明咳喘順丸能夠有效鎮(zhèn)咳?；祵?shí)驗(yàn)中，中劑量和高劑量組咳喘順丸能顯著增加小鼠氣管段酚紅排泌量，增加墨汁走距，增強(qiáng)家鴿氣管纖毛運(yùn)動(dòng)，增加大鼠氣管分泌液中黏多糖的含量，增加大鼠的氣管排痰量。綜上所述，咳喘順丸止咳、化痰作用的研究為其理氣化痰、宣肺止咳平喘功效提供了藥理學(xué)依據(jù)，也為臨床上治療慢性支氣管炎、支氣管哮喘、肺氣腫所致的氣喘胸悶、咳嗽痰多等癥的良好療效提供了支持。

[1] 譚源深,陳仲宜.介紹一種治療咳喘病的新藥—咳喘順丸[J].職業(yè)醫(yī)學(xué),1991(04):254.

[2] 李金好,楊清芬,傅志慧.咳喘順丸治療慢性支氣管炎79例[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2004(07):628.

[3] 李儀奎.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社,2006:428.

[4] 陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].上海:人民衛(wèi)生出版社, 2006:25.

[5] 徐叔云,卞如濂,陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社, 2002:1361.