博落回藥材采收及初加工工藝研究△

吳周威，程辟，劉秀斌，曾建國，*

(1.湖南中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，湖南 長沙，410007；2.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)，國家中藥材生產(chǎn)(湖南)技術(shù)中心，湖南 長沙 410128；3.湖南省中藥提取工程研究中心，湖南 長沙 410331)

博落回藥材采收及初加工工藝研究△

吳周威1，程辟2，3，劉秀斌2，曾建國1，2，3*

(1.湖南中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，湖南 長沙，410007；2.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)，國家中藥材生產(chǎn)(湖南)技術(shù)中心，湖南 長沙 410128；3.湖南省中藥提取工程研究中心，湖南 長沙 410331)

目的：確定博落回根、葉、果的最佳采收期及最佳產(chǎn)地初加工工藝。方法：采用RP-HPLC法同時測定各指標成分的含量。結(jié)果：實驗數(shù)據(jù)表明博落回根、葉、果的最佳采收期分別為5月下旬、6月及8月下旬至9月上旬，從綜合利用資源的角度出發(fā)，可在采集葉、果后再采收根。除博落回根外，不同干燥方式處理的博落回葉、果中各指標成分的含量無明顯差異。結(jié)論：本研究表明博落回根、葉、果的最佳產(chǎn)地初加工工藝流程：最佳或適宜采收期采摘→凈選→清洗或擦凈→根、果莢45 ℃～6 5 ℃烘干、曬干，葉45 ℃烘干、陰干、曬干。

博落回；采收期；產(chǎn)地初加工

博落回系罌粟科博落回屬植物博落回(Macleaguacordata(Wild)R.Br.)的帶根全草，生于丘陵或低山草地、路旁等處，在我國分布廣泛，因產(chǎn)地不同，異名較多，有號筒桿、勃勒回、三錢三、山號筒等20多種[1]。博落回始載于《本草拾遺》，此外《中藥大辭典》、《新編藥物學(xué)》、《中藥志》均有收錄，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于臨床治療，在養(yǎng)殖業(yè)中也已作為抑菌抗炎促生長獸藥和高效低毒的綠色生物農(nóng)藥而被廣泛使用[2，3]。國內(nèi)外大量研究表明[4-6]，博落回根及地上部分的主要有效成分為血根堿(Sanguinarine)、白屈菜紅堿(Chelerythrine)及其前體原阿片堿(Protopine)、別隱品堿(Allocryptopine)等多種異喹啉類生物堿，具有抗菌、抗炎、抗腫瘤、止咳平喘、鎮(zhèn)痛、改善肝功能、增強機體免疫力等作用。由于莖部為博落回的運輸器官，上述生物堿含量較低[7]，一般以博落回根、葉、果為獲取上述生物堿的原料。

目前國內(nèi)外關(guān)于博落回的報道集中于化學(xué)成分、藥理作用、活性成分合成途徑等方面，缺乏研究博落回根、葉、果的產(chǎn)地初加工方法的相關(guān)文獻。本文以三年生博落回的根、葉、果(即指果莢)為研究對象，以血根堿、白屈菜紅堿、原阿片堿、別隱品堿為指標成分，通過比較不同時期博落回根、葉、果中生物堿含量的高低，確定博落回根、葉、果的最佳采收期。根據(jù)不同初加工方式對一年中最佳使用狀態(tài)的博落回鮮藥材中指標成分含量的影響，選擇最佳的初加工工藝，最大限度地保留博落回鮮藥材中的活性成分，將最佳使用狀態(tài)的鮮藥材轉(zhuǎn)變?yōu)楦咂焚|(zhì)、可穩(wěn)定儲存的干藥材，為博落回的再加工提供優(yōu)質(zhì)的生產(chǎn)原料，達到高效、合理、高值化利用博落回藥材資源的目的。

1 儀器與試藥

安捷倫1260系列液相色譜儀(美國安捷倫公司)；KQ5200DE型數(shù)控超聲波清洗器(200 W，昆山市超聲儀器有限公司)；ML204/02型精密天平(梅特勒-托利多(上海)儀器有限公司，十萬分之一)；HermLe Z323K系列高速離心機(德國制造)；100 mL移液吸管(北京玻璃儀器廠)。

乙腈、甲醇為色譜純；水為純化水；其他試劑均為分析純；原阿片堿、別隱品堿、血根堿、白屈菜紅堿對照品由本實驗室自制，經(jīng)檢驗，純度均≥98%。

三年生博落回為2012年5月下旬至11月上旬于湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)國家中藥材生產(chǎn)(湖南)技術(shù)中心博落回改良種植基地采集，共12次，每次采集三株，將各部位分離后混合取樣。

2 方法與結(jié)果

2.1 檢測方法

參照地方標準中博落回四種生物堿的HPLC檢測方法[8]，色譜圖如下：

1.原阿片堿(Protopine) 2.別隱品堿(Allocryptopine) 3.血根堿(Sanguinarine) 4.白屈菜紅堿(Chelerythrine)圖1 對照品溶液(A)和樣品溶液(B)的HPLC圖

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取適量原阿片堿、別隱品堿、血根堿、白屈菜紅堿標準品，置25 mL容量瓶中，加甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，配制成濃度為0.797 2 mg·mL-1的原阿片堿對照品溶液、0.4588 mg·mL-1的別隱品堿對照品溶液及0.2764 mg·mL-1血根堿、0.3628 mg·mL-1白屈菜紅堿混合對照品溶液，即得。

2.2.1 供試品(新鮮)溶液的制備 將博落回的莖、葉表面擦凈，根洗凈后仔細擦干，去除花、葉和果的柄部，粉碎，混勻，精密稱取博落回各部位樣品約5 g，置150 mL容量瓶中，加入甲醇-0.1%鹽酸溶液(50∶50)100mL，稱定提取前總重，在30 ℃、100 Hz的條件下超聲1h，冷卻至室溫后補足提取中損失的溶劑量，10 000 r·min-1，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.2.2 供試品(干燥)溶液的制備 將不同方式干燥的博落回根、葉、果粉碎，混勻，精密稱取各供試品粉末約1 g，置150 mL容量瓶中，加入甲醇-1%鹽酸溶液(50∶50)100 mL，稱定提取前總重，在30 ℃、40 Hz的條件下超聲1 h，冷卻至室溫后補足提取中損失的溶劑量，10 000 r·min-1離心，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.3 線性范圍考察

將上述混合標準品溶液8 mL、4 mL、1 mL、0.1 mL、0.1 mL，分別置于10 mL、10 mL、10 mL、10 mL、50 mL棕色容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度后，各進樣5 μL，按“2.1”項進行檢測。以峰面積(Y)為縱坐標，質(zhì)量濃度(X)為橫坐標繪制工作曲線，得到線性回歸方程，原阿片堿：Y=5 430.3X+12.397，R2=0.999 8；別隱品堿Y=4 425.1X+7.610 1，R2=0.999 6；血根堿：Y=25 038X-35.174，R2=0.999 6 ；白屈菜紅堿：Y=23 392X-37.570，R2=0.999 6，表明原阿片堿在1.59～797.20 μg·mL-1，別隱品堿在0.92～458.80 μg·mL-1、血根堿在0.55～276.40 μg·mL-1、白屈菜紅堿在0.73～362.80 μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 樣品的測定

2.4.1 藥材中指標成分的測定 將不同采收時間、不同干燥方式的博落回根、葉、果制備成供試品溶液，進樣5μL測定，按外標法計算藥材中原阿片堿、別隱品堿、血根堿、白屈菜紅堿的折干含量。

2.4.2 藥材中水分的測定 參照《中國藥典》(2010年版)第一部附錄IX H項下第一法(烘干法)測定供試品的含水量。干燥品粉碎成直徑≤3 mm的碎片，取樣量不低于3 g，平鋪于干燥至恒重的鋁盒中，厚度不超過20 mm，在105 ℃干燥5 h，將鋁盒迅速移至干燥器中，冷卻至室溫，精密稱定重量；再干燥1 h后冷卻，稱定重量，至連續(xù)兩次稱量的差異不超過5 mg為止。根據(jù)減失的重量，計算含水量。

2.5 博落回根、葉、果的產(chǎn)地初加工

2.5.1 采摘 采集不同時期的三年生博落回根、葉、果，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，檢測結(jié)果顯示同一產(chǎn)地、不同時期的博落回根、葉、果中指標成分的含量存在較為顯著的差異。

如圖2所示，博落回根、葉中原阿片堿、別隱品堿含量始終高于血根堿、白屈菜紅堿，與文獻報道一致，而7月下旬開始博落回果中血根堿與白屈菜紅堿的含量之和高于原阿片堿、白屈菜紅堿之和。8月下旬后博落回綠葉幾乎變成枯黃葉，9月中旬后長出部分綠葉，但是短短10多天后又變成了枯黃葉，我們對5月至10月博落回綠葉和枯黃葉中生物堿動態(tài)累積規(guī)律進行研究，結(jié)果如表1和圖2所示，雖然9月下旬新長出博落回綠葉中的原阿片堿、別隱品堿、血根堿、白屈菜紅堿含量最高(分別為2.24%、1.56%、0.13%、0.23%),但此時新長出的博落回綠葉和枯黃葉整體生物量低導(dǎo)致此時四種生物堿總生物量遠不及6月時博落回葉片中四種生物堿總生物量，因此建議6月采收博落回葉片作為生產(chǎn)四種生物堿的原料。6月下旬為博落回果的生長初期，果莢中原阿片堿、別隱品堿含量較高，但生物量小，此時采集博落回果不利資源的高效利用，7月上旬開始，博落回果莢中血根堿、白屈菜紅堿的含量及生物總量明顯增加，而原阿片堿、別隱品堿的含量及生物總量明顯下降，8月下旬至9月上旬時，博落回果實中四種生物堿生物總量最高。5月下旬時博落回根中原阿片堿、別隱品堿、血根堿、白屈菜紅堿累積水平最高(分別為2.49%、3.77%、0.11%、0.13%)，而在11月上旬根中四種生物堿累積水平最低(分別為1.16%、1.87%、0.07%、0.09%)。

圖2 三年生博落回根(A)、葉(B)、果莢(C)中四種生物堿含量的動態(tài)變化

綜合考慮博落回根、葉、果莢中指標成分的代謝累積情況以及生物量的變化規(guī)律，為了綜合使用博落回資源，博落回葉的最佳采收期為6月，其適合作為生產(chǎn)原阿片堿和別隱品堿的原料；博落回果的最佳采收期為8月下旬至9月上旬，適合作為生產(chǎn)原阿片堿、別隱品堿、血根堿和白屈菜紅堿的原料；最佳采收期為5月下旬的博落回根可在采收完博落回果后(11月之前)采收，作為生產(chǎn)原阿片堿和別隱品堿的原料。

2.5.2 凈選 分別采集最佳采收期內(nèi)的博落回根、葉、果，挑選新鮮、無腐敗的鮮藥材，去除表面雜物。

2.5.3 洗凈或擦凈 將博落回根洗凈，瀝干表面水分，切成厚薄均一的小片或小塊，擦凈葉片表面灰塵，待用。

2.5.4 干燥 將上述博落回根、葉、果進行產(chǎn)地初加工研究，鮮藥材采摘后2 h內(nèi)作如下處理：烘干(45 ℃、65 ℃、85 ℃、105 ℃烘干)；曬干(平攤于太陽下直曬)；陰干(平攤于室內(nèi)通風(fēng)干燥處)。

結(jié)果如圖3所示，以累積原阿片堿、別隱品堿為主的博落回根在45 ℃烘干時，此兩種生物堿的含量最高，曬干、65 ℃烘干次之，曬干、65 ℃烘干次之，85 ℃烘干時含量最低，較45 ℃烘干降低了25.2%、22.9%；陰干、45 ℃烘干處理的博落回根中血根堿、白屈菜紅堿含量最高，曬干時兩種成分較陰干分別降低了25.0%、18.1%，105 ℃烘干時血根堿、白屈菜紅堿含量最低，較陰干時分別降低了66.7%、72.7%，即不同干燥方式處理的博落回根中原阿片堿、別隱品堿的含量無明顯差別，血根堿、白屈菜紅堿的含量則有較大差別。不同干燥方式的博落回葉中各指標成分的含量差別不大，65 ℃烘干的博落回葉中的原阿片堿含量含量最低，但僅比45 ℃烘干低了17.8%；65 ℃、85 ℃、105 ℃的博落回葉中的別隱品堿含量較低(均為15.4 mg·g-1)，而曬干時含量最高(16.2 mg·g-1)；曬干的葉中血根堿、白屈菜紅堿含量最高，但其他干燥方式處理的葉中血根堿和白屈菜紅堿的含量與曬干的基本無明顯差別。不同干燥方式的博落回果中各指標成分的含量亦無明顯差別，陰干處理的博落回果中原阿片堿、別隱品堿的含量稍低于其他干燥方式處理的博落回果，曬干、陰干的博落回果中血根堿、白屈菜紅堿的含量則略高于其他干燥方式處理的博落回果。

表1 不同生長期內(nèi)博落回葉、果莢生物總量的變化情況

圖3 不同初加工方式下博落回根(A)、葉(B)、果(C)中指標成分含量的比較

3 討論

不同生長時期三年生博落回根、葉、果中次生代謝產(chǎn)物的含量呈動態(tài)變化。將各指標成分含量的峰值及生物總量二者結(jié)合考慮，確定博落回葉的最佳采收期為6月，博落回果的最佳采收期為8月下旬至9月上旬。由于博落回根是不可再生資源，最佳采收年份尚待考察，每年5月下旬雖是博落回根年內(nèi)最佳使用狀態(tài)時期，但此時采集博落回根會影響地上部分生長及次生代謝物的累積，不利于博落回全草的最大化利用，因此博落回根的采挖可在其最佳采收年份地上部分采收完后進行(11月之前)。

研究結(jié)果表明，不同干燥方式對博落回根部指標成分的含量有較明顯的影響，而對博落回葉、果的影響較小。不同干燥方式處理的博落回根中原阿片堿、別隱品堿的含量無明顯差別，血根堿、白屈菜紅堿的含量則有較大差別。陰干的博落回根中血根堿、白屈菜紅堿的含量最高，45 ℃干燥與之相當，105 ℃干燥時根堿、白屈菜紅堿的含量最低，較陰干時分別降低了66.7%、72.7%。研究數(shù)據(jù)顯示，博落回根、果莢宜選擇45 ℃～65 ℃烘干或曬干的干燥方式，博落回葉宜選擇45 ℃烘干、曬干、陰干，在生產(chǎn)和應(yīng)用中，可結(jié)合實際需要，選擇適宜的干燥方式。

[1] 于曉輝，萬仁玲，歐陽林山，等.RP-HPLC法測定博落回總堿中白屈菜紅堿含量的方法研究[J].中國獸藥雜志，2009，43(1)：31-33.

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[4] Xinjuan Y，F(xiàn)ang M，F(xiàn)eng Z，et a1.Isolation and Identification of Alkaloids from Macleaya microcarpa(Maxim)Fedde[J].Acta Bot Boreal—Occident Sin，2010，30(2)：405-411.

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[7] 武美蘭，張德志，徐慶軍，等.博落回研究進展[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)，2009，05(7)：144-145.

[8] 湖南省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局.博落回果[S].DB43/T 497-2009：8-9.

StudyontheHarvestTimeandtheBestPreliminaryProcessingTechnologiesofMacleaguacordata(Willd.)R.Br.

ZHOU Wu-wei1，CHENG Pi2，3，LIU Xiu-bin2，ZENG Jian-guo1，2，3*

(1.HunanUnivesityofTraditionalChineseMedicine，Changsha410007，China；2.NationalChineseMedicinalHerbs(Hunan)TechnologyCenter，HunanAgriculturalUniversity，Changsha410128，China；3.HunanEngneeringResearchCenterofBotanicalExtracts，Changsha410331，China)

Objective：Ascertain the best harvest time and preliminary processing method of the roots，leaves and fruits ofMacleayacordata(Willd.)R.Br.Methods：RP-HPLC was applied to quantify the index components simultaneously.Results：The data indicated that late May，June and late August to early September were suggested to be the best harvest time for the roots，leaves and the fruits.To comprehensively utilizeM.cordata，the leaves and fruits should harvest firstly，and then the roots.The contents ofM.cordataleaves and fruits dried in the above methods had no obvious difference except the roots.The best drying method was stove at 45 ℃，and the sum of index components of the roots dried at 45 ℃ was 1.52 times higher than dried at 85 ℃.Conclusion：This study indicated that the best preliminary processing procedures：harvesting at appropriate time → selecting → washing or wiping → the roots and fruits may properly stove at 45 ℃～65 ℃ or drying in the sun，and the leaves may properly stove at 45 ℃，stove in the sun or dry in the shade.

Macleayacordata，Harvest time，Preliminary processing method

2013-03-25)

國家科技支撐計劃(No.2012BA129B04，No.SQ2010BAJY1411)

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曾建國，Tel：(0731)84673824，E-mail：ginkgo@world-way.net