健脾理氣方對痞滿患者血漿MTL、CGRP、NO的影響

趙 鵬，黃穗平，尚文璠，譚明義

(1.廣東省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，廣東佛山528200;2.廣東省中醫(yī)院，廣東廣州510120)

痞滿患者多伴有早飽、噯氣、反酸、惡心等癥狀。在功能性消化不良4個(gè)亞型中，動(dòng)力障礙型約占50%，此類患者胃排空延遲、胃動(dòng)力減低是其主要改變。有研究［1］發(fā)現(xiàn):此類患者多有胃排空遲緩并伴有血漿胃動(dòng)素(MTL)水平明顯降低。降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)可降低胃內(nèi)壓，抑制胃腸運(yùn)動(dòng)，松弛胃竇環(huán)行肌和胃底縱行肌，通過外周靜脈注射降鈣素基因相關(guān)肽可明顯延遲胃排空。有研究［2］發(fā)現(xiàn):胃竇壁內(nèi)一氧化氮合酶(NOS)及神經(jīng)纖維末梢增多、活性增強(qiáng)普遍見于胃排空延遲的消化不良患者。健脾理氣方由四君子湯加味而成，經(jīng)過臨床廣泛運(yùn)用，治療痞滿病療效確切。2007年3月—2008年1月，筆者針對健脾理氣方對脾虛氣滯型痞滿病患者血漿中MTL、CGRP、NO等胃腸動(dòng)力相關(guān)因子的影響進(jìn)行研究，以探討該方治療痞滿病的作用機(jī)制。

1 一般資料

選擇廣東省中醫(yī)院、廣州軍區(qū)總醫(yī)院消化內(nèi)科住院和門診脾虛氣滯型痞滿病患者63例，采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為治療組和對照組。治療組32例，男14例，女18例;年齡18～65歲，平均(37.59±1.98)歲;病程1 個(gè)月 ～2 a，平均(10.64 ±3.42)個(gè)月。對照組31例，男18例，女13例;年齡18～65 歲，平均(38.26 ±1.67)歲;病程 1 個(gè)月 ～3 a，平均(11.27±3.28)個(gè)月。兩組患者一般資料對比，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。

2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

中醫(yī)診斷、辨證標(biāo)準(zhǔn)按照《中藥新藥治療痞滿證的臨床研究指導(dǎo)原則》［3］;西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)按照《2003年中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會重慶會議制訂的《慢性胃炎中西醫(yī)結(jié)合診斷標(biāo)準(zhǔn)》［4］和2006年9月中華醫(yī)學(xué)會消化病學(xué)分會全國第二屆慢性胃炎共識上海會議制訂的《慢性胃炎診斷標(biāo)準(zhǔn)》［5］。

3 試驗(yàn)病例標(biāo)準(zhǔn)

3.1 納入病例標(biāo)準(zhǔn)

符合痞滿病中西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)及中醫(yī)辨證的患者，可納入試驗(yàn)病例。

3.2 排除病例標(biāo)準(zhǔn)

①有過多兼夾證或明顯兼夾證者;②辨證不明及影響消化道動(dòng)力的器質(zhì)性疾病;③全身其他系統(tǒng)疾病;④近2周內(nèi)，使用過影響胃腸動(dòng)力藥物者。

4 治療方法

治療組給予健脾理氣方，藥物組成:陳皮10 g，法半夏 15 g，木香 10 g，砂仁 10 g，黨參 15 g，茯苓15 g，白術(shù) 15 g，浙貝母10 g，海螵蛸15 g，郁金15 g，延胡索15 g，炙甘草6 g。對照組給予《國家藥典》香砂六君子方，藥物組成:木香6 g，砂仁6 g，黨參10 g，茯苓 9 g，白術(shù) 9 g，陳皮 9 g，法半夏 12 g，炙甘草6 g。為增強(qiáng)患者的依從性，兩組均選用免煎顆粒劑沖服，每日2次。試驗(yàn)期間不得使用對本病本證有治療作用的其他藥物。

兩組均以4周為1個(gè)療程，共治療1個(gè)療程。

5 檢測試劑與材料

5.1 主要試劑

抑肽酶。MTL和CGRP指標(biāo)檢測試劑盒:內(nèi)含酶聯(lián)板、標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品)、樣品稀釋液、檢測稀釋液AB、檢測溶液AB、底物溶液、濃洗滌液。NO酶標(biāo)檢測試劑盒。

5.2 主要器材

一次性采血器、微量移液器、一次性微量試管、低速臺式離心機(jī)、－70℃冷凍冰箱、抗凝采血管、微量有機(jī)分析專用超純水機(jī)、恒溫生化培養(yǎng)箱、離心機(jī)、酶標(biāo)儀、分光光度計(jì)。

6 檢測指標(biāo)與方法

6.1 血液采集

在早晨采集外周靜脈血2 mL置于抗凝采血管中，在4℃以3 000 r/min轉(zhuǎn)速離心10 min，分離的血漿存放于－70℃超低溫冰箱。治療前后各采血1次。

6.2 MTL 檢測

采用酶聯(lián)免疫法。首先將試劑恢復(fù)到室溫，設(shè)標(biāo)準(zhǔn)、待測樣品、空白孔，除空白孔外，其余各孔分別加待測樣品、標(biāo)準(zhǔn)品各100 μL，輕晃，混合均勻，酶標(biāo)板加蓋，37℃反應(yīng)120 min;棄液，甩干;每孔先后加檢測溶液 A、B 各100 μL，37 ℃，60 min，棄液，洗板，甩干;之后每孔加底物溶液90 μL，37℃避光顯色30 min;每孔加終止溶液50 μL;15 min內(nèi)用酶聯(lián)儀依序測量各孔OD值，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程式，計(jì)算樣品濃度。

6.3 CGRP 檢測

檢測步驟同MTL檢測方法。

6.4 NO 檢測

一氧化氮在血液中以亞硝酸鹽和硝酸鹽的形式存在，測得這兩類物質(zhì)的濃度便可得知NO的濃度。取試管數(shù)支分別標(biāo)明空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、測定管;按試劑說明書分別加入等量蒸餾水、20 μmol/L亞硝酸鈉、樣品，混勻后放置 10 min，3 500 ～4 000 r/min，離心10 min，取上清液，分別加入顯色劑0.4 mL混合均勻，15 min之后進(jìn)行550 nm比色，0.5 cm光徑比色杯，水調(diào)零，測每個(gè)試管的 OD值，計(jì)算 NO濃度。

7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件處理。計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)()±標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn);等級資料組間比較采用Ridit分析。以P＜0.05為差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

8 結(jié)果

8.1 兩組基線期組間對比

結(jié)果顯示:治療前治療組與對照組血漿MTL、CGRP、NO濃度組間對比，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

8.2 兩組治療4周后血漿 NO、CGRP、MTL水平對比

見表1。

表1 兩組治療4周后血漿NO、CGRP、MTL水平對比 ±s

表1 兩組治療4周后血漿NO、CGRP、MTL水平對比 ±s

注:與對照組對比，＊＊ P ＜0.01。

組 別 例數(shù) 血漿NO/(μmol·L-1) CGRP/(μg·L-1) MTL/(ng·L-1)治療組 32 39.22±4.32＊＊ 33.75±3.86＊＊ 286.51±5.67＊＊31 43.10 ±3.94 56.44 ±3.77 242.61 ±5.74對照組

8.3 治療組治療4周后與治療前血漿NO、CGRP、MTL水平對比

見表2。

表2 治療組治療4周后與治療前血漿NO、CGRP、MTL水平對比 ±s

表2 治療組治療4周后與治療前血漿NO、CGRP、MTL水平對比 ±s

注:與治療前對比，＊＊ P ＜0.01。

時(shí) 間 例數(shù) 血漿NO/(μmol·L-1) CGRP/(μg·L-1) MTL/(ng·L-1)治療后 32 39.22±4.32＊＊ 33.75±3.86＊＊ 286.51±5.67＊＊31 58.37 ±3.23 86.43 ±3.76 188.21 ±6.32治療前

9 討論

痞滿的病因可歸納為素體脾虛、外邪入侵、飲食不節(jié)、情志不暢;病機(jī)可總結(jié)為中焦氣機(jī)不利，脾升胃降失常。臨床主證為自覺心下痞塞，胸膈脹滿，觸之無形，按之柔軟，壓之無痛［6］。有研究［7］表明:健脾中藥顆粒劑能明顯改善此類患者的鋇條排空率、促進(jìn)胃動(dòng)力。有學(xué)者研究［8］發(fā)現(xiàn):脾虛型痞滿患者的胃動(dòng)力較正常人低，血漿胃動(dòng)力指標(biāo)紊亂，血漿胃腸動(dòng)力因子與痞滿的證型表現(xiàn)有相關(guān)性，脾虛患者血胃動(dòng)素濃度顯著低于正常人。胃腸道受到神經(jīng)—體液調(diào)節(jié)系統(tǒng)的精密調(diào)控。胃動(dòng)素是啟動(dòng)消化間期胃腸移行性復(fù)合運(yùn)動(dòng)的重要激素，在消化間期Ⅲ相誘發(fā)上消化道蠕動(dòng)，并誘發(fā)胃電活動(dòng)，功效強(qiáng)、作用久。有實(shí)驗(yàn)表明:提高胃動(dòng)力低下大鼠血液及胃竇組織中胃動(dòng)素含量能夠提高大鼠的胃腸動(dòng)力［9］。相應(yīng)的中藥煎劑能明顯提高模型大鼠血漿中胃動(dòng)素含量，改善胃動(dòng)力障礙大鼠的胃腸機(jī)能狀態(tài)，增加其胃腸運(yùn)動(dòng)功能［10］。胃竇和十二指腸存在著特異的胃動(dòng)素受體，胃動(dòng)素通過直接作用于平滑肌細(xì)胞上的胃動(dòng)素受體而起作用，胃的排空與血MTL濃度有高度相關(guān)性［11］。血 MTL濃度與胃電圖的研究表明:胃電圖中的平均振幅和頻率與MTL呈線性關(guān)系。CGRP廣泛分布于胃腸道黏膜下層和肌間神經(jīng)叢，具有調(diào)節(jié)胃腸血流及運(yùn)動(dòng)功能的作用，能降低細(xì)胞膜對Ca2+的通透性，影響細(xì)胞內(nèi)外的鈣離子濃度進(jìn)而影響胃腸平滑肌細(xì)胞的舒縮活動(dòng)［12］;此外，CGRP能促進(jìn)胃腸生長抑素的釋放從而抑制胃腸蠕動(dòng)［13］。

NO作為神經(jīng)傳遞和調(diào)節(jié)的媒介，具有重要的胃腸運(yùn)動(dòng)調(diào)節(jié)作用，對胃腸道的作用與MTL相反，能使胃停止收縮，進(jìn)而產(chǎn)生容受性舒張運(yùn)動(dòng)，胃的運(yùn)動(dòng)狀態(tài)與幽門、胃竇、胃體處黏膜血流中的NO濃度相關(guān)。有報(bào)道［14］稱:外源性NO能引起類似非腎上腺素能非膽堿能神經(jīng)刺激下胃腸平滑肌的松弛和超極化作用。戴益琛等［15］報(bào)道幽門松弛與閉合狀態(tài)和胃的局部黏膜中NO水平相關(guān)，松弛者比閉合者NO含量明顯增加。因此，推斷NO水平升高是引起幽門松弛的重要因素。健脾理氣方由補(bǔ)益脾胃之氣、補(bǔ)中兼行、溫而不燥的四君子湯加味而成。本研究顯示:健脾理氣方與香砂六君子方都能使脾虛氣滯型痞滿患者血CGRP、NO濃度下降、血MTL濃度升高;組間對比顯示:健脾理氣方對脾虛氣滯型痞滿患者的胃腸動(dòng)力相關(guān)因子的改善程度優(yōu)于香砂六君子組，也表明健脾理氣方具有明確的促胃動(dòng)力作用。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):四君子湯能升高脾虛模型大鼠的血MTL水平，加強(qiáng)其胃腸運(yùn)動(dòng)［16］，具有雙向調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)的功效［17－18］。白術(shù)能明顯增加胃竇肌間神經(jīng)叢中P物質(zhì)的含量，減少血管活性腸肽、NOS的含量，這在白術(shù)的促動(dòng)力效應(yīng)中起一定作用。上述研究表明:健脾理氣方可有效調(diào)節(jié)血漿中MTL、CGRP、NO等胃腸動(dòng)力相關(guān)因子。筆者推測此應(yīng)該是健脾理氣方治療脾虛氣滯型痞滿病的作用機(jī)制之一。

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