絨毛訶子果實多酚類化學(xué)成分及抗氧化活性研究△

齊敬浩，文先，陳貴林*，波多野力

(1.內(nèi)蒙古大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010021； 2.內(nèi)蒙古自治區(qū)中蒙藥材規(guī)范化生產(chǎn)工程技術(shù)研究中心，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010021； 3.岡山大學(xué) 藥學(xué)部，岡山 700-8530)

中藥科技

絨毛訶子果實多酚類化學(xué)成分及抗氧化活性研究△

齊敬浩1，2，文先1，2，陳貴林1，2*，波多野力3

(1.內(nèi)蒙古大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010021； 2.內(nèi)蒙古自治區(qū)中蒙藥材規(guī)范化生產(chǎn)工程技術(shù)研究中心，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010021； 3.岡山大學(xué) 藥學(xué)部，岡山 700-8530)

目的：研究絨毛訶子果實中多酚類化學(xué)成分及其抗氧化活性。方法：采用Toyopearl HW-40和MCI gel CHP-20P柱分離并結(jié)合制備型高效液相色譜,對訶子70%丙酮提取部分進行分離純化，利用MS、1H-NMR和13C-NMR進行結(jié)構(gòu)鑒定；以紫外分光光度法測定訶子多酚類對DPPH·和ABTS+·的清除率。結(jié)果：從訶子果實中分離鑒定了9個化合物，分別鑒定為：訶黎勒酸(1)、訶子酸(2)、1，3，4，6-四-O-沒食子酰-β-D-葡萄糖苷(3)、1，3，6-三-O-沒食子酰-β-D-葡萄糖苷(4)、沒食子酸(5)、訶子素(6)、1，2，3，4，6-五-O-沒食子酰-β-D-葡萄糖苷(7)、新訶黎勒鞣花酸甲酯(8)、新訶黎勒鞣花酸酯(9)。其中4、8為首次從訶子中分離得到?？寡趸瘜嶒炛?，化合物4的TEAC值為(3.912±0.21) mmol·g-1，抗氧化活性最強，與其他單體化合物比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，化合物3、5和6的TEAC值與對照品維生素C接近，有較強的抗氧化活性，與對照組比較差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義，但是與其他化合物比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，化合物8的抗氧化活性最低。

鞣質(zhì)；NMR；訶子果實；抗氧化

絨毛訶子TerminaliachebulaRetz.var.tomentellaKurt.為使君子科植物，以干燥成熟的果實入藥，是重要的藏藥和蒙藥，多產(chǎn)于我國云南、貴州、廣東、廣西等地。其味苦、酸、澀，性平，歸肺、大腸經(jīng)，具有澀腸止瀉、斂肺止咳、降火利咽的功能[1]。訶子果實含豐富的鞣質(zhì)類化合物，約占30%～37.36%，且具有很強的抗氧化活性[2]，其主要成分為三萜酸類、沒食子酰葡萄糖、沒食子酰的簡單酯類化合物及蒽醌類等物質(zhì)[3]。魏安池等[4]對多種天然植物進行抗氧化篩選時，發(fā)現(xiàn)訶子粉末具有很強的抗氧化活性，且其活性強于合成抗氧化劑BHA，介于BHA與茶多酚之間。

目前研究報道訶子提取物具有良好的抗氧化活性，但僅對粗提物和少數(shù)幾個化合物的活性進行了研究，如訶子酸、訶黎勒酸等。研究發(fā)現(xiàn)，訶子醇提物可控制糖尿病大鼠體內(nèi)的過氧化氫含量，發(fā)揮抗氧化劑的作用[5]；而鞣質(zhì)類訶子酸可保護大鼠肝細胞免受氧化損傷，具有清除自由基的活性[6]。目前國內(nèi)對訶子的研究主要集中在訶子粗提物、訶子多酚和訶子多糖等藥理作用和幾個常見單體化合物的藥理活性方面，尚未系統(tǒng)開展訶子可水解多酚類化合物提取分離，也未見對起主要抗氧化作用的單體化合物進行鑒定分析。筆者主要采用柱色譜分離并結(jié)合制備型高效液相色譜法，對訶子可水解多酚類化合物進行分離純化，利用MS、1H-NMR和13C-NMR等方法進行單體化合物的結(jié)構(gòu)鑒定；并對分離得到的單體化合物進行抗氧化活性實驗，旨在為從訶子中篩選新的天然抗氧化劑提供理論依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

超導(dǎo)核磁共振波譜儀(SC-NMR，美國Varian公司)；電噴霧質(zhì)譜儀(德國Bruker公司)；反相HPLC(RP-HPLC)為Shimadzu LC-10A系統(tǒng)，正相HPLC(NP-HPLC)為Shimadzu LC-6A系統(tǒng)。

1.2 材料

絨毛訶子果實于2012年3月購于內(nèi)蒙古呼和浩特市賽罕區(qū)榮新堂藥店，產(chǎn)于貴州省，經(jīng)日本岡山大學(xué)藥學(xué)部波多野力教授鑒定為絨毛訶子TerminaliachebulaRetz.var.tomentellaKurt.。

分析純乙醇、甲醇、丙酮和質(zhì)譜級乙腈、甲醇(Sigma-Aldrich公司)；色譜純乙腈和甲醇(Merck公司)。色譜柱填料 MCI-gel CHP-20P(日本三菱化學(xué)公司)；Toyopearl HW-40 (日本東曹株式會社)。

2 方法

2.1 絨毛訶子果實活性成分的提取與分離

取絨毛訶子粉末685 g，用70%丙酮進行提取分離(每次2 000 mL，共提取3次，每次12 h)，合并提取液，濃縮至800 mL，然后依次用乙酸乙酯和正丁醇萃取，得乙酸乙酯萃取部分(153.169 1 g)、正丁醇萃取部分(69.385 6 g)和殘留水溶性物質(zhì)(116.135 8 g)。取乙酸乙酯萃取物上Toyoperal 40-C柱(34 cm×2.2 cm)，用70%乙醇水溶液-70%丙酮水溶液洗脫，用順、反高效液相檢測，相似部分合并得到15個部分。第4部分通過MCI-gel CHP-20P柱(30 cm×1.1 cm)進一步純化，甲醇-甲醇水溶液(0%→10%→20%→30%→40%→50%→100%)梯度洗脫。從甲醇洗脫部分得化合物5(0.397 7 g)，從10%甲醇水溶液洗脫部分的第2流分得到化合物4(0.217 7 g)，40%甲醇水溶液洗脫部分的第3流分用制備型高效液相[色譜柱J′sphere ODS-H80(250 mm×10 mm，4 μm，80 A)]進一步精制，流動相為水-乙腈-甲酸(19∶80∶1)，柱溫為40 ℃，流速為2.0 mL·min-1，檢測波長均為280 nm，得到化合物1(0.727 4 g)和6(0.063 8 g)。50%甲醇水溶液洗脫，得到6個部分，其中前3部分經(jīng)制備型高效液相純化，得化合物2(0.261 2 g)，3(0.05 2 g)和7(0.121 0 g)。甲醇洗脫部分再經(jīng)MCI-gel CHP-20P柱(1.1 mm×30 cm)進一步純化，得到化合物8(0.007 3 g)和9(0.052 2 g)。共得到9個多酚類單體化合物。

2.2 HPLC檢測條件

NP-HPLC采用YMC-PACK SIL A-003色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm，12 nm)，流動相為正己烷-甲醇-四氫呋喃-甲酸(55∶33∶11∶1)和450 mg·L-1的草酸，流速為1.5 mL·min-1，室溫下280 nm處檢測。

RP-HPLC采用YMC-PACK ODS-A色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm，12 nm)，流動相為水-乙腈-甲酸(89∶10∶1)，柱溫為40 ℃，流速為1.0 mL·min-1。

半制備HPLC(semipreparative HPLC)色譜柱為J′sphere ODS-H80(250 mm×10 mm，4 μm，80 A)，流動相為水-乙腈-甲酸(19∶80∶1)，柱溫為40 ℃，流速為2.0 mL·min-1，檢測波長均為280 nm。

2.3 訶子果實抗氧化活性測定

2.3.1 清除DPPH自由基能力測定[7]配制濃度為1×10-6mol·g-1的DPPH甲醇溶液，取1 mL該溶液與3 mL不同濃度的樣品溶液(160，120，80，40，20，0 μg·mL-1)輕輕混勻，室溫反應(yīng)30 min。于515 nm處測定反應(yīng)物的吸光度，以維生素C為對照。樣品清除能力用加樣品較空白對照的DPPH吸光度的降低來表示。樣品抑制百分率按如下公式計算。

抑制率(%)=(1-AA/AB)×100

式中：AA為加樣品后DPPH吸光度，AB為空白對照的吸光度。IC50表示能夠清除50%自由基所需的樣品濃度，IC50從樣品清除率的線性曲線計算可得。

2.3.2 清除ABTS自由基能力測定 參考Re等[8]的方法測定清除ABTS自由基能力。測定Trolox標準曲線方程為Y=0.468X+2.659(r=0.994)，Y為消除率，X為濃度。

3 結(jié)果與分析

3.1 訶子果實活性成分結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色無定形粉末，ESI-MS m/z：953[M-H]-，分子量為954。1H-NMR 400 MHz，acetone-d6+D2O)：7.03，7.15，7.23(each 2H，s，Galloyl)，4.87(1H，d，J=7.2 Hz，Chebubyl-2′)，5.07(1H，dd，J=7.2，1.2 Hz，Chebubyl-3′)，3.81(1H，m，Chebubyl-4′)，2.13(2H，t，J=3.2 Hz，Chebubyl-5′)，7.48(1H，s，Chebubyl-3″)，6.48(1H，s，Glu-H-1)，5.47(br，s，Glu-H-2)，5.88(m，Glu-H-3)，5.20(d，J=3.6 Hz，Glu-H-4)，4.71(t，J=10.8 Hz，Glu-H-5)，4.42(dd，J=10.8，8.0 Hz，Glu-Ha-6)，4.81(t，J=8.0 Hz，Glu-Hb-6)，7.01，6.63(each 1H，s，HHDP)；13C-NMR(151 MHz，acetone-d6+D2O)：119.8(Galloy-C-1)，110.4(Galloy-C-2，6)，145.9(Galloy-C-3，5)，139.9(Galloy-C-4),165.6(-COO-)，169.7(Chebubyl-C-1′)，66.2(Chebubyl-C-2′)，41.0(Chebubyl-C-3′)，39.3(Chebubyl-C-4′)，172.9(Chebubyl-C-6′)，173.6(Chebubyl-C-7′)，165.6(Chebubyl-C-8′)，115.7(Chebubyl-C-1″)，118.5(Chebubyl-C-2″)，117.1(Chebubyl-C-3″)，146.5(Chebubyl-C-4″)，136.6(Chebubyl-C-5″)，140.8(Chebubyl-C-6″)，91.6(Glu-C-1)，70.7(Glu-C-2)，61.8(Glu-C-3)，66.2(Glu-C-4)，73.7(Glu-C-5)，63.9(Glu-C-6)，115.2，117.1(HHDP-1″″)，124.3，125.3(HHDP-2″″)，107.5，110.1(HHDP-3″″)，144.5，145.2(HHDP-4″″)，136.6，137.6(HHDP-5″″)，145.1，145.3(HHDP-6″″)，166.3，168.0(-COO-)。從1H-NMR與13C-NMR圖譜可看出該化合物是1個HHDP、1個chebubyl和沒食子酸連接在1個六碳糖上。依據(jù)糖的碳化學(xué)位移值判斷該糖為葡萄糖，參照文獻[9]鑒定該化合物為訶黎勒酸?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。

化合物2：白色針晶，ESI-MS m/z：955[M-H]-，分子量為955。1H-NMR (400 MHz，acetone-d6+D2O)：7.13(2H，s，Galloyl-3，5)，5.08(1H，d，J=3.6 Hz，Chebubyl-2′)，5.13(1H，dd，J=7.2，1.6Hz，Chebubyl-3′)，3.92(1H，t，J=7.2 Hz，Chebubyl-4′)，7.52(1H，s，Chebubyl-3″)，6.51(1H，d，J=2.0 Hz，Glu-H-1)，5.46(1H，m，Glu-H-2)，6.28(1H，d，J=2.0 Hz，Glu-H-3)，5.07(1H，d，J=3.65 Hz，Glu-H-4)，4.72(m，Glu-H-5)，4.72(m，Glu-Ha-6)，4.85(m，Glu-Hb-6)；13C-NMR(151 MHz，acetone-d6+D2O)：119.5，119.6，120.4(3C，Galloy-C-1)，109.8，110.2(6C，Galloy-C-2，6)，145.8，145.9，146.1(6C，Galloy-C-3，5)，139.2，139.8，139.9(3C，Galloy-C-4)，165.1，165.2，165.3(3C，-COO-)，169.7(Chebubyl-C-1′)，39.3(Chebubyl-C-3′)，173.3(Chebubyl-C-4′)，173.8(Chebubyl-C-5′)，165.3(Chebubyl-C-6′)，115.9(Chebubyl-C-8′)，118.5(Chebubyl-C-1″)，146.6(Chebubyl-C-3″)，140.9(Chebubyl-C-5″)，156.3(Chebubyl-C-6″)，92.2(Glu-H-1)，70.9(Glu-H-2)，62.1(Glu-H-3)，68.9(Glu-H-4)。從1H-NMR 與13C-NMR圖譜可看出該化合物是3個沒食子酸和1個chebubyl連接在1個六碳糖上。依據(jù)糖的碳化學(xué)位移值判斷該糖為葡萄糖，參照文獻鑒定該化合物為訶子酸[10]?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。

化合物3：ESI-MS m/z：788.11[M-H]-，分子量為788。1H-NMR (CD3OD)：7.01(s，2H)，7.05(s，2H)，7.09(s，2H)，7.15(s，2H)，5.94(d，J=8.0 Hz)，4.00(m)，5.61(t，J=9.6 Hz)，5.42(t，J=10.2 Hz)，4.33(m)，4.49(dd，J=2.0，10.4Hz)，4.18 (dd，J=4.8，7.2 Hz)。從1H-NMR與gCOSY圖譜可看出該化合物是4個沒食子酸連接在1個六碳糖的1，3，4，6位上。依據(jù)糖的碳化學(xué)位移值判斷該糖為葡萄糖，參照文獻鑒定該化合物為1，3，4，6-四-O-沒食子酰-β-D-葡萄糖苷(1，3，4，6-tetra-O-galloyl-β-D-glucose)[11]。化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。

化合物4：ESI-MS m/z：637.10[M-H]-，分子量為638。1H-NMR (CD3OD)：7.09(s，2H)，7.13(s，2H)，7.14(s，2H)，5.83(d，J=8.0 Hz)，3.85(m)，5.28(t，J=9.2，9.6 Hz)，3.95(m)，4.35(dd，J=5.2，5.6 Hz)，4.55(dd，J=1.6，10.4 Hz)。從1H-NMR與gCOSY圖譜可看出該化合物是3個沒食子酸連接在1個六碳糖的1，3，6位上。依據(jù)糖的碳化學(xué)位移值判斷該糖為葡萄糖，參照文獻鑒定該化合物為1，3，6-三-O-沒食子酰-β-D-葡萄糖苷(1，3，6-tri-O-galloyl-β-D-glucose)[12]?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。

化合物5：無色結(jié)晶，ESI-MS m/z：170.02[M-H]-，分子量為170。1H-NMR(CD3OD)：7.07(2H，s，gal-2，5)。該化合物結(jié)構(gòu)比較簡單，液相圖譜中正反相出峰時間最早，且通過與對照品對比、文獻對照[13]、1H-NMR與gCOSY圖譜，可看出該化合物是沒食子酸。

化合物6：淡黃色結(jié)晶粉末。1H-NMR (400 MHz，acetone-d6+D2O)：6.52(1H，s，Glu-H-1)，5.47(1H，d，J=10.8 Hz，Glu-H-2)，5.70(1H，s，Glu-H-3)，5.35(brd，J=3.6 Hz，Glu-H-4)，4.66(1H，m，Glu-H-5)，4.71，4.80(m，Glu-H-6)，6.98(2H，1-O-galloyl-2，6)，7.07(2H，3-O-galloyl-2，6)，7.22(2H，6-O-galloyl-2，6)，4.90(1H，t，J=9.6 Hz，AHHDP-1)，6.22 (1H，d，J=1.2 Hz，AHHDP-3)，7.14(1H，s，AHHDP-3′)。從1H-NMR與gCOSY圖譜可看出該化合物是3個沒食子酸分別連接在1個六碳糖的1，3，6位上，1個AHHDP連接在2，4位點上。依據(jù)糖的碳化學(xué)位移值判斷該糖為葡萄糖，參照文獻鑒定該化合物為訶子素(Terchebin)[14]?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。

化合物7：淡黃色晶體，UV最大吸收217，278 nm。ESI-MS m/z：939.1[M-H]-，分子量為940。1H-NMR(400 MHz，acetone-d6+D2O)：6.95(s，2H)，6.98(s，2H)，7.02(s，2H)，7.08(s，2H)，7.11(s，2H)，6.25(d，J=6.4 Hz，Glu-H-1)，5.61(m，Glu-H-2)，4.53(t，Glu-H-3)，4.26(d，Glu-H-4)，5.97(t，Glu-H-5)。從1H-NMR與gCOSY圖譜可看出該化合物是5個沒食子酸分別連接在1個六碳糖的1，2，3，4，6位上。依據(jù)糖的碳化學(xué)位移值判斷該糖為葡萄糖，參照文獻鑒定該化合物為1，2，3，4，6-五-O-沒食子酰-β-D-葡萄糖苷(1，2，3，4，6-penta-O-galloyl-β-D-glucose)[15]。化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。

化合物8：淡紫色晶體，ESI-MS m/z：988.139[M-H]-，分子量為988。1H-NMR (400 MHz，acetone-d6+D2O)：4.61(1H，s，Chebubyl-C-2′)，3.64(1H，d，J=11.2 Hz，Chebubyl-C-3′)，2.96(m，Chebubyl-C-4′)，2.30(1H，d，J=4.4 Hz，Chebubyl-C-5′)，2.62(1H，m，Chebubyl-C-5′)6.97(s，Chebubyl-C-2″)，5.89(1H，d，J=8.4 Hz，Glu-H-1)，3.93(1H，t，J=8.8 Hz，Glu-H-2)，5.53(1H，t，J=9.2 Hz，Glu-H-3)，5.44(1H，t，J=9.6 Hz，Glu-H-4)，4.20(m，Glu-H-5)，4.30(1H，t，J=4.4 Hz，Glu-Ha-6)。從1H-NMR 與gCOSY圖譜可看出該化合物是3個沒食子酸分別連接在1個六碳糖的1，3，6位上，在高能場區(qū)有3個明顯的Chebubyl H信號。依據(jù)糖的碳化學(xué)位移值判斷該糖為葡萄糖，參照文獻鑒定該化合物為新訶黎勒鞣花酸甲酯(Methyl neochebulinate)[16]?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。

化合物9：淡黃色晶體，1H-NMR (400 MHz，acetone-d6+D2O)：4.79(1H，s，Chebubyl-C-2′)，3.22(1H，d，J=10.4 Hz，Chebubyl-C-3′)，2.94(m，Chebubyl-C-4′)，2.43(1H，d，J=4.8 Hz，Chebubyl-C-5′)，2.44(1H，m，Chebubyl-C-5′)，7.06(s，Chebubyl-C-2″)，5.88(1H，d，J=8.4 Hz，Glu-H-1)，4.02(1H，t，J=8.4 Hz，Glu-H-2)，5.43(1H，d，J=10.8 Hz，Glu-H-3)，4.19(m，Glu-H-5)，4.25(1H，t，J=4.4 Hz，Glu-H-6)。從1H-NMR與gCOSY圖譜可看出該化合物是3個沒食子酸分別連接在1個六碳糖的1，3，6位上，在高能場區(qū)有3個明顯的Chebubyl H信號。且化合物9的1H-NMR與gCOSY圖譜和化合物8的圖譜基本相似，但在高能場附近有幾個H信號，最后和文獻[17]對比判斷少連1個甲基，鑒定該化合物為新訶黎勒鞣花酸酯(neochebulinate)。化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。

圖1 化合物1～4、6～9化學(xué)結(jié)構(gòu)

3.2 訶子果實抗氧化能力測定

3.2.1 DPPH自由基法抗氧化活性測定 DPPH自由基法測定抗氧化活性是通過DPPH自由基的半數(shù)清除率(IC50)來表示，IC50值越小，其抗氧化活性越高。訶子果實不同提取物和單體化合物的抗氧化活性見圖2。幾個粗提物的IC50值很高，抗氧化活性明顯較低，其中70%丙酮提取物的IC50值(35.3±2.4)較低，說明其抗氧化活性要比其他幾個粗提物的抗氧化活性高，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。其他粗提物IC50值都較大，抗氧化活性較低，差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義。乙酸乙酯萃取物的第4部分經(jīng)Toyoperal 40-C柱分離得單體化合物，化合物4的抗氧化活性最強，且比對照品維生素C效果還好，化合物3和5抗氧化活性也很高，但與對照品比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。其他幾個單體化合物的抗氧化活性較幾個粗提物要高，與對照品維生素C相比活性要低，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果表明化合物3、4和5具有較高的抗氧化活性，具有開發(fā)新型天然抗氧化劑的潛能。

注：不同小寫字母表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),下同圖2 訶子果實不同提取物和單體化合物的 抗氧化活性比較(DPPH自由基法)

3.2.2 ABTS自由基法抗氧化活性測定 ABTS法考察結(jié)果與DPPH法類似，結(jié)果見圖3。粗提物中70%丙酮提取物的TEAC值最大，與其他幾個粗提物相比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，但與對照品維生素C相比，抗氧化活性要低?；衔?的TEAC值(3.912±0.21) mmol·g-1抗氧化活性最強，與其他單體化合物比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，化合物3、5和6的TEAC值與對照品維生素C接近，有較強的抗氧化活性，與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但與其他化合物比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，化合物8的抗氧化活性最低。結(jié)果與DPPH法一致，化合物3、4和5具有較高的抗氧化活性，具有開發(fā)新型天然抗氧化劑的潛能。

圖3 訶子果實不同提取物和單體化合物的 抗氧化活性比較(ABTS自由基法)

4 討論

許多研究表明，訶子中含有大量的酚類和黃酮類物質(zhì)，且酚類物質(zhì)在抗氧化活性中起重要作用。因此，本研究中首先采用柱分離(Toyopearl HW-40和MCI-gel CHP-20P)結(jié)合制備型高效液相色譜對訶子70%丙酮提取部分進行分離，得到9種鞣質(zhì)類化合物，然后利用ABTS和DPPH方法對訶子果實各萃取部分及單體化合物的抗氧化能力進行測定。以往多利用DPPH法、TBA法及碘量法對不同溶劑的訶子提取物的抗氧化活性進行評價，發(fā)現(xiàn)不同溶劑的提取物相同濃度下清除DPPH自由基的能力依次為：95%乙醇>乙酸乙酯>正己烷。其中訶子95%乙醇提取物對亞油酸的抗氧化能力甚至強于同等濃度的茶多酚[19]；乙酸乙酯提取物對食用油的抗氧化能力強于同濃度的茶多酚，甚至可與合成的抗氧化劑TBHQ相當(dāng)[19]。

目前訶子的研究主要集中在藥理方面，且活性研究只是做到粗提物水平，并未對活性強的部位繼續(xù)分離。本研究中經(jīng)過進一步分離精制，發(fā)現(xiàn)訶子中的幾個化合物具有明顯的抗氧化活性，且活性較對照品維生素C強，為訶子提取物研發(fā)成一種用于油脂和含油食品的天然抗氧化劑提供了理論依據(jù)。

[1] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：173.

[2] 張杰.鞣質(zhì)的藥理作用(Ⅲ)——抗氧化、降脂、降壓等多種作用[J].國外醫(yī)藥·植物藥分冊，1995，10(3)：99-103.

[3] 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2001：1174-1177.

[4] 魏安池，周瑞寶，瞿水忠.訶子抗氧化性能的研究[J].鄭州糧食學(xué)院學(xué)報，1998，19(1)：8-12.

[5] Senthilkumar G P，Subram anian S.Evaluation of antioxidant potential ofTerminaliachebulafruits studied in streptozotocin-induced diabeticrats[J].Pharm Biol，2007，45(6)：511-518.

[6] Lee H S，Jung S H，Yun B S，et al.Isolation of chebulic acid fromTerminaliachebulaRetz.and its antioxidant effect in isolated rat hepatocytes[J].Arch Toxicol，2007，81(3)：211-218.

[7] 段園園，馬耀，陳貴林.鎖陽中粗多酚和粗多糖抗氧化活性的比較[J].中國現(xiàn)代中藥，2012，14(1)：43-46.

[8] Re R，Pellegrini N，Proteggente A，et al.Antioxidant activity applying an improved ABTS+radical cation decolorization assay[J].Free Rad Biol Med，1999，26(9)：1231-1237.

[9] 丁崗，劉延澤，王莉，等.訶子中主要可水解丹寧的結(jié)構(gòu)鑒定[J].中國藥科大學(xué)學(xué)報，2001，32(2)：91-93.

[10] Owen R W，Haubner R，Hull W E，et al.Isolation and structure elucidation of the major individual polyphenols in carobfibre[J].Food Chem，2003,41：1727-1738.

[11] Barreto J C，Trevisan M T，Hull W E，et al.Characterization and quantitation of polyphenolic compounds in bark，kernel，leaves，and peel of mango (MangiferaindicaL.)[J].J Agric Food Chem，2008,56：5599-5610.

[12] Hatano T，Yasuhara T，Yoshihara R，et al.Effects of interaction of tannins with co-existing substances VII.Inhibitory effects of tannins and related polyphenols on xanthine oxidase[J].Chem Pharm Bull，1990，38：1224-1229.

[13] 張超，方巖雄.中藥地菍的化學(xué)成分研究[J].中國中藥雜志，2003，28(5)：429-431.

[14] Lin TC，Nonaka G，Nishioka I，et al.Tannins and Related Compounds.CⅡ.Structures of terchebulin，an ellagitannin having a novel tetraphenylcarboxylic acid (terchebulic acid) moiety，and biogenetically related tannins fromTerminaliachebulaRetz.[J].Chem Pharm Bull，1990，38(11)：3004-3008.

[15] Hatano T，Yoshida T，Shingu T，et al.13C Nuclear magnetic resonance spectra of hydrolyzable tannins.III.Tannins having IC4glucose and C-glucosidic linkage[J].Chem Pharm Bull，1988，36：3849-3856.

[16] Juang L J，Sheu S J，Lin T C.Determination of hydrolyzable tannins in the fruit ofTerminaliachebulaRetz.by high-performance liquid chromatography and capillary electrophoresis[J].J Sep Sci，2004，27：718-724.

[17] Juang L J，Sheu S J，Lin T C.Determination of hydrolyzable tannins in the fruit ofTerminaliachebulaRetz.by high-performance liquid chromatography and capillary electrophoresis[J].J Sep Sci，2004，27：718-724.

[18] 孟潔，杭瑚.訶子抗氧化作用的研究[J].食品科學(xué)，2000，21(2)：9-12.

[19] 金裕范，高雪巖，王文全，等.云南普洱茶抗氧化活性的比較研究[J].中國現(xiàn)代中藥，2011，13，(8)：17-19.

PolyphenolicCompoundsandAntioxidantActivityofTerminaliachebulaRetz.var.tomentellaKurt.

QI Jing-hao1，2，WEN Xian1，2，CHEN Gui-lin1，2*，HATANO Tsutomu3

(1.CollegeofLifeScience，InnerMongoliaUniversity，Hohhot010021，China；2.TheGoodAgriculturePracticeEngineeringTechnologyResearchCenterofChineseandMongolianMedicineinInnerMongolia，Hohhot010021，China；3.FacultyofPharmaceuticalSciences，OkayamaUniversity，Okayama700-8530，Japan)

Objective：To study polyphenolic compounds from fruits ofTerminaliachebulaRetz.var.tomentellaKurt.and their antioxidant activity.Methods：Macroporous resin(Toyopearl HW-40 and MCI gel CHP-20P)columns and preparative HPLC were used，compound structures were determined by MS，NMR，COSY and HMBC techniques.The antioxidant activities of the polyphenolic compounds were assayed based on the method of DPPH and ABTS，which can evaluate the antioxidant abilityinvitro.Results：Nine compounds were isolated and identified as chebulinic acid(1)，chebulagic acid(2)，1，3，4，6-tetra-O-galloyl-β-D-glucose(3)，1，3，6-tri-O-galloyl-β-D-glucose(4)，gallic acid(5)，terchebin(6)，1，2，3，4，6-penta-O-galloyl-β-D-glucose(7)，methyl neochebulinate(8)，neochebulinate(9).Conclusion：Compounds4and8were isolated for the frist time from the fruits ofT.chebula.Compounds3，4and5have obvious antioxidant activity compared with control group.The antioxidant activity of crude extract was lower than single compounds.

Hydrolyzable tannins；NMR；TerminaliachebulaRetz.var.tomentellaKurt.；Antioxidant activity

2013-04-26)

國家科技支撐計劃(2011BAI07B07)

*

陳貴林，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：藥用植物化學(xué);E-mail：guilinchen61@163.com