眩暈定方對后循環(huán)缺血性眩暈家兔血脂水平及椎動脈粥樣硬化的影響1）

劉春華，顏 旭，鄧浩慶，王凈凈，彭逢春，馮 娜

后循環(huán)缺血性眩暈（posterior circulation ischemia vertigo，PCIV）的主要病因是動脈粥樣硬化，椎動脈起始段是后循環(huán)動脈發(fā)生粥樣硬化狹窄最常見的部位，是造成后循環(huán)缺血的主要原因之一［1］。長期的臨床實踐中總結(jié)了眩暈定方治療PCIV，取得了滿意療效［2，3］。為了進(jìn)一步闡明眩暈定方可能的作用機(jī)制，復(fù)制了符合病證結(jié)合特征的家兔模型，觀察該方對家兔血脂水平及椎動脈粥樣硬化的影響。

1 材料與方法

1．1 實驗材料

1．1．1 動物及飼料 健康成年新西蘭白兔60只，由湖南中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供，動物合格證號：SCXK（湘）2009－0012。雌雄各半，清潔級，體重為（2．0±0．3）kg，兔齡在（3～4）個月，飼養(yǎng)環(huán)境室溫（10～20）℃，濕度65%～70%。高脂飼料（每100g高脂飼料含普通飼料79g）和普通飼料，由湖南中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供；膽固醇，購自長沙麗欣生物（CAS號：57－88－5）；蛋黃粉，中國糧油食品廠（漯河）生產(chǎn)（批號：20120914）；豬油，自行購買豬板油煉制。

1．1．2 藥物與試劑 眩暈定方由黃芪、當(dāng)歸、黨參、川芎、丹皮、地龍、葛根、丹參等藥組成，所有中藥飲片均購自湖南振興中藥飲片實業(yè)有限公司（GMP認(rèn)證號：湘 M0415），由湖南中醫(yī)藥大學(xué)附屬中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院制劑室制備成濃縮液，無菌分裝（為方便實驗操作，分別制成濃度相當(dāng)于原生藥1．0g／mL和2．0g／mL兩個規(guī)格）。養(yǎng)血清腦顆粒，由天津天士力制藥股份有限公司生產(chǎn)（批號：120923），每袋4g，15袋／盒。血清總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL－C）和三酰甘油（TG）測定試劑盒，日本積水醫(yī)療科技有限公司產(chǎn)品。

1．1．3 儀器 C800全自動生化儀，美國雅培公司生產(chǎn)；DMLB型雙目顯微鏡，德國LEICA公司產(chǎn)；325型石蠟切片機(jī)，英國Shandon公司生產(chǎn)；LBY－N6B血液流變儀，北京普利生產(chǎn)品。

1．2 動物分組及處理 將60只兔子分籠安靜適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，按體重由小到大編號，隨機(jī)選取8只為空白對照組，其余采用文獻(xiàn)方法造模［4，5］?？瞻捉M予自由飲水，進(jìn)食普通家兔飼料；造模動物自由進(jìn)水、限量普通飼料＋限量高脂飼料喂食。造模過程中，隨機(jī)選取8只為眩暈定預(yù)防組，于造模第4周末給予灌胃眩暈定方中劑量7．66g／（kg·d），以預(yù)防性干預(yù)直至實驗結(jié)束，且第4周末以后改為普通飼料喂養(yǎng)；其余44只造模至第6周結(jié)束時，實際成功32只，隨機(jī)分為模型對照組、養(yǎng)血清腦顆粒組0．575g／（kg·d）及眩暈定高劑量組15．32g／（kg·d）、眩暈定中劑量組7．66g／（kg·d），每組各8只，分別予以灌胃相應(yīng)藥物干預(yù)，共給藥2周，給藥期間均以普通飼料喂養(yǎng)。

1．3 檢測項目與方法

1．3．1 血脂檢測 家兔空腹禁食、禁水8h后，抽取耳緣靜脈血（不加抗凝劑）2mL～3mL，由湖南中醫(yī)藥大學(xué)附屬中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院生化室采用酶聯(lián)分光光度法測定血清TC、TG、LDL－C。1．3．2 血液流變學(xué)指標(biāo)的測定 動物空腹禁食、禁水8h后，抽取耳緣靜脈血2mL（加1．25×104U／mL，肝素0．2mL），經(jīng)循環(huán)水?。?7℃），通過血液流變儀測定全血黏度，每次樣本量為1 mL，每個樣本測量2次，取其均值，黏度計轉(zhuǎn)速范圍為5／s（低切）、30／s（中切）、200／s（高切）。

1．3．3 椎動脈粥樣硬化形態(tài)學(xué)觀察 于實驗第8周末，完成以上檢測項目后，取實驗家兔椎動脈，石蠟切片染色，光學(xué)顯微鏡下觀測形態(tài)學(xué)改變。

2 結(jié) 果

2．1 動物存活情況 空白組第7周灌胃過程中死亡1只，實驗結(jié)束時存活7只；眩暈定預(yù)防組第5周、第7周灌胃過程中各死1只，實驗結(jié)束時存活6只；模型組、眩暈定中劑量組實驗結(jié)束時均存活；眩暈定高劑量組第7周灌胃過程中死亡1只、養(yǎng)血清腦顆粒組第8周灌胃過程中死亡1只，實驗結(jié)束時各存活7只。2．2 對家兔血脂水平的影響 與空白組相比，模型組血清TC、TG、LDL－C水平顯著增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．01）；與模型組相比，眩暈定高劑量組與預(yù)防組、養(yǎng)血清腦顆粒組血清TC、TG、LDL－C水平明顯下降（P＜0．05或P＜0．01），提示各組藥物干預(yù)后可以有效改善血脂水平。各藥物組間比較，眩暈定高劑量組與預(yù)防組無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0．05），而眩暈定高劑量組、預(yù)防組與眩暈定中劑量組、養(yǎng)血清腦顆粒組有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0．05），說明眩暈定方高劑量組及預(yù)防組對血脂水平的改善優(yōu)于眩暈定方中劑量組及養(yǎng)血清腦顆粒組。詳見表1。

表1 各組家兔血清TC、TG、LDL－C水平比較（±s） mmol／L

表1 各組家兔血清TC、TG、LDL－C水平比較（±s） mmol／L

與空白組比較，1）P＜0．01；與模型組比較，2）P＜0．05，3）P＜0．01；與養(yǎng)血清腦顆粒組比較，4）P＜0．05，5）P＜0．01

組別 n TC TG LDL－C空白組 7 2．10±0．240．78±0．20 1．05±0．31模型組 8 14．94±0．701） 1．61±0．441） 13．80±0．381）眩暈定高劑量組 7 10．46±1．043）5） 0．84±0．323）4） 9．67±0．533）5）眩暈定中劑量組 8 14．20±0．872） 1．19±0．392） 13．22±0．552）養(yǎng)血清腦顆粒組 7 14．17±0．652） 1．20±0．362） 13．37±0．422）眩暈定預(yù)防組 6 10．35±0．963）5） 0．84±0．273）4） 9．16±0．573）5）

2．3 對家兔血液流變學(xué)指標(biāo)的影響 與空白組比較，模型組全血黏度高、中、低切水平顯著增高（P＜0．01）；與模型組相比，各藥物干預(yù)組全血黏度高、中、低切水平均顯著降低（P＜0．01），表明均可改善實驗家兔血黏度。其中眩暈定方高、中劑量組及預(yù)防組間無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0．05），而眩暈定各組均低于養(yǎng)血清腦顆粒組（P＜0．05），提示眩暈定方在改善血黏度優(yōu)于養(yǎng)血清腦顆粒。詳見表2。

表2 各組家兔血液流變學(xué)全血黏度水平比較（±s） mPa·s

表2 各組家兔血液流變學(xué)全血黏度水平比較（±s） mPa·s

與空白組比較，1）P＜0．01；與模型組比較，2）P＜0．01；與養(yǎng)血清腦顆粒組比較，3）P＜0．05

組別 n 高切 中切 低切空白組7 4．03±0．30 4．10±0．44 9．07±0．68模型組 8 4．60±0．271） 5．12±0．291） 12．18±0．641）眩暈定高劑量組 7 3．96±0．262）3） 4．02±0．352）3） 8．99±0．412）3）眩暈定中劑量組 8 3．99±0．262）3） 4．07±0．292）3） 9．06±0．372）3）養(yǎng)血清腦顆粒組 7 4．59±0．27 5．06±0．27 12．21±0．62眩暈定預(yù)防組 6 4．00±0．222）3） 4．03±0．302）3） 9．01±0．412）3）

2．4 對家兔椎動脈粥樣硬化的影響 光鏡下各組家兔椎動脈顯微形態(tài)學(xué)顯示，空白組：動脈管腔無狹窄，管壁光滑未增厚，動脈內(nèi)膜連續(xù)，無脫落紊亂；模型組：動脈壁纖維組織增生、變厚，管腔重度狹窄；眩暈定高劑量組：動脈內(nèi)膜增厚，平滑肌細(xì)胞排列紊亂、增生、變性；眩暈定中劑量組：動脈管壁增厚，管腔變窄；眩暈定預(yù)防組：平滑肌細(xì)胞排列稍紊亂，管壁輕度增生、增厚，管腔輕度狹窄；養(yǎng)血清腦顆粒組：動脈內(nèi)膜增厚、不光滑、內(nèi)皮細(xì)胞變性，平滑肌細(xì)胞排列異常，管壁增厚。結(jié)果提示，眩暈定高劑量組及預(yù)防組家兔椎動脈粥樣硬化的改善程度要優(yōu)于中劑量組與養(yǎng)血清腦顆粒組。

3 討 論

腦血管疾病是人類特別是老年人嚴(yán)重致殘和死亡的重要原因之一，缺血性腦血管病是最常見的亞型［6，7］，后循環(huán)缺血（posterior circulation ischemia，PCI）約占其中的20%［8］。椎－基底動脈系統(tǒng)通過基底動脈和（或）小腦下前動脈的深穿支供應(yīng)前庭神經(jīng)核，通過迷路動脈供應(yīng)半規(guī)管。由于前庭神經(jīng)通路廣泛分布于腦干和小腦，前庭終末感受器也由椎－基底動脈系統(tǒng)供血，加之迷路沒有側(cè)支血管網(wǎng)供應(yīng)，對缺血十分敏感。因此，PCI易影響前庭神經(jīng)系統(tǒng)的血流供應(yīng)，造成前庭神經(jīng)核和半規(guī)管短暫性缺血發(fā)作，出現(xiàn)眩暈癥狀［9］，稱為后循環(huán)缺血性眩暈。PCIV的主要病因是動脈粥樣硬化，年齡＞55歲、男性、缺血性心臟病、既往腦卒中或短暫性腦缺血發(fā)作（TIA）病史、高血壓、糖尿病、血脂異常、吸煙、精神壓力等均屬于PCI性眩暈的危險因素［10］。椎動脈起始段是后循環(huán)動脈發(fā)生粥樣硬化狹窄最常見的部位，是造成后循環(huán)缺血的主要原因之一［1］。

眩暈定方是導(dǎo)師王凈凈教授的經(jīng)驗方，在歸納、總結(jié)中醫(yī)學(xué)對“眩暈”病因病機(jī)和現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對后循環(huán)缺血性眩暈病因病理的認(rèn)識，結(jié)合了現(xiàn)代藥理學(xué)研究，在“補(bǔ)陽還五湯”基礎(chǔ)上，創(chuàng)制了該方。以“氣虛血瘀，腦失所養(yǎng)，故頭暈?zāi)垦！弊鳛榱⒄撘罁?jù)，以黃芪、歸尾、川芎、丹皮、丹參、地龍、防風(fēng)、葛根等11味藥組成。方中以黃芪、葛根為君藥，黃芪培補(bǔ)脾肺之氣，令氣旺血行，瘀去則絡(luò)通；川芎活血行氣，上行頭目，為血中之氣藥，歸尾活血補(bǔ)血，兩者性溫，丹皮活血散瘀，丹參活血祛瘀、養(yǎng)血安神，兩藥味辛微寒，四藥寒溫中和，合而為臣，輔佐君藥，共達(dá)活血化瘀之效；配以熄風(fēng)通絡(luò)之蟲類藥地龍，善散外風(fēng)之防風(fēng)為佐使，共奏益氣升清、活血化瘀、熄風(fēng)定弦之功效。既往實驗研究，該方能有效增加血管性眩暈氣虛血瘀證模型家兔的腦血流量，降低血液黏度［11］，亦顯示該方對后循環(huán)缺血性眩暈氣虛血瘀證患者有良好的臨床療效［3］。本研究結(jié)果表明，眩暈定方有降低PCIV家兔模型血脂水平的趨勢（可能因干預(yù)時間只有14d，未能顯示其明顯降脂療效），降低家兔血黏度，改善椎動脈動脈粥樣硬化，這可能是其作用機(jī)制之一；而眩暈定方預(yù)防組的療效較之其他各組（甚至是眩暈定高劑量組）均有顯著性差異，提示我們在去除高脂飲食危險因素后，盡早預(yù)防性給以中等劑量的眩暈定方，可能通過逆轉(zhuǎn)動脈粥樣硬化，達(dá)到改善后循環(huán)缺血、防止后循環(huán)缺血性眩暈的發(fā)生。

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