袖珍椰子根際寄生線蟲種類鑒定

章淑玲，林谷園，陳 婷，張紹升

(1.福建農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院園藝園林系，福建福州350119;2.福建農(nóng)林大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院，福建 福州350002;3.福清出入境檢驗(yàn)檢疫局，福建福清350300)

袖珍椰子(Chamaedorea elegans)，又稱袖珍椰子葵、矮生椰子，為棕櫚科袖珍椰子屬，是優(yōu)良的室內(nèi)中小型盆栽觀葉植物.植物寄生線蟲是觀賞類植物的重要病原物，受線蟲侵染后的植株通常表現(xiàn)為長勢衰弱，至壞死、腐爛等癥狀，嚴(yán)重影響觀賞價值［1］.在觀賞植物上已報道香蕉穿孔線蟲(Radopholus similis)、短體線蟲(Pratylenchus spp.)、根結(jié)線蟲(Meloidogyne spp.)等重要寄生線蟲［1－7］.目前，我國對袖珍椰子根部寄生線蟲種類的研究較少，已報道的線蟲有咖啡短體線蟲(P.coffeae)、短尾盾線蟲(Scutellonema brachyurus)、穿刺短體線蟲(P.penetrans)、螺旋線蟲(Helicotylenchus sp.)、真滑刃線蟲(Aphelenchus sp.)［5－7］.隨著花卉市場需求量的不斷增大，袖珍椰子種苗調(diào)運(yùn)逐漸頻繁，線蟲極易通過種苗及介質(zhì)傳播.因此，有必要加強(qiáng)對袖珍椰子根部寄生線蟲的普查與鑒定.

1 材料與方法

1.1 線蟲樣本的采集

于2010－2011年，采集福州市多家園藝場的袖珍椰子根系及根際介質(zhì).根據(jù)調(diào)查范圍的大小，每個園藝場至少采集10份樣本(每份樣本包括20 g根系及50 g介質(zhì)).將各樣本裝入自封袋內(nèi)，貼上標(biāo)簽，并注明植株癥狀特點(diǎn)、介質(zhì)類型、采集地及采集時間.

1.2 線蟲的分離、殺死、固定及染色

將一部分根剪成0.5 cm左右的碎段并與栽培介質(zhì)混合，用改良貝爾曼漏斗法［8］分離寄生線蟲.分離獲得的線蟲經(jīng)緩慢加熱殺死后，用TAF固定液固定和保存.另一部分根組織經(jīng)次氯酸鈉—酸性品紅染色法［9］染色后，用雙載玻片壓片，然后用顯微鏡觀察組織內(nèi)的線蟲并確定其侵染性.

1.3 線蟲的測量與鑒定

以TAF為標(biāo)本浮載劑，用倒置顯微鏡對線蟲整體形態(tài)和內(nèi)部結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行觀察和度量，形態(tài)計測采用De Man公式［8］.其中，L=體長，a=體長/最大體寬，b=體長/頭端至食道與腸連接處的距離，b′=體長/頭端至食道末端的距離，c=體長/尾長，c′=尾長/肛門處體寬，V=陰門至頭頂距離×100/體長，T=泄殖腔至精巢最前端距離×100/體長，DGO=背食道腺開口至口針基部球的距離.體環(huán)、側(cè)區(qū)等細(xì)微結(jié)構(gòu)采用掃描電鏡(scanning electron microscopy，SEM)進(jìn)行觀察，線蟲掃描電鏡標(biāo)本的制作采用戊二醛—鋨酸雙固定及臨界點(diǎn)干燥法［10］.

2 結(jié)果與分析

本次調(diào)查共采集了65份袖珍椰子樣本，從根系及根際介質(zhì)中分離鑒定出8種植物寄生線蟲，隸屬于2個目7個科7個屬.其中，咖啡短體線蟲為優(yōu)勢種群，被該線蟲嚴(yán)重寄生的植株根部常表現(xiàn)出壞死、腐爛、不發(fā)新根等癥狀(圖1A);經(jīng)次氯酸鈉—酸性品紅染色法證實(shí)，該線蟲可侵入袖珍椰子根部組織并在根內(nèi)完成侵染循環(huán)(圖1B).其他7種寄生線蟲為零星分布，對植株的危害癥狀不明顯.

2.1 咖啡短體線蟲P.coffeae(Zimmermann，1898)Filipjev＆ Schuurmans Stekhoven，1941

2.1.1 分類地位 隸屬于墊刃目Tylenchida墊刃總科Tylenchoidea短體科Pratylenchidae短體線蟲屬Pratylenchus.

2.1.2 測量值 雌蟲:n=20，L=650(580 －730) μm，a=20.5(17.0 －23.5)，b=6.5(5.7 －7.3)，b'=5.1(4.8－5.4)，c=21.0(18.5 －23.0)，c'=2.3(1.9 －2.6)，V=80.4(76.3 －81.5)，口針長 =17.2(17.0 －17.5) μm，DGO=2.5(2.3 －2.7) μm，尾長度 =30.5(28.4 －35.2) μm，口針基部球高 =2.6(2.5 －2.7) μm，口針基部球?qū)?=3.4(3.2 －3.7) μm，食道腺覆蓋腸的長度 =40.3(36.5 －45.5) μm.

雄蟲:n=20，L=580(550 －620) μm，a=24.3(18.4 －28.5)，b=6.2(5.4 －6.8)，b'=4.0(3.5 －4.7)，c=20.0(17.5 －23.5)，c'=1.8(1.5 －2.1)，T=40.0(30.5 －51.4)，口針長 =17.5(16.5 －20.0) μm，DGO=2.7(2.5 －3.0) μm，尾長度 =30.1(27.6 －33.7) μm，口針基部球高 =2.4(2.0 －2.6) μm，口針基部球?qū)?=2.8(2.6 －3.2) μm，食道腺覆蓋腸的長度 =39.6(32.3 －48.6) μm.

2.1.3 形態(tài)特征(圖1C－G) 雌蟲:蟲體經(jīng)緩慢加熱殺死后僵直或稍向腹面彎曲.體環(huán)明顯，蟲體中部體環(huán)寬0.8－1.2 μm.側(cè)區(qū)約占體寬的1/3，蟲體中部側(cè)區(qū)具4條側(cè)線，側(cè)帶光滑，非網(wǎng)狀，側(cè)線往側(cè)區(qū)前、后減為3、2條.唇區(qū)低，稍縊縮，前緣平，具2個唇環(huán)，頂端唇環(huán)與第2條唇環(huán)寬度幾乎相等，口針發(fā)達(dá).中食道球發(fā)達(dá)，呈卵圓形，食道腺從腹面和側(cè)面覆蓋腸的前端，覆蓋長度為體寬的1.2－2.3倍.排泄孔位于食道—腸瓣門的前方.卵原細(xì)胞前端呈單行排列，陰門橫裂，寬度約占3個體環(huán).后陰子宮囊一般是體直徑的1.0－1.5倍.尾部呈亞圓柱形，多數(shù)尾端具一明顯的凹痕，少數(shù)平截.

雄蟲:其形態(tài)特征與雌蟲基本相似.交合刺纖細(xì)，成對，長約20 μm，引帶長4 μm，交合傘包至尾端，尾較尖.

本鑒定標(biāo)本的形態(tài)特征與原描述［11］一致.

2.2 飾環(huán)矮化線蟲Tylenchorhynchus annulatus(Cassidy，1930)Golden，1971

2.2.1 分類地位 隸屬于墊刃目Tylenchida墊刃總科Tylenchoidea矮化科Tylenchorhynchidae矮化線蟲屬Tylenchorhynchus.

2.2.2 測量值 雌蟲:n=20，L=640(620 －660) μm，a=27.6(25.0 －30.4)，b=4.6(4.2 －5.0)，c=14.6(13.3 －16.7)，c'=2.9(2.7 －3.5)，V=54.3(50.2 －57.8)，口針長 =21.0(20.0 －21.5) μm.

2.2.3 形態(tài)特征(圖1H－I) 雌蟲:蟲體經(jīng)緩慢加熱殺死后朝腹面彎曲，呈“C”形，唇區(qū)稍縊縮，具有3個體環(huán)，體環(huán)明顯.口針發(fā)達(dá)，口針基部球?qū)拡A，背食道腺開口于口針基部球后2.0－2.5 μm處.中食道球呈卵圓形，具有明顯瓣膜，后食道腺呈長梨形，與腸平接.雙卵巢對伸，卵原細(xì)胞呈單行排列，未見受精囊.陰門橫裂，陰道長達(dá)體寬的1/2.尾長約為肛門處體寬的3倍，尾部近圓柱形，末端鈍圓或平截，無環(huán)紋.

本鑒定標(biāo)本的形態(tài)特征與原描述［12］一致，但未分離到雄蟲.

圖1 袖珍椰子根部寄生線蟲危害狀及顯微特征Fig.1 Occurrence symptoms and morphological characteristics of parasitic nematodes in the roots of C.elegans

2.3 雙宮螺旋線蟲 H.dihystera(Cobb，1893)Sher，1961

2.3.1 分類地位 隸屬于墊刃目Tylenchida墊刃總科Tylenchoidea紐帶科Hoplolaimidae螺旋線蟲屬Helicotylenchus.

2.3.2 測量值 雌蟲:n=20，L=630(560 －670) μm，a=24.2(22.5 －27.2)，b=4.4(3.8 －4.8)，b'=4.1(3.5 －4.5)，c=38.7(35.6 －44.8)，V=64.5(62.4 －68.2)，口針長 =28.5(27.5 －30.0) μm.

2.3.3 形態(tài)特征(圖1J－K) 雌蟲:蟲體經(jīng)緩慢加熱殺死后呈螺旋狀，體環(huán)明顯.唇區(qū)呈半球形，口針發(fā)達(dá)，基部球明顯，背食道腺開口于口針基部球后7.5－10.0 μm處，排泄孔位于食道腺與腸交界的前端，食道腺覆蓋于腸的腹面.雙生殖腺對伸，后生殖腺退化為短的后陰子宮囊.尾向腹面彎曲，呈圓錐形，腹末有小的腹尾突.

本鑒定標(biāo)本的形態(tài)特征與原描述［13］相符，雄蟲非常罕見.

2.4 雙尾滑刃線蟲 Aphelenchoides bicaudatus(Imamura，1931)Filipjev＆ Schuurmans Stekhoven，1941

2.4.1 分類地位 隸屬于滑刃目Aphelenchida滑刃總科Aphelenchoididea滑刃科Aphelenchoidinae滑刃線蟲屬Aphelenchoides.

2.4.2 測量值 雌蟲:n=20，L=520(430 －610) μm，a=29.4(27.5 －36.8)，b=6.3(5.7 －7.1)，c=11.7(10.2 －14.5)，c'=4.8(4.2 －5.8)，V=67.6(65.4 －70.9)，口針長 =10.7(10.0 －12.5) μm.

2.4.3 形態(tài)特征(圖1L－N) 雌蟲:蟲體經(jīng)緩慢加熱殺死后略向腹面彎曲.體表環(huán)紋細(xì)，頭部稍有縊縮，無唇環(huán)，口針長、纖細(xì)，基部球小.中食道球近球形，幾乎充滿整個體腔.食道腺呈長葉狀，從背面覆蓋腸的前端.陰門橫裂.單卵巢前伸，前端可延伸至食道腺末端.卵原細(xì)胞呈單行排列.后陰子宮囊短，其長度約為體寬的1.5倍.尾呈圓錐形，尾端呈二叉狀，腹尾突較明顯.

本鑒定標(biāo)本的形態(tài)特征與原描述［14］一致，但未分離到雄蟲.

2.5 蘑菇滑刃線蟲Aphelenchoides composticola Franklin，1957

2.5.1 分類地位 隸屬于滑刃目Aphelenchida滑刃總科Aphelenchoididea 滑刃科Aphelenchoidinae滑刃線蟲屬Aphelenchoides.

2.5.2 測量值 雌蟲:n=20，L=740(620 －900) μm，a=31.4(30.4 －34.7)，b=7.0(6.6 －8.0)，c=14.3(13.2 －15.7)，c'=3.6(3.4 －3.8)，V=70.2(65.8 －76.3)，口針長 =11.5(10.0 －12.5) μm.

雄蟲:n=20，L=650(540 －710) μm，a=32.5(28.6 －34.8)，b=6.7(6.3 －7.4)，c=17.5(16.5 －18.6)，c'=2.4(2.3 －2.5)，T=56.5(53.8 －62.3)，口針長 =11.5(10.0 －12.5) μm，交合刺長 =20.5(17.5 －22.5) μm.

2.5.3 形態(tài)特征(圖1O－Q) 雌蟲:蟲體經(jīng)緩慢加熱殺死后稍向腹面彎曲.唇區(qū)圓，稍縊縮，頭部骨架較弱.口針纖細(xì)，口針基部球小.食道的前體部呈圓柱形，中食道球大，食道腺呈長葉狀，從背面覆蓋腸的前端.單卵巢前伸，有時前端達(dá)到背食道腺的后緣.后陰子宮囊長度大于蟲體陰門處體寬的2倍.尾呈圓錐形，向腹面彎曲，末端鈍圓，腹面具一尾尖突.

雄蟲:其形態(tài)與雌蟲相似，但較短小，殺死后尾部的彎曲度更大.單精巢，前端可達(dá)到食道腺，精母細(xì)胞呈單行排列.交合刺成對，稍向腹面彎曲.尾部呈圓錐形，末端具一尾尖突.

本鑒定標(biāo)本的形態(tài)特征與原描述［15］相符，但蟲體較大，可能與其營養(yǎng)條件有關(guān).

2.6 燕麥真滑刃線蟲Aphelenchus avenae Bastian，1865

2.6.1 分類地位 隸屬于滑刃目Aphelenchida真滑刃總科Aphelenchidea真滑刃科Aphelenchidae真滑刃線蟲屬Aphelenchus.

2.6.2 測量值 雌蟲:n=20，L=750(550 －960) μm，a=32.4(28.5 －35.8)，b=5.4(4.2 －6.8)，b'=4.2(3.0 －5.6)，c=28.5(24.2 －32.5)，V=76.8(75.5 －80.5)，口針長 =15.0(13.8 －15.5) μm.

2.6.3 形態(tài)特征(圖1R－S) 雌蟲:蟲體呈圓柱狀，經(jīng)緩慢加熱殺死后稍向腹面彎曲，兩端漸細(xì).頭端鈍圓或扁平，無縊縮，具3－4個頭環(huán).角質(zhì)膜環(huán)紋細(xì)，側(cè)帶上有10條側(cè)線，極不明顯.口針不明顯、細(xì)長，不具有口針基部球.中食道球大，幾乎充滿整個體腔，背食道腺開口于中食道球內(nèi)，食道腺從背面覆蓋腸.陰門橫裂，有明顯的后陰子宮囊.卵巢長，向前伸至近食道腺末端與腸交接處.尾較短，為體寬的1.5－2.5倍，末端呈半圓或?qū)拡A形.

本鑒定標(biāo)本的形態(tài)特征與原描述［16］相符，但未分離到雄蟲.

2.7 食菌莖線蟲Ditylenchus myceliophagus Goodey，1958

2.7.1 分類地位 隸屬于墊刃目Tylenchida墊刃總科Tylenchoidea?？艫nguinidae莖線蟲屬Ditylenchus.

2.7.2 測量值 雌蟲:n=20，L=650(580 －800) μm，a=35.5(32.4 －38.5)，b=5.8(5.1 －6.3)，c=11.5(11.2 －14.4)，c'=3.6(3.4 －4.9)，V=80.0(76.5 －82.4)，口針長 =8.5(7.5 －10.0) μm.

雄蟲:n=20，L=600(550 －750) μm，a=32.8(30.5 －38.2)，b=6.2(5.4 －7.0)，c=11.7(10.8 －13.4)，c'=3.4(2.8 －3.7)，口針長 =8.7(7.5 －10.0) μm，交合刺長 =16.5(15.0 －17.5) μm.

2.7.3 形態(tài)特征(圖1T－U) 雌蟲:蟲體經(jīng)緩慢加熱殺死后僵直或稍向腹面彎曲.唇區(qū)平，不縊縮，骨質(zhì)化弱.口針纖細(xì)，基部球小，呈圓形.背食道腺開口于口針基部附近，后食道腺體呈洋梨形，從背面或腹面稍覆蓋于腸的前端，排泄孔位于后食道腺的前半部.單卵巢前伸，卵原細(xì)胞呈單行排列，具后陰子宮囊，可達(dá)陰門到肛門距離的40%左右.尾呈錐形，末端細(xì)圓.

雄蟲:蟲體前部與雌蟲相似.交合傘呈翼狀，從交合刺基部包至尾長的3/4處.交合刺成對，向腹面彎曲.尾部呈圓錐形，末端鈍圓.

本鑒定標(biāo)本的形態(tài)特征與原描述［17］相符.

2.8 普通絲尾墊刃線蟲Filenchus vulgaris(Brzeski，1963)Lownsbery＆ Lownsbery，1985

2.8.1 分類地位 隸屬于墊刃目Tylenchida墊刃總科Tylenchoidea墊刃科Tylenchidae絲尾墊刃屬Filenchus.

2.8.2 測量值 雌蟲:n=13，L=450(420 －530) μm，a=28.4(26.1 －33.5)，b=5.3(4.6 －5.6)，c=4.4(3.7 －5.2)，c'=10.6(7.5 －11.4)，V=60.0(50.6 －68.5)，口針長 =10.5(10.0 －11.3) μm.

2.8.3 形態(tài)描述(圖1V－W) 雌蟲:蟲體小，經(jīng)緩慢加熱殺死后稍向腹面彎曲.體表環(huán)紋細(xì)，頭部連續(xù)，前端平圓.口針纖細(xì)，有小的基部球.食道腺呈梨形，與腸平截.排泄孔位于食道腺前端水平處.單生殖管前伸，卵原細(xì)胞呈單行排列.陰門位于蟲體中后部，橫裂.尾均勻變細(xì)，末端呈絲狀，尾長是陰肛距的1－1.5倍.

本鑒定標(biāo)本的形態(tài)特征與原描述［18］相符，但未分離到雄蟲.

3 討論

本研究對福州市袖珍椰子根部及根際介質(zhì)中的寄生線蟲種類進(jìn)行了較系統(tǒng)的調(diào)查，共分離、鑒定出7個屬8種寄生線蟲，表明其寄生線蟲種類具有一定的多樣性.通過次氯酸鈉—酸性品紅染色法染色及癥狀觀察發(fā)現(xiàn)，咖啡短體線蟲大量存在于袖珍椰子根部及根際介質(zhì)中，并可造成根系壞死、腐爛.咖啡短體線蟲作為一種重要的植物寄生線蟲，常誘發(fā)微生物感染，導(dǎo)致根部腐爛［11，19］.鑒于咖啡短體線蟲的嚴(yán)重危害性，建議勿將受害植株外運(yùn)，已發(fā)病的植株可采用20%好年冬乳油、10%克線丹顆粒劑等殺線蟲劑進(jìn)行防治，枯死植株挖出后集中燒毀.

飾環(huán)矮化線蟲、雙尾滑刃線蟲、蘑菇滑刃線蟲、食菌莖線蟲和普通絲尾墊刃線蟲為我國袖珍椰子上的首次報道.其中，矮化線蟲和螺旋線蟲為害后也表現(xiàn)為根系生長不良等癥狀［12－13，20］.而雙尾滑刃線蟲可與擬莖點(diǎn)霉(Phomopsis batatae)復(fù)合侵染，引起福建省甘薯的干裂腐爛?。?1］.因此，在生產(chǎn)上對以上線蟲應(yīng)引起足夠的重視.食菌莖線蟲、蘑菇滑刃線蟲、燕麥真滑刃線蟲及墊刃線蟲都是食菌線蟲，廣泛存在于植株根際，但對植株生長無明顯影響.

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