Th17細(xì)胞相關(guān)因子與尋常型銀屑病的相關(guān)性研究＊

葉 萍，黃偉林，鄭 力

（深圳市羅湖區(qū)人民醫(yī)院：1.皮膚科；2.藥劑科，廣東深圳518001）

根據(jù)產(chǎn)生細(xì)胞因子和生物功能的不同，傳統(tǒng)上將CD4＋T細(xì)胞分為T(mén)h1和Th2細(xì)胞亞群。Th1細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞免疫，Th2細(xì)胞介導(dǎo)體液免疫。最近的研究發(fā)現(xiàn)一類(lèi)不同于Th1和Th2的新型的CD4＋T細(xì)胞亞群，此亞群細(xì)胞產(chǎn)生白細(xì)胞介素（IL）－17、IL－6和腫瘤壞死因子－α（tumor necrosis factor－alpha，TNF－α），被稱(chēng)為 Th17細(xì)胞［1－2］。近年來(lái)，Th17細(xì)胞及其相關(guān)的細(xì)胞因子的作用越來(lái)越受到人們的關(guān)注。本研究中，采用雙抗體夾心親和素－生物素過(guò)氧化物酶復(fù)合物酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ABC－ELISA）對(duì)不同病情嚴(yán)重程度的銀屑病患者血清中Th17細(xì) 胞 相 關(guān) 因 子IL－17、IL－23、IL－6 和 轉(zhuǎn) 化 生 長(zhǎng) 因 子－β（transforming growth factor beta，TGF－β）的水平進(jìn)行檢測(cè)，以探討Th17細(xì)胞相關(guān)因子在銀屑病發(fā)病中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2009年10月至2010年3月在本院及協(xié)作醫(yī)院皮膚科門(mén)診就診的尋常性銀屑病患者30例（銀屑病組），其中男20例，女10例，年齡16～65歲，病程2周至20年，按病情分為兩組：靜止期組11例，進(jìn)行期組19例。入選標(biāo)準(zhǔn)：（1）臨床確診為尋常性銀屑?。唬?）2個(gè)月內(nèi)未使用維A酸類(lèi)藥物、糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑等系統(tǒng)治療，2周內(nèi)無(wú)外用藥物治療；（3）入選病例簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并嚴(yán)重心、肝、腎疾患；（2）合并嚴(yán)重感染、惡性腫瘤和其他自身免疫性疾?。唬?）關(guān)節(jié)型、膿皰型和紅皮病型銀屑病。所有銀屑病

表1 各組受檢者4種Th17細(xì)胞相關(guān)因子水平比較（±s，ng／L）

表1 各組受檢者4種Th17細(xì)胞相關(guān)因子水平比較（±s，ng／L）

＊：P＜0.05，＊＊：P＜0.01，與對(duì)照組比較。

組別 n IL－17 IL－23 IL－6 TGF－β進(jìn)行期組 19 13.62±2.43 3 246.39±480.34＊ 7.40±1.25＊＊ 2 682.25±415.41＊靜止期組 11 13.82±2.49 3 111.61±737.20＊ 7.55±1.22＊＊ 2 463.34±653.95對(duì)照組 10 14.19±2.11 2 572.32±351.12 5.61±1.02 2 071.17±358.20

患者均行銀屑病皮損面積和嚴(yán)重程度指數(shù)（PASI）評(píng)分。對(duì)照組10例，男4例，女6例；年齡23～35歲，均為來(lái)本院體檢的健康成年人。3組受檢者年齡、性別差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 主 要 試 劑 IL－17、IL－23、IL－6 和 TGF－β 的 ABCELISA檢測(cè)試劑盒均為美國(guó)R＆D Systems生物試劑公司產(chǎn)品。

1.2.2 Th17細(xì)胞相關(guān)因子的檢測(cè) 采集所有受檢者靜脈血4mL，室溫血液自然凝固10～20min后，離心20min（3 000r／min），收集上清液（如有沉淀形成，應(yīng)再次離心），血清樣本于－70℃凍存。應(yīng)用ELISA方法檢測(cè)外周血血清IL－17、IL－23、IL－6和TGF－β的水平，實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品均設(shè)2個(gè)復(fù)孔，同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照和陰性對(duì)照，以保證檢測(cè)結(jié)果的可靠性。采用酶標(biāo)儀測(cè)定450nm處吸光值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)讀取樣品濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以±s表示。兩組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Sperman相關(guān)性檢驗(yàn)，均為雙側(cè)檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組間4種Th17細(xì)胞相關(guān)因子水平比較 銀屑病患者進(jìn)行期、靜止期組血清IL－23和IL－6水平均明顯高于對(duì)照組（P＜0.05）；進(jìn)行期組 TGF－β水平高于對(duì)照組（P＜0.05），靜止期組TGF－β水平與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；銀屑病患者血清IL－17水平與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。銀屑病患者組間，血清IL－17、IL－23、IL－6和TGF－β水平比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表1。

2.2 銀屑病患者4種細(xì)胞因子水平與PASI的相關(guān)性 銀屑病患者血清IL－23水平為（3 196.97±578.77）ng／L，與PASI評(píng)分呈正相關(guān)（r＝0.424，P＜0.05）；而血清IL－17水平為（13.69±2.41）ng／L、IL－6水平為（7.46±1.22）ng／L、TGF－β水平為（2601.98±515.83）ng／L，與 PASI均無(wú)相關(guān)性（r＝－0.118、r＝－0.043、r＝－0.203，P＞0.05）。

3 討 論

銀屑病是一種多基因遺傳背景下的自身免疫性皮膚病，淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤(rùn)，特別是T淋巴細(xì)胞真皮浸潤(rùn)為其重要的病理特征，這表明免疫系統(tǒng)在該病的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要作用，但具體發(fā)病機(jī)制至今尚不明確。近年來(lái)，關(guān)于銀屑病中Th17細(xì)胞及其相關(guān)細(xì)胞因子的高表達(dá)成為了人們的研究熱點(diǎn)，提示Th17細(xì)胞在銀屑病免疫發(fā)病機(jī)制中可能起關(guān)鍵性作用。

Th17細(xì)胞產(chǎn)生的最重要的效應(yīng)因子是IL－17，其受體在體內(nèi)廣泛表達(dá)［3－4］。IL－17的主要生物學(xué)功能是促進(jìn)炎癥反應(yīng)，與銀屑病的發(fā)生密切相關(guān)［5－6］。有研究對(duì)銀屑病皮損和外周血中Th17細(xì)胞及IL－17進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：Th17細(xì)胞主要出現(xiàn)在銀屑病皮損的真皮層，IL－17mRNA水平高表達(dá)，且隨著疾病嚴(yán)重程度的增加而升高；經(jīng)環(huán)孢素治療后，IL－17的表達(dá)恢復(fù)正常［7－8］。從而證實(shí)了Th17細(xì)胞是銀屑病皮膚炎癥過(guò)程中重要的調(diào)節(jié)因子，也是值得關(guān)注的一個(gè)銀屑病治療的靶因子。但在本研究中并未發(fā)現(xiàn)銀屑病患者（無(wú)論進(jìn)行期組和靜止期組）血清IL－17水平的升高，且IL－17水平與PASI之間也無(wú)明顯相關(guān)性，這與目前的文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果不一致，是否與本組資料例數(shù)較少、銀屑病組PASI評(píng)分較低有關(guān)，有待進(jìn)一步的大樣本研究證實(shí)。

TGF－β和IL－6參與了Th17細(xì)胞的早期分化，IL－23則在分化后期維持 Th17穩(wěn)定分化成熟［5，9］。IL－23、TGF－β和IL－6在完整有效的Th17細(xì)胞保護(hù)性免疫應(yīng)答過(guò)程中都是必不可少的。有研究顯示，銀屑病中，角質(zhì)形成細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞過(guò)度表達(dá)IL－23，IL－23刺激Th17細(xì)胞在真皮中產(chǎn)生IL－17和IL－22，而針對(duì)這些細(xì)胞因子的治療則有利于銀屑病癥狀的改善［10］。陳旭娥等［11］的研究發(fā)現(xiàn)，IL－23 和IL－17在銀屑病皮損組織中高表達(dá)，認(rèn)為IL－23可能通過(guò)誘導(dǎo)幼稚CD4＋T細(xì)胞分化為T(mén)h17細(xì)胞，使其分泌IL－17、IL－6等細(xì)胞因子，從而介入銀屑病的發(fā)病機(jī)制和炎癥反應(yīng)過(guò)程。本研究中，無(wú)論進(jìn)行期組還是靜止期組，IL－23、IL－6和 TGF－β水平均明顯高于對(duì)照組（P＜0.05），在進(jìn)行期組和靜止期組組間比較，IL－23、IL－6和TGF－β水平差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說(shuō)明這些Th17細(xì)胞相關(guān)因子可能參與了銀屑病的免疫發(fā)病機(jī)制，但與銀屑病的病情分期似乎無(wú)明顯相關(guān)。另外，本組資料相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)IL－23水平與PASI之間具有相關(guān)性，而IL－17、IL－6、TGF－β水平與PASI評(píng)分均無(wú)相關(guān)性。

綜合IL－23、IL－6及TGF－β的變化，說(shuō)明銀屑病患者的免疫細(xì)胞功能存在整體異常，由此導(dǎo)致了免疫分子表達(dá)水平的整體失衡，反映了銀屑病整個(gè)復(fù)雜免疫反應(yīng)異常的一個(gè)環(huán)節(jié)，尤其是IL－23水平的失調(diào)有可能在銀屑病復(fù)雜的致病機(jī)制中發(fā)揮了重要的作用［12－13］，這在本研究中似乎也證實(shí)了這一點(diǎn)，最近，有學(xué)者在基因水平上的研究也證實(shí)了IL－23R與銀屑病的相關(guān)性［14－15］，可見(jiàn)，IL－23／IL－23R 通路很可能是銀屑病一個(gè)重要的干預(yù)治療靶向。目前Th17相關(guān)因子與銀屑病關(guān)系的研究尚在起步階段，很多機(jī)制尚不十分清楚，仍需要今后更多的研究和發(fā)現(xiàn)。

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