特異性免疫對(duì)哮喘患兒自然殺傷細(xì)胞和嗜堿性細(xì)胞的影響

黃瑞如

目前，對(duì)過敏性哮喘的治療通常采取的是吸入激素與支氣管擴(kuò)張劑等方法，但該法通常只能治標(biāo)，不能治本，而特異性免疫治療則可以起到標(biāo)本兼治的功效[1]。本研究主要就特異性免疫治療對(duì)哮喘患兒自然殺傷細(xì)胞和嗜堿性細(xì)胞的影響進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2010年3月-2012年2月收治120例對(duì)屋塵螨過敏的哮喘患兒。男72例，女48例；年齡在3～14歲，平均年齡為（7.73±1.56）歲。114例為輕度哮喘，6例為中度哮喘。將其隨機(jī)分成對(duì)照組60例和試驗(yàn)組60例。兩組患兒年齡、性別、病情輕重等方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。詳見表1。

表1 兩組患者的一般資料

1.2 治療方法 對(duì)對(duì)照組患兒予以12個(gè)月療程的吸入糖皮質(zhì)激素治療。試驗(yàn)組在對(duì)照組基礎(chǔ)上給予特異性免疫治療。此治療分為兩個(gè)步驟開展：（1）初始治療：按照注射液濃度可以分為 4種，即 100SQ-U/mL、1000SQ-U/mL、10000SQ-U/mL、100000SQ-U/mL。1周進(jìn)行1次注射，注射量分別為100SQU/mL：0.2mL、0.4mL、0.8mL，1000SQ-U/mL：0.2mL、0.4mL、0.8mL，10000SQ-U/mL：0.2mL、0.4mL、0.8mL，100000SQ-U/mL：0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.8mL、1.0mL。初始治療階段患兒所能接受的最大劑量即為維持劑量。(2)維持治療：通常以100000SQ-U/mL的1.0mL作為維持劑量。在維持治療階段，2周進(jìn)行第一針的注射，4周再進(jìn)行第2針的注射，每隔6周施行一次維持劑量注射治療[2]。需要注意的是，在每次注射的前后，需要對(duì)患兒的血壓進(jìn)行測量、對(duì)心肺功能進(jìn)行檢查，并檢測PEF值，且注射完畢后，務(wù)必對(duì)患兒進(jìn)行30min的診室觀察，看是否存在不良反應(yīng)，若有不良反應(yīng)應(yīng)及時(shí)采取對(duì)應(yīng)措施。

1.3 測定指標(biāo)

1.3.1 自然殺傷細(xì)胞活性的測定 取3mL肝素抗凝靜脈血，并用PBS液按照2∶1的比例進(jìn)行稀釋，再利用淋巴細(xì)胞分離液對(duì)淋巴細(xì)胞進(jìn)行分離，之后用RPMP1640對(duì)其進(jìn)行2次洗滌，控制細(xì)胞數(shù)為每毫克2×106以備用；以RPMP1640（10%的小牛血清含量）對(duì)細(xì)胞系K562進(jìn)行連續(xù)傳代，經(jīng)過1～2d傳代后，按照效應(yīng)細(xì)胞洗滌方法對(duì)靶細(xì)胞進(jìn)行洗滌，控制細(xì)胞數(shù)為每毫克2×105以備用；細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)配備自然殺死細(xì)胞試驗(yàn)管、最大釋放管、自然釋放管，以NP40對(duì)靶細(xì)胞進(jìn)行破壞，以作最大釋放。在96孔酶標(biāo)板中加樣，并于5%CO2、37℃的溫箱中進(jìn)行2h的培養(yǎng)，再將LDH底物混合液加入孔內(nèi)（混合液的成分為PMS、INT、輔酶I），用490nm酶標(biāo)儀進(jìn)行讀數(shù)[3]。自然殺傷細(xì)胞活性的計(jì)算公式為：自然殺傷率=（測定管-自然釋放管）/（最大釋放管-自然釋放管）×100%。

1.3.2 嗜堿性細(xì)胞的測定 取1mL的EDTA抗凝靜脈血，將 CD3-PerCP單抗20μL和CRTH2-AlexaFlour647單抗5uL加入100μL的血樣中，置于避光的室溫環(huán)境中進(jìn)行15min的孵化；加入經(jīng)1∶10稀釋的2mL裂解液于上述樣本中，用于紅細(xì)胞的溶解，經(jīng)過10min的溫室避光處理后，2270×g離心5min，棄上清液[4]；加入2mL PBS液于上述樣本中，1次清洗之后，離心并棄上清液，再加入PBS液，最后進(jìn)行上機(jī)檢測。嗜堿性細(xì)胞的測定選用流式細(xì)胞儀，上述單克隆抗體來自于BD公司。

1.3.3 DP-IgE、血清總IgE以及ECP水平的測定 DPIgE與ECP選用瑞典 熒光酶標(biāo)法進(jìn)行測定。血清總IgE的測定采用的是我院實(shí)驗(yàn)室的同位素放射免疫法。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS13.0軟件統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 治療前后兩組自然殺傷細(xì)胞的活性、嗜堿性細(xì)胞的表達(dá)、DP-IgE、血清總IgE以及ECP水平變化情況

對(duì)照組患兒自然殺傷細(xì)胞活性為（10.12±2.51）%，相比于實(shí)驗(yàn)組患兒的（12.02±1.39）%明顯要低，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

表2 兩組患兒自然殺傷細(xì)胞的活性、嗜堿性細(xì)胞、DP-IgE、血清總IgE以及ECP水平變化（）

表2 兩組患兒自然殺傷細(xì)胞的活性、嗜堿性細(xì)胞、DP-IgE、血清總IgE以及ECP水平變化（）

組別 病例 自然殺傷細(xì)胞（%） 嗜堿性細(xì)胞（%） DP-IgE（級(jí)） 血清總IgE（IU/mL） ECP（μg/L）治療后 差值 治療后 差值 治療后 差值 治療后 差值 治療后 差值對(duì)照組 60 10.1±2.4 1.5±2.4 0.4±0.1 0.2±0.1 2.9±1.2 0.9±0.8 29.2±28.7 8.8±13.2 505.8±531.6 237.9±97.8試驗(yàn)組 60 12.0±1.5 3.0±1.8 0.4±0.1 0.2±0.2 2.8±1.2 1.4±1.3 27.6±19.7 11.2±15.6 390.9±337.9 329.1±297.2 P值 0.00 0.00 0.14 0.00 0.72 0.03 0.58 0.14 0.80 0.00

2.2 兩組患兒在治療前后的哮喘急性發(fā)作次數(shù)、PEF與C-ACT評(píng)分情況 兩組患兒在經(jīng)過治療后，哮喘急性發(fā)作次數(shù)與治療前相比顯著減少；兩組PEF與C-ACT評(píng)分都比治療前顯著升高，實(shí)驗(yàn)組優(yōu)于對(duì)照組患兒（P<0.05）。見表3。

表3 兩組患兒在治療前后的哮喘急性發(fā)作次數(shù)、PEF與C-ACT變化（）

表3 兩組患兒在治療前后的哮喘急性發(fā)作次數(shù)、PEF與C-ACT變化（）

組別 病例 哮喘急性發(fā)作次數(shù)（次） PEF（%） C-ACT評(píng)分治療前1年 治療后1年 治療前 治療后 治療前 治療后對(duì)照組 60 4.6±2.6 1.8±1.1 18.1±2.3 24.3±1.4 86.9±5.9 92.1±5.6試驗(yàn)組 60 4.6±2.8 0.9±0.8 17.5±2.7 25.5±1.4 87.7±7.1 97.4±6.1 P值 0.67 0.00 0.36 0.00 0.63 0.00

3 討論

哮喘是一類兒童多發(fā)病，長時(shí)間反復(fù)哮喘會(huì)對(duì)兒童的身心造成嚴(yán)重危害[5]。本研究主要分析特異性免疫治療對(duì)哮喘患兒自然殺傷細(xì)胞和嗜堿性細(xì)胞的影響，結(jié)果表明，經(jīng)特異性免疫配合吸入激素治療后的患兒，哮喘急性發(fā)作次數(shù)較治療前顯著減少，同時(shí)也比經(jīng)常規(guī)的吸入糖皮質(zhì)激素治療的效果要好；此外，哮喘的PEF與C-ACT測定結(jié)果提示，經(jīng)特異性免疫配合吸入激素治療后，其控制哮喘的效果比常規(guī)治療更加理想，且患兒的病情更加穩(wěn)定。

通過研究，特異性免疫機(jī)制可對(duì)變態(tài)反應(yīng)中的很多環(huán)節(jié)均有作用，不但對(duì)阻斷性IgG4抗體的合成起到促進(jìn)作用，還對(duì)特異性IgE抗體的合成起到抑制作用，同時(shí)還對(duì)特異性IgE抗體和效應(yīng)細(xì)胞的結(jié)合形成阻礙，對(duì)組胺的釋放起到抑制作用。經(jīng)特異性免疫治療后，患兒的CD25+CD4+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞增多[6]，同時(shí)產(chǎn)生一些免疫變化，比如Th2轉(zhuǎn)變?yōu)門h1，IL-10增多等，使患兒機(jī)體的免疫耐受情況更好。

自然殺傷細(xì)胞為哮喘發(fā)病機(jī)制的一種效應(yīng)細(xì)胞。該細(xì)胞在分泌與合成細(xì)胞因子方面發(fā)揮著很大作用，比如IFN-γ與IL-10等抗炎因子在抑制氣道炎癥方面有著突出的功能：IL-10可以促進(jìn)阻斷性IgG4抗體的合成，進(jìn)而阻斷特異性IgE抗體的合成，以此對(duì)依賴IgE的肥大細(xì)胞與嗜堿性細(xì)胞的活化作用起到下調(diào)作用[7]。

本研究結(jié)果表明，試驗(yàn)組患兒在經(jīng)過1年的治療以后，其自然殺傷細(xì)胞的活性比對(duì)照組明顯要高，這與以往的相關(guān)研究保持一致；試驗(yàn)組患兒DP-IgE與血清總IgE的下降水平也比對(duì)照組明顯要高，表明自然殺傷細(xì)胞的活性得到了提升，促進(jìn)相關(guān)細(xì)胞因子的合成，而對(duì)IgE的合成起到抑制作用，進(jìn)而在特異性免疫反應(yīng)中發(fā)揮作用。此外，哮喘急性發(fā)作次數(shù)減少的另外一個(gè)原因就是，隨著自然殺傷細(xì)胞活性的提高，患兒機(jī)體發(fā)生感染的幾率也相對(duì)降低。

本研究表明，試驗(yàn)組患兒在經(jīng)過1年的治療以后，其嗜堿性細(xì)胞含量對(duì)比對(duì)照組明顯下降。作為一類始動(dòng)細(xì)胞，嗜堿性細(xì)胞會(huì)釋放過敏反應(yīng)物、趨化因子、組織胺等，容易引發(fā)過敏性炎癥，是哮喘急性發(fā)作的活性因子。而糖皮質(zhì)激素則能有效減少嗜堿性細(xì)胞含量，配合特異性免疫治療，則能對(duì)外周血嗜堿性細(xì)胞的數(shù)量起到進(jìn)一步的減少作用，該作用機(jī)制仍需不斷研究。

綜上所述，特異性免疫配合吸入糖皮質(zhì)激素用于哮喘患兒的治療，其控制哮喘的效果比常規(guī)治療更加理想，且患兒的病情更加穩(wěn)定；同時(shí)，此種治療方案還能有助于自然殺傷細(xì)胞活性的顯著提高，并對(duì)嗜堿性細(xì)胞含量進(jìn)行相應(yīng)減少。

[1]趙瑜，陳偉，譚永強(qiáng)，等.特異性免疫治療對(duì)哮喘患兒自然殺傷細(xì)胞和嗜堿性細(xì)胞的影響[J].臨床兒科雜志，2013，31(1):73-76.

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[5]向莉，王煒，馮暉，等.屋塵螨特異性免疫治療的哮喘患兒對(duì)塵螨過敏原免疫反應(yīng)的變化[J].生物醫(yī)學(xué)工程與臨床，2011，15(5):470-474.

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