肝癌組織中轉(zhuǎn)化生長因子β1表達(dá)與Treg浸潤的關(guān)系及臨床意義

梁芳 張青松 柯洋 張小杰

轉(zhuǎn)化生長因子作為多功能細(xì)胞因子，能夠抑制腫瘤細(xì)胞生長。而TGF-β則能夠誘導(dǎo)腫瘤局部Treg細(xì)胞聚集，從而導(dǎo)致腫瘤局部免疫微環(huán)境調(diào)節(jié)受到影響。部分臨床研究顯示肝癌患者外周血中及肝癌瘤旁組織中treg均呈現(xiàn)出明顯增高表現(xiàn)，同時(shí)對(duì)患者預(yù)后產(chǎn)生一定的影響，而臨床研究已經(jīng)證實(shí)，TGF-β能夠?qū)δ[瘤組織旁T細(xì)胞產(chǎn)生誘導(dǎo)作用，使之轉(zhuǎn)化為Treg［1］。然而目前臨床關(guān)于轉(zhuǎn)化生長因子β1表達(dá)與Treg浸潤的關(guān)系研究尚不能明確，因此作者對(duì)鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院5例肝癌患者進(jìn)行研究，具體研究報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本院自2011年1月～2013年1月收治的85例肝癌患者，男63例，女22例，年齡22～73歲，平均年齡(47.62±5.2)歲。患者UICC分期:Ⅰ期44例，Ⅱ期16例，Ⅲ期13例，Ⅳ期12例。所有患者均行根治性手術(shù)切除治療，取其肝癌組織及癌旁組織作為研究標(biāo)本。所有患者均未接受任何免疫治療及抗腫瘤治療，均為原發(fā)腫瘤的首次治療。

1.2 方法 采用免疫組化三步法對(duì)獲得的患者肝癌及癌旁組織中的Foxp3表達(dá)及TGF-β進(jìn)行檢測，具體如下:將手術(shù)標(biāo)本取出后，用甲醛并固定，石蠟包埋，待拉塊成形后，連續(xù)將標(biāo)本切為4～5μm厚的切片，抗原修復(fù)后，37℃孵育，完成后將一抗加入，使用抗體均為bopster生物公司生產(chǎn)，使用抗體均經(jīng)測試，最佳實(shí)驗(yàn)濃度設(shè)為1∶100。Foxp3陽性對(duì)照選用人體脾臟，PBS代替一抗后作為陰性對(duì)照。所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果均由本科室主治以上級(jí)別病理科醫(yī)生分別閱片，并對(duì)分值進(jìn)行計(jì)算。

1.3 結(jié)果判定 根據(jù)TGF-β胞漿染色程度及面積大小進(jìn)行評(píng)分，陽性面積0為1分，陽性面積小于10%為2分，陽性面積10% ～50%為2分，陽性面積51% ～80%為3分，陽性面積大于80%為4分。染色強(qiáng)度，染色為淡黃色、弱陽性為1分，染色為黃色，經(jīng)仔細(xì)辨認(rèn)能夠看到棕黃色、中陽性為2分，染色棕黃色，強(qiáng)陽性為3分?？傇u(píng)分則采用面積與強(qiáng)度的成績所得積分作為最終得分。4分作為評(píng)價(jià)分界:高表達(dá)組 ＞4分，低表達(dá)組≤4分［2］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，組間對(duì)比采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肝癌腫瘤組織及癌旁組織中Foxp3表達(dá)及TGF-β Foxp3染色陽性細(xì)胞較為均勻的分布在肝癌組織中，肝癌組織中Treg平均密度為2.58個(gè)/HP，癌旁組織中則基本不存在。肝癌組織及癌旁組織中均無TGF-β表達(dá);肝癌組織及癌旁組織中，高表達(dá)組(49)(60)均明顯多于低表達(dá)組(36)(25)(P＜0.05)，高表達(dá)陽性率分別為57.6%、70.1%;肝癌組織及癌旁組織高表達(dá)陽性率間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05，具體見表1。

表1 肝癌組織及癌旁組織中Foxp3表達(dá)及TGF-β情況

2.2 肝癌組織中Foxp3表達(dá)及TGF-β與Treg細(xì)胞浸潤相關(guān)性 經(jīng)Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，肝癌組織中Foxp3表達(dá)及TGF-β呈正相關(guān)關(guān)系，肝癌組織中TGF-β表達(dá)與Treg浸潤呈正相關(guān)(r=0.1215，P=0.0136)。

3 討論

TGF-β與細(xì)胞分化、增殖、細(xì)胞外基質(zhì)形成有著直接關(guān)系，而其在腫瘤中的作用則是十分復(fù)雜的，既可促進(jìn)腫瘤生長，又能對(duì)腫瘤生長產(chǎn)生抑制作用，目前臨床關(guān)于肝癌組織中TGF-β表達(dá)存在一定差異，Bedossa等與Paik之間研究存在較大差異，Paik等研究認(rèn)為TGF-β在肝癌組織中的表達(dá)低于癌旁組織［3］，與本次研究基本一致，對(duì)于臨床出現(xiàn)的差異可能與研究人數(shù)及使用方法的不同有關(guān)。Treg作為T淋巴細(xì)胞亞群，能夠通過直接分泌或接觸細(xì)胞因子的釋放從而抑制效應(yīng)性T細(xì)胞的功能及增殖，從而參與腫瘤的免疫逃逸。因此通過清除Treg從而實(shí)現(xiàn)機(jī)體免疫應(yīng)答的提高是臨床治療的有效手段，然而部分臨床研究顯示，Treg清除一段時(shí)間后，水平又重新恢復(fù)，影響臨床靶向治療，影響患者康復(fù)。本次研究中，通過對(duì)患者肝癌組織及癌旁組織標(biāo)本研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β表達(dá)在肝癌組織中的表達(dá)明顯低于肝癌組織，同時(shí)肝癌組織中TGF-β表達(dá)與Treg浸潤呈正相關(guān)，然而本次研究尚未對(duì)肝癌組織中轉(zhuǎn)化生長因子β1表達(dá)與臨床特征及預(yù)后進(jìn)行表達(dá)，尚需進(jìn)一步研究。

［1］ 林國和．肝癌組織中TGF-β表達(dá)與Treg浸潤的關(guān)系及其臨床意義．癌癥，2010，29(04):442-447.

［2］ 張冠華．人腦膠質(zhì)瘤組織中轉(zhuǎn)化生長因子β表達(dá)與Treg浸潤的關(guān)系．細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2011，27(06):680-682.

［3］ 雷玉潔．非小細(xì)胞肺癌患者轉(zhuǎn)化生長因子β水平與機(jī)體免疫狀態(tài)的關(guān)系．中國臨床醫(yī)學(xué)，2011，18(5):762-763.