前列腺癌組織P504S、E-Cadherin和bcl-2蛋白表達(dá)及意義

溫 爽，蓋 宇，宗華鳳，劉志敏，智慧蘭，劉天卿

(大連市友誼醫(yī)院病理科，遼寧大連 116001)

前列腺癌組織P504S、E-Cadherin和bcl-2蛋白表達(dá)及意義

溫 爽，蓋 宇，宗華鳳，劉志敏，智慧蘭，劉天卿

(大連市友誼醫(yī)院病理科，遼寧大連 116001)

目的 分析前列腺癌中P504S、E-Cadherin和bcl-2蛋白的表達(dá)情況，探討其在前列腺癌診斷及預(yù)后判斷中的意義。方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)(Max Vision)法檢測45例前列腺腺泡腺癌、6例前列腺高級別上皮內(nèi)腫瘤及10例前列腺增生組織中P504S、E-Cadherin和bcl-2蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果 P504S蛋白陽性率前列腺癌組(84.4%)明顯高于前列腺高級別上皮內(nèi)腫瘤組(50.0%)和前列腺增生組(0%)(P＜0.05);E-Cadherin蛋白陽性率前列腺癌組(42.2%)和前列腺高級別上皮內(nèi)腫瘤組(33.3%)明顯低于前列腺增生組(100%)(P＜0.05);bcl-2蛋白陽性率前列腺癌組(60.0%)明顯高于前列腺高級別上皮內(nèi)腫瘤組(16.7%)和前列腺增生組(20.0%)(P＜0.05)。前列腺癌Gleason 8～10分組E-Cadherin蛋白的表達(dá)率(31.8%)明顯低于2～4分組(83.3%)(P＜0.05);8～10分組bcl-2蛋白的表達(dá)率(68.2%)明顯高于2～4分組(33.3%)(P＜0.05)。前列腺癌 Gleason8～10分組(18.2%)和 5～7分組(17.6%)E-Cadherin蛋白的強(qiáng)陽性表達(dá)率明顯低于 2～4分組(83.3%)(P＜0.05)。前列腺癌組P504S蛋白陽性同時E-Cadherin蛋白陰性的比率(51.1%)明顯高于前列腺增生組(0%)(P＜0.05);前列腺癌組P504S蛋白陽性同時bcl-2陽性的比率(57.8%)明顯高于前列腺增生組(0%)(P＜0.05)。結(jié)論 P504S高表達(dá)、bcl-2高表達(dá)有助于前列腺癌的診斷;聯(lián)合檢測P504S和E–Cadherin，P504S和bcl-2的表達(dá)，可以提高診斷前列腺癌的準(zhǔn)確性。

前列腺癌;免疫組織化學(xué);P504S;E-Cadherin;bcl-2

前列腺癌是男性常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率逐年上升，發(fā)病機(jī)制尚不清楚。目前，前列腺癌的診斷主要依靠穿刺標(biāo)本的活檢。但穿刺標(biāo)本小，病變局限，高分化前列腺癌、高級別上皮內(nèi)腫瘤和前列腺增生難以鑒別，需借助免疫組化染色來輔助診斷。因此需要尋找有效的前列腺癌的標(biāo)記物，并且聯(lián)合應(yīng)用，以提高診斷前列腺癌的準(zhǔn)確性。P504S蛋白存在于過氧化物酶和線粒體上，在側(cè)鏈脂肪酸的氧化中發(fā)揮重要作用［1］。E-Cadherin為鈣依賴性粘附蛋白家族中的重要成員之一，是上皮粘附作用的主要介導(dǎo)物［2-3］。bcl-2 是一種凋亡抑制基因，可延長細(xì)胞的生長期，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生［4］。

本實(shí)驗(yàn)通過分析前列腺癌、前列腺高級別上皮內(nèi)腫瘤及前列腺增生組織P504S、E-Cadherin和bcl-2蛋白的表達(dá)情況，探討前列腺癌的發(fā)病機(jī)制，以期尋找新的前列腺癌標(biāo)記物，提高前列腺癌診斷的準(zhǔn)確性，并能對前列腺癌的診斷和判斷預(yù)后提供幫助。

1 材料和方法

1.1 標(biāo)本來源及分組

收集大連市友誼醫(yī)院2006—2010年間診斷明確的前列腺電切標(biāo)本57例。前列腺腺泡腺癌標(biāo)本45例，年齡55～92歲，平均77歲。依據(jù)WHO2004版泌尿及男性生殖系統(tǒng)腫瘤病理學(xué)分類，Gleason分級系統(tǒng)劃分了5種組織結(jié)構(gòu)分級，Gleason 1～3級的前列腺癌，所有腺體保留上皮極性，可見腺腔;Gleason 4級時，部分上皮細(xì)胞正常極性消失;Gleason 5級時，上皮細(xì)胞極性幾乎完全消失，僅偶爾可見腺腔。其主要與次要組織結(jié)構(gòu)分級相加，得到Gleason評分。本組Gleason 8～10分22例、5～7分17例、2～4分6例。高級別上皮內(nèi)腫瘤標(biāo)本6例(4例來自前列腺癌旁標(biāo)本)，年齡70～85歲，平均77歲;前列腺增生標(biāo)本10例，年齡59～88歲，平均73歲。標(biāo)本經(jīng)中性福爾馬林液固定，石蠟包埋，常規(guī)4 μm厚切片。

1.2 試劑與方法

P504S為濃縮型兔抗人單克隆抗體，工作濃度1∶100。E -Cadherin和 bcl-2為即用型鼠抗人單克隆抗體。P504S抗體購自美國 Santa Cruz公司。E-Cadherin抗體、bcl-2抗體和免疫組織化學(xué)試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)有限公司。采用Max Vision二步法，經(jīng)脫蠟、水化、抗原修復(fù)、過氧化物酶阻斷、添加一抗、添加二抗、DAB顯色、復(fù)染、封片后顯微鏡下觀察。用已知陽性標(biāo)本作陽性對照，PBS取代一抗作空白對照。

1.3 結(jié)果判斷

免疫組織化學(xué)染色結(jié)果評價主要根據(jù)陽性細(xì)胞占所有腫瘤細(xì)胞的比例。P504S和bcl-2，以細(xì)胞質(zhì)著棕黃色為表達(dá)陽性細(xì)胞;E-Cadherin，以細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜著棕黃色為陽性細(xì)胞。顯微鏡下觀察整張切片，P504S蛋白陽性率≤25%為-、26% ～50%為+、51% ～75%為2+、≥76%為3+;E-Cadherin和bcl-2蛋白陽性率≤10%為-、11% ～25%為+、26% ～50%為2+、≥51%為3+。2+和3+為強(qiáng)陽性，1+為弱陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，采用卡方檢驗(yàn)比較兩組間表達(dá)率有無顯著性差異，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 P504S、E -Cadherin和 Bcl-2蛋白在前列腺良惡性病變中的表達(dá)

P504S和bcl-2主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，E-Cadherin表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜(圖1～3)。P504S在前列腺癌和高級別上皮內(nèi)腫瘤組織呈強(qiáng)的彌漫表達(dá)，在前列腺增生組織僅呈灶狀弱的表達(dá)。P504S蛋白的陽性率前列腺癌組明顯高于高級別上皮內(nèi)腫瘤組和前列腺增生組(P＜0.05)。E-Cadherin蛋白的陽性率前列腺癌組和高級別上皮內(nèi)腫瘤組明顯低于前列腺增生組(P＜0.05)。bcl-2蛋白的陽性率前列腺癌組明顯高于高級別上皮內(nèi)腫瘤組和前列腺增生組(P＜0.05)。見表1。

圖3 bcl-2蛋白在前列腺癌中的表達(dá)(10×10)Fig 3 The expression of bcl-2 in prostate cancer

2.2 P504S、E -Cadherin和 bcl-2蛋白表達(dá)與前列腺癌Gleason分級的關(guān)系

前列腺癌E-Cadherin蛋白的陽性表達(dá)率8～10分組明顯低于2～4分組(P＜0.05)。bcl-2蛋白的陽性表達(dá)率8～10分組明顯高于2～4分組(P＜0.05)。E-Cadherin蛋白的強(qiáng)陽性表達(dá)率8～10分組和5～7分組間差異無顯著性意義(P＞0.05)，但均低于2～4分組(P ＜0.05)。見表2。

2.3 P504S與E-Cadherin和bcl-2表達(dá)的關(guān)系

前列腺癌組P504S蛋白陽性同時E-Cadherin蛋白陰性的比率明顯高于前列腺增生組(P＜0.05)。前列腺癌組P504S蛋白陽性同時bcl-2蛋白陽性的比率明顯高于前列腺增生組(P＜0.05)。見表3。

表1 前列腺良惡性病變中P504S、E-Cadherin和bcl-2蛋白的表達(dá)Tab 1 Expression of P504，E-Cadherin and bcl-2 in benign and malignant prostate disease

表2 前列腺癌不同Gleason分級P504S、E-Cadherin和bcl-2蛋白的表達(dá)Tab 2 Expression of P504，E-Cadherin and bcl-2 in prostate carcinoma of different Gleason grade

3 討 論

Xu等［5］于2000年應(yīng)用cDNA文庫剪影法和微檢測法首先從前列腺癌組織中分離出P504S蛋白。P504S基因定位于染色體5p13，編碼382個氨基酸組成的蛋白，在支鏈脂肪酸的氧化中發(fā)揮重要作用。隨后的研究發(fā)現(xiàn)，P504S僅在前列腺癌和高級別上皮內(nèi)腫瘤中呈彌漫的強(qiáng)陽性表達(dá)，在前列腺良性病變中不表達(dá)或有灶狀弱的表達(dá)［6-7］。表明P504S是前列腺癌較為特異和敏感的標(biāo)志物。本研究結(jié)果顯示，P504S蛋白在84.4%的前列腺癌和50.0%的前列腺高級別上皮內(nèi)腫瘤中有彌漫的強(qiáng)陽性表達(dá)，在前列腺增生組織中不表達(dá)，P504S表達(dá)在不同Gleason分級間無顯著性差異(P＞0.05)。因此檢測P504S蛋白有助于前列腺癌和前列腺高級別上皮內(nèi)腫瘤的診斷。本研究結(jié)果與國內(nèi)外學(xué)者的研究結(jié)果基本一致。

表3 P504S與E-Cadherin和bcl-2表達(dá)的關(guān)系Tab 3 Correlation between the expression of P504S and E-Cadherin，bcl-2

人類E-Cadherin基因定位于16q22，編碼含884個氨基酸的多肽。E-Cadherin屬于轉(zhuǎn)移抑制相關(guān)基因，其產(chǎn)物可以通過促進(jìn)上皮細(xì)胞間的粘附，使腫瘤細(xì)胞相互之間保持密切接觸，難以脫離原發(fā)瘤，致局部侵襲或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。目前已發(fā)現(xiàn)腫瘤組織中E-Cadherin蛋白表達(dá)的減弱或缺失是一種普遍現(xiàn)象。該基因的缺失或突變，使細(xì)胞喪失粘附作用，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞間的解離，從而發(fā)生浸潤和轉(zhuǎn)移，這已在甲狀腺乳頭狀癌、膀胱癌、結(jié)腸癌和膽管癌等的研究中得到證實(shí)［8-9］。本組實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，前列腺癌E-Cadherin表達(dá)明顯低于前列腺增生組織，并且前列腺癌的病理分級越高，其陽性表達(dá)率越低。表明E-cadherin表達(dá)減弱與前列腺癌發(fā)生有關(guān)，而且E-Cadherin表達(dá)水平與前列腺癌病理分級相關(guān)。因此檢測前列腺癌組織中E-Cadherin表達(dá)水平將有助于診斷和預(yù)后判斷。本研究同時還顯示，前列腺高級別上皮內(nèi)腫瘤E-Cadherin陽性表達(dá)明顯低于前列腺增生(P＜0.05)，并且在前列腺癌Gleason 8～10分組和5～7分組的強(qiáng)陽性表達(dá)率明顯低于Gleason 2～4分組(P＜0.05)，提示 E-Cadherin蛋白可能在前列腺癌變早期即發(fā)揮作用。本組高級別上皮內(nèi)腫瘤例數(shù)較少，佐證不足，尚需增加例數(shù)做深入研究。

bcl-2是近年來發(fā)現(xiàn)的一種抗凋亡基因，定位于18q21。bcl-2通過抑制細(xì)胞凋亡，延長細(xì)胞壽命，使遺傳物質(zhì)突變率增加，從而增加腫瘤發(fā)生的機(jī)會［10］。有研究表明，胚胎前列腺芽體上皮中有廣泛的bcl-2表達(dá)，而正常成人前列腺中bcl-2蛋白只局限于基底上皮細(xì)胞，分泌上皮中無bcl-2表達(dá)，前列腺癌細(xì)胞可出現(xiàn)bcl-2表達(dá)，提示bcl-2參與了前列腺癌的發(fā)生［11-12］。本研究中發(fā)現(xiàn)，bcl-2 表達(dá)在前列腺癌高于高級別上皮內(nèi)腫瘤和前列腺增生組織，并且前列腺癌病理分級越高，其陽性表達(dá)率也越高，表明檢測前列腺癌組織中bcl-2表達(dá)水平具有診斷和預(yù)后判斷意義。

本研究中，P504S陽性表達(dá)同時E-Cadherin陰性表達(dá)、P504S陽性表達(dá)同時bcl-2陽性表達(dá)在前列腺癌組織中均明顯高于前列腺增生組織。雖然尚不明確P504S與E-Cadherin、P504S與bcl-2蛋白間是否有相關(guān)性，但聯(lián)合應(yīng)用以上蛋白，可以用于前列腺癌的診斷中，并可能提高診斷的準(zhǔn)確性。

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［1］Murray NP，Calaf GM，Badinez L，et al.P504S expressing circulating prostate cells as a marker for prostate cancer［J］.Oncol Rep，2010，24(3):687-692.

［2］Okegawa T，Pong RC，Li Y，et al.The role of cell adhesion molecule in cancer progression and its application in cancer therapy ［J］.Acta Biochim Pol，2004，51(2):445-457.

［3］Baranwal S，Alahari SK.Molecular mechanisms controlling E-cadherin expression in breast cancer［J］.Biochem Biophys Res Commun，2009，384(1):6-11.

［4］Wang G，Reed E，Li QQ.Apoptosis in prostate cancer:progressive and therapeutic implications［J］.Int J Mol Med，2004，14(1):23-34.

［5］Xu J，Stolk J A，Zhang X，et al.Identifieation of differentially expressed genes in human prostate cancer using subtraction and microarray ［J］.Cancer Res，2000，60:1667-1682.

［6］KaiG，Tomasovi-LoncariC.Alpha-methylacyl-CoA racemase(AMACR)in fine-needle aspiration specimens of prostate lesions［J］.Diagn Cytopathol，2009，37(11):803-811.

［7］Vanguri VK，Woda BA，Jiang Z.Sensitivity of P504S/alpha-methylacyl-CoA racemase(AMACR)immunohistochemistry for the detection of prostate carcinoma on stored needle biopsies［J］.Appl Immunohistochem Mol Morphol，2006，14(3):365-373.

［8］Kim NH，Kim SN，Kim YK.Involvement of HDAC1 in E-cadherin expression in prostate cancer cells;its implication for cell motility and invasion［J］.Biochem Biophys Res Commun，2011，404(4):915 -921.

［9］Ashida K，Terada T，Kitamura Y，et al.Expression of E -cadherin，alphacatenin，-catenin and CD44(standard and variant isoforms)in human cholangiocarcinoma:an immunohistochemical study［J］.Hepatology，1998，27(4):974-982.

［10］Yuan J，Kroemer G.Alternative cell death mechanisms in development and beyond ［J］.Genes Dev，2010，24(23):2592-2602.

［11］Colombel M，Symmans F，Gil S，et al.Detection of the apoptosis-suppressing oncoprotein bcl-2 in hormone refractory human prostate cancers［J］.Am J Pathol，1993，143:390-400.

［12］Hockenbery D M，Zutter M，Hickey W，et al.Bcl-2 protein is topographically restricted in tissues characterized by apoptotic cell death［J］.Proc Natl Acad Sci USA，1991，88:6961-6965.

Significances of P504S，E -Cadherin and bcl-2 protein expression in prostate carcinoma

WEN Shuang，GAI Yu，ZONG Hua-feng，LIU Zhi-min，ZHI Hui-lan，LIU Tian-qing
(Department of Pathology，Dalian Friendship Hospital，Dalian116001，China)

［Abstract］ObjectiveTo study the possibility of P504S，E -Cadherin and bcl-2 protein as a marker to diagnose prostate carcinoma.MethodsThe expressions of these proteins were detected by immunohistochemistry(Max Vision)method.ResultsThe expression rate of P504S in prostate carcinoma group(84.4%)was significantly higher than high prostate intraepithelial neoplasia group(50.0%)and prostate gland proliferation group(0%)(P＜0.05);That of E -Cadherin in prostate carcinoma group(42.2%)and high prostate intraepithelial neoplasia group(33.3%)were significantly lower than prostate gland proliferation group(100%)(P＜0.05);That of bcl-2 in prostate carcinoma group(60.0%)was significantly higher than high prostate intraepithelial neoplasia group(16.7%)and prostate gland proliferation group(20.0%)(P＜0.05).The expression of E -Cadherin in 8-10 score group(31.8%)was significantly lower than 2-4 score group(83.3%)(P＜0.05);The expression of bcl-2 in 8 -10 score group(68.2%)was significantly higher than 2 -4 score group(33.3%)(P＜0.05).The strong expression rate of E -Cadherin in 8-10(18.2%)and 5 -7(17.6%)score groups were signifi-cantly lower than 2 -4 score group(83.3%)(P ＜0.05).Both P504S positive and E -Cadherin negative expression rate in prostate carcinoma group(51.1%)was significantly higher than prostate gland proliferation group(0%)(P ＜0.05).Both P504S and bcl-2 positive rate in prostate carcinoma group(57.8%)was significantly higher than prostate gland proliferation group(0%)(P ＜0.05).ConclusionThe high expression of P504S，bcl-2 protein may be helpful to diagnose prostate carcinoma.The diagnosis accurate of prostate carcinoma could be increased by detect the expressions of P504S and E -Cadherin，P504S and bcl-2 proteins.

［Key words］protaste carcinoma;immunohistochemistry;P504S;E -Cadherin;bcl-2

R361

A

1671-7295(2013)02-0123-04

溫爽，蓋宇，宗華鳳，等.前列腺癌組織P504S、E-Cadherin和bcl-2蛋白表達(dá)及意義［J］.大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2013，35(2):123 -126.

10.11724/jdmu.2013.02.06

大連市衛(wèi)生局立項(xiàng)課題

溫 爽(1977-)，女，遼寧大連人，主治醫(yī)師，碩士。E-mail:76560265@163.com

劉天卿，主任醫(yī)生，碩士生導(dǎo)師。E-mail:liutianqing1961@163.com

2012-10-10;

2013-03-19)