參苓白術散對小鼠耐缺氧及抗運動性疲勞作用研究

李淑女

廣東省深圳市松崗人民醫(yī)院藥劑科，廣東深圳 518105

參苓白術散原方出自《太平惠民和劑局方》，由人參、白術、茯苓、甘草、白扁豆、薏苡仁、山藥、砂仁、桔梗、蓮子肉等藥味組成，具有益氣健脾、滲濕止瀉之功效，臨床主要適用于脾虛濕盛證的治療[1]。近年來，有關參苓白術散的研究主要集中在對消化功能促進、免疫功能提升等藥理作用方面，對其提高機體耐缺氧及抗運動性疲勞能力方面的研究尚無報道。本研究觀察了參苓白術散對小鼠負重游泳力竭時間、小鼠常壓耐缺氧存活時間、運動后血漿尿素氮及血乳酸含量等方面的影響，現(xiàn)報道如下：

1 材料與方法

1.1 實驗動物

ICR 小鼠，清潔級，體重（20±2）g，由廣州中醫(yī)藥大學醫(yī)學實驗動物中心提供，動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（粵）2008-0019。

1.2 實驗儀器與材料

參苓白術散方中所需人參、白術、茯苓、甘草、白扁豆、薏苡仁、山藥、砂仁、桔梗、蓮子肉等中藥均由深圳市松崗人民醫(yī)院藥劑科提供；血乳酸試劑盒，血尿素氮試劑盒，肝糖原試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供，批號分別為 20110526、20110612、20110620；UV-5100 型紫外可見分光光度計，上海元析儀器有限公司產(chǎn)品。

1.3 實驗方法

1.3.1 參苓白術散水提物的制備分別將人參、白術、茯苓、甘草、白扁豆、薏苡仁、山藥、砂仁、桔梗、蓮子肉等中藥藥材粉碎成粗粉，按質(zhì)量比 4∶4∶4∶4∶3∶2∶2∶2∶2∶2 配方，以蒸餾水回流提取2次，合并濾液，減壓濃縮呈按生藥質(zhì)量濃度計3.75、2.5、1.25 g/mL 的參苓白術散水提物，置4℃冰箱貯存，備用。

1.3.2 參苓白術散對小鼠負重游泳力竭時間的影響 取小鼠60 只，適應性喂養(yǎng)1周后，進行適應性負重游泳訓練（于各鼠尾根部負荷其體重5%的鉛絲，放入水深30 cm、水溫25℃的水槽中游泳），每隔3 d 訓練1次，共2次，篩選出游泳時間較為接近的小鼠40 只，隨機分為四組，即參苓白術散高、中、低劑量組和空白對照組，每組10 只。參苓白術散高、中、低劑量組小鼠分別以10 mL/kg 的給藥體積灌胃，給予40.0、20.0、10.0 g/kg 的參苓白術散水提物，空白對照組小鼠灌胃給予同體積蒸餾水，1次/d，連續(xù)14 d。末次給藥1 h 后，于各鼠尾部負荷其體重5%的鉛絲，進行負重游泳實驗，觀察并記錄各鼠負重游泳力竭時間，即自小鼠入水至口鼻沒入水下10 s 無抬頭的時間。

1.3.3 參苓白術散對小鼠運動后血漿中尿素氮含量的影響動物分組及給藥方法同“1.3.2”。小鼠末次給藥30 min 后，不負重置于水深 水溫 的水槽中游泳休息60 min 后立即摘眼球取血，肝素抗凝，2 500 r/min 離心15 min分離血漿，用于測定血漿中尿素氮含量。

1.3.4 參苓白術散對小鼠運動后血中乳酸的影響 動物分組及給藥方法同“1.3.2”。末次給藥30 min 后，于各鼠尾部負荷其體重5%的鉛絲，置于水深30 cm、水溫25℃的水槽中游泳10 min，休息20 min 后立即摘眼球取血，用于測定全血中乳酸含量。

1.3.5 參苓白術散對小鼠肝糖原儲備量的影響 動物分組及給藥方法同“1.3.2”。末次給藥30 min 后，立刻脫頸處死，摘取肝臟，用濾紙吸干血跡后，稱取約50 mg 肝臟組織，用于測定肝糖原含量。

1.3.6 參苓白術散對小鼠常壓耐缺氧能力的影響 動物分組及給藥方法同“1.3.2”。末次給藥30 min 后，將各鼠分別放入盛有15 g 鈉石灰的250 mL 廣口瓶內(nèi)，立即以瓶口涂有凡士林的瓶塞密封瓶口，記錄各鼠常壓耐缺氧存活時間（從放入瓶內(nèi)到末次呼吸停止所需時間）。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 17.0 統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料采用均數(shù)±標準差（±s）表示，采用方差分析和LSD-t檢驗，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 參苓白術散對小鼠負重游泳力竭時間的影響

參苓白術散低劑量組小鼠負重游泳力竭時間略長于空白對照組，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；而參苓白術散高、中劑量組小鼠負重游泳力竭時間均顯著長于空白對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）。見表1。

表1 參苓白術散對小鼠負重游泳力竭時間的影響（±s，n=10）

表1 參苓白術散對小鼠負重游泳力竭時間的影響（±s，n=10）

注：與空白對照組比較，*P＜0.05；“-”表示無數(shù)據(jù)

組別 劑量（g/kg） 負重游泳力竭時間（min）空白對照組參苓白術散高劑量組參苓白術散中劑量組參苓白術散低劑量組-40.0 20.0 10.0 161.58±2.31 258.45±3.01*236.78±3.45*180.32±2.09

2.2 參苓白術散對小鼠運動后血漿尿素氮、血乳酸含量的影響

參苓白術散低劑量組小鼠運動后血漿尿素氮、血乳酸含量均略低于空白對照組，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；而參苓白術散高、中劑量組小鼠運動后血漿尿素氮、血乳酸含量均顯著低于空白對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜ 0.05）。見表2。

2.3 參苓白術散對小鼠肝糖原儲備量的影響

參苓白術散低劑量組小鼠體內(nèi)肝糖原儲備量略高于空白對照組，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；而參苓白術散高、中劑量組小鼠體內(nèi)肝糖原儲備量均顯著高于空白對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）。見表3。

2.4 參苓白術散對小鼠常壓耐缺氧能力的影響

參苓白術散低劑量組小鼠常壓耐缺氧存活時間略高于空白對照組，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；而參苓白術散高、中劑量組小鼠常壓耐缺氧存活時間均顯著高于空白對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）。見表4。

表2 參苓白術散對小鼠運動后血漿尿素氮、血乳酸含量的影響（±s，n=10）

表2 參苓白術散對小鼠運動后血漿尿素氮、血乳酸含量的影響（±s，n=10）

注：與空白對照組比較，*P＜0.05；“-”表示無數(shù)據(jù)

組別 劑量（g/kg） 乳酸（mmol/L） 尿素氮（mmol/L）空白對照組參苓白術散高劑量組參苓白術散中劑量組參苓白術散低劑量組-40.0 20.0 10.0 10.28±1.12 6.03±0.56*6.84±0.71*8.62±0.91 16.31±1.70 9.05±0.98*10.28±1.21*13.46±1.51

表3 參苓白術散對小鼠肝糖原儲備量的影響（±s，n=10）

表3 參苓白術散對小鼠肝糖原儲備量的影響（±s，n=10）

注：與空白對照組比較，*P＜0.05；“-”表示無數(shù)據(jù)

組別 劑量（g/kg） 肝糖原（mg/g）空白對照組參苓白術散高劑量組參苓白術散中劑量組參苓白術散低劑量組-40.0 20.0 10.0 11.22±1.25 20.83±2.21*18.69±2.05*13.18±1.42

表4 參苓白術散對小鼠常壓耐缺氧能力的影響（±s，n=10）

表4 參苓白術散對小鼠常壓耐缺氧能力的影響（±s，n=10）

注：與空白對照組比較，*P＜0.05；“-”表示無數(shù)據(jù)

組別 劑量（g/kg） 存活時間（min）空白對照組參苓白術散高劑量組參苓白術散中劑量組參苓白術散低劑量組-40.0 20.0 10.0 21.27±2.30 38.52±4.06*35.28±4.02*25.44±3.15

3 討論

中醫(yī)認為，脾為后天之本，主運化，為氣血生化之源，脾氣虛，則受納與健運乏力，四肢肌肉無所稟受，則四肢乏力；脾氣旺盛，則谷氣自旺，化源不乏，肌肉得溫養(yǎng)，四肢則靈活矯健。參苓白術散方中人參、白術、茯苓為君，益氣健脾滲濕；山藥、蓮子為臣，助君藥健脾益氣，兼能止瀉；白扁豆、薏苡仁亦為臣藥，助君藥健脾滲濕；砂仁為佐藥，醒脾和胃；桔梗宣肺利氣、通調(diào)水道，又可載藥上行，甘草健脾和中、調(diào)和諸藥，共為佐使。諸藥合用，共奏益氣健脾、滲濕止瀉之功效[1]。

機體在劇烈運動或缺氧時，肌肉組織的供氧不能滿足體內(nèi)葡萄糖有氧氧化的需要，大量葡萄糖則通過無氧酵解途徑為機體提供能量，造成糖酵解產(chǎn)物乳酸在體內(nèi)的大量堆積，引發(fā)一系列生化反應，進而造成運動性疲勞[2-4]。同時，因劇烈運動造成機體由糖或脂肪分解而獲得的能量不足時，就會通過分解加蛋白質(zhì)補充能量，進而造成蛋白質(zhì)的代謝產(chǎn)物尿素含量的增加[5]。本研究結(jié)果顯示，參苓白術散水提物可顯著降低小鼠運動后的血中乳酸及尿素氮的含量，提示其可通過減輕小鼠運動后血乳酸堆積而產(chǎn)生抗運動性疲勞的作用，并可阻礙體內(nèi)蛋白質(zhì)分解供能的途徑。

機體劇烈運動時，在體內(nèi)肌糖原消耗的同時，肝糖原儲備量也降低。因此，體內(nèi)肝糖原儲備量的高低是衡量機體抗疲勞能力強弱的重要指標[4]。本研究結(jié)果顯示，參苓白術散水提物可顯著提升小鼠體內(nèi)肝糖原的儲備量，提示其具有促進小鼠肝糖原儲備的作用。

耐缺氧能力是間接反映抗疲勞能力的一項重要指標[6]，本研究以小鼠常壓耐缺氧存活時間為觀察指標，評價了參苓白術散對小鼠常壓耐缺氧能力的影響，結(jié)果提示，參苓白術散可延長小鼠常壓缺氧情況下存活時間。提示其可以增強小鼠機體攜氧和利用氧的能力。

綜上所述，參苓白術散具有延長小鼠常壓耐缺氧存活時間、提高小鼠體內(nèi)有氧代謝水平及抗疲勞的藥理作用，而有關參苓白術散耐缺氧及抗運動性疲勞作用的具體藥效成分及作用機制尚有待于進一步研究。

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