復(fù)方黃連素片中鹽酸小檗堿含量測(cè)定方法改進(jìn)

李茂森

(四川省德陽(yáng)市藥品檢驗(yàn)所，四川 德陽(yáng) 618000)

復(fù)方黃連素片收載于2010年版《中國(guó)藥典(一部)》，由鹽酸 小檗堿、木香、吳茱萸、白芍等4味藥組成，用于濕熱引起的腸道疾病，臨床療效顯著。原標(biāo)準(zhǔn)中采用高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定鹽酸小檗堿的含量，但對(duì)照品和樣品制作過(guò)程較復(fù)雜而煩瑣，增大了對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響因素，致使試驗(yàn)結(jié)果重現(xiàn)性不理想。筆者對(duì)對(duì)照品和樣品制作過(guò)程進(jìn)行了改進(jìn)，并對(duì)其他影響含量結(jié)果的因素加以討論?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

美國(guó)Waters 1525型液相色譜儀，Waters 2487檢測(cè)器，Waters Breeze數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。鹽酸小檗堿對(duì)照品(批號(hào)為0731－9906，中國(guó)藥品生物制品檢定所);復(fù)方黃連素片(批號(hào)為 100906，101003，100803，四川同人泰藥業(yè)有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:SymmetryShieldTMRPC18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:0.033 mol/L磷酸二氫鉀－乙腈(60∶40);檢測(cè)波長(zhǎng):265 nm;柱溫:30 ℃;流速:0.8 mL/min;進(jìn)樣量:10 μL。

2.2 改進(jìn)方法[1]

2.2.1 溶液制備

精密稱取100℃干燥至恒重的鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含60 μg的溶液，即得對(duì)照品溶液。取本品20片，除去糖衣，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量(相當(dāng)于鹽酸小檗堿30mg)，置100 mL量瓶中，加鹽酸－甲醇(1∶100)溶液約75 mL，超聲處理20 min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液，收集續(xù)濾液，精密量取續(xù)濾液2 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.2.2 方法學(xué)考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線制備:精密稱取100℃干燥至恒重的鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含100 μg的備用溶液;精密吸取備用溶液 1.0，2.5，5.0，7.5，10 mL，分別置 10 mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，分別吸取上述溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積并回歸，得回歸方程為Y=1.291 04×10－5X－0.169 22，r=0.999 9(n=5)。結(jié)果表明，鹽酸小檗堿質(zhì)量濃度在10～100 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):取同一對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次。結(jié)果峰面積積分值的RSD=0.92%(n=5)。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，立即測(cè)定和在室溫下放置不同時(shí)間進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果供試品中鹽酸小檗堿的峰面積積分值在5 h內(nèi)穩(wěn)定，RSD=0.52%(n=5)。

重現(xiàn)性試驗(yàn):取同一批(批號(hào)為030803)樣品5份，按樣品測(cè)定方法測(cè)定。結(jié)果平均含量為89.8%，RSD=0.88%(n=5)。

加樣回收試驗(yàn):取已知含量的樣品(批號(hào)為030803)5份，分別添加一定量的鹽酸小檗堿對(duì)照品，按供試品溶液的制備方法制成檢測(cè)溶液，并依法測(cè)定其含量。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.3 藥典方法[2]

對(duì)照品溶液制備:精密稱取100℃干燥5 h的鹽酸小檗堿對(duì)照品約25 mg，置250 mL燒杯中，加沸水約150 mL使溶解，稍冷后加入稀鹽酸3 mL，攪勻，放冷，轉(zhuǎn)移至250 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密量取2 mL，置25 mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。

表1 鹽酸小檗堿加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=5)

供試品溶液制備:取本品20片，除去糖衣，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量(相當(dāng)于鹽酸小檗堿30 mg)，置250 mL燒杯中，加沸水約150 mL使溶解，稍冷后加入稀鹽酸3 mL，攪勻，放冷，轉(zhuǎn)移至250 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，離心(轉(zhuǎn)速為4 000 r/min)，精密量取2 mL，置25 mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 樣品含量測(cè)定

按上述改進(jìn)方法與藥典方法測(cè)定了3批樣品的鹽酸小檗堿含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果(%)

3 討論

供試品除去糖衣的方法對(duì)含量測(cè)定結(jié)果影響較大。方法1:采用低溫加熱后輕輕敲打剝?nèi)ヌ且拢捎谔且聝?nèi)表面鹽酸小檗堿易滲透黏附而剝?nèi)?，使含量結(jié)果偏低。方法2:采用水洗糖衣包衣層(注意不要洗到片芯)，擦干，低溫干燥。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，方法1比方法2含量結(jié)果約低2%，采用方法2結(jié)果更穩(wěn)定準(zhǔn)確。

鹽酸小檗堿對(duì)照品干燥恒重時(shí)要注意嚴(yán)格控制溫度。105℃干燥5 h對(duì)照品顏色由黃色加深至棕色，100℃干燥5 h對(duì)照品由黃色變成暗黃色，溫度對(duì)試驗(yàn)結(jié)果有一定的影響。另外對(duì)照品采用硅膠干燥24 h，對(duì)試驗(yàn)結(jié)果影響最小。不同批次的鹽酸小檗堿對(duì)照品對(duì)試驗(yàn)結(jié)果也有一定的影響。對(duì)照品藥典方法配制的酸水備用液，在冰箱中冷藏保存時(shí)，顏色易加深而且產(chǎn)生絮狀沉淀而變質(zhì)。本法采用100℃干燥至恒重加甲醇溶解對(duì)照品，對(duì)試驗(yàn)結(jié)果影響較小，且能在冰箱中密閉冷藏保存較長(zhǎng)時(shí)間。但采用甲醇作溶劑時(shí)，在3 min左右有一甲醇溶劑峰，應(yīng)注意區(qū)別。

流動(dòng)相和檢測(cè)波長(zhǎng)等均采用了原藥典方法，僅對(duì)對(duì)照品和樣品的制備方法進(jìn)行了改進(jìn)，減小了勞動(dòng)強(qiáng)度和對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響因素。本法操作簡(jiǎn)便，重現(xiàn)性好，可對(duì)復(fù)方黃連素片中的鹽酸小檗堿含量測(cè)定方法的改進(jìn)提供參考依據(jù)，也可作為藥品生產(chǎn)企業(yè)快速檢驗(yàn)中間產(chǎn)品和成品的方法。

[1]WS－10558(ZD－0558)2002，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)(試行)[S].

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2000:1 182.